实验动物的选择和动物实验的准备.ppt

第五章 实验动物的选择 和 动物实验的准备 第一节 医学动物实验课题设计 的基本原则 第二节 生物医学研究的基本途径 第三节 实验动物的选择原则 第四节 选择实验动物应注意的问题 第五节 动物实验准备与描述 第六节 影响动物实验效果的 动物实验技术环节因素 主要内容 第一节 医学动物实验课题设计的基本原则 一、医学科学研究设计的基本原则一、医学科学研究设计的基本原则 二、医学科研工作基本程序二、医学科研工作基本程序 三、医学科研中对实验动物和动物实三、医学科研中对实验动物和动物实 验的验的 有关要求有关要求 一、医学科学研究设计的基本原则 1需要性原则 选择在医疗卫生保健事业中有重 大意义或迫切需要解决的关键问题。 2目的性原则 选题必须目的明确，应目标集中 ，不含糊，不笼统。 3创新性原则 选择前人没有解决或没有完全解 决的问题，善于捕捉有价值的线索，勇于探索、深 化； 4先进性原则 创新性与先进性是密切相关的， 创新往往指科学而言，而先进多对技术而言。 5科学性原则 选题必须有依据，要符合客观 规律，科研设计必须科学，符合逻辑性(手段、方 法、实验)。 6可行性原则 要求科研设计方案和技术路线科学 可行外，还必须具备一定的条件，如：人员、仪器、 动物、试剂等。 7效能性原则 研究中所消耗的人力、物力、财力同 预期成果的科学意义、水平、社会和经济效益等综合 衡量。 上述设计原则可归纳为： 创新性和先进性； 科学性和重复性； 有用性和可控性； 经济性易行性。 二、医学科研工作基本程序 医学科学研究就方法来说是提出假说，验证假说的过 程，其工作程序是紧紧围绕这条主线进行的。 1提出假说、确定题目，是战略性决定： （1）初始意念或提出问题(Original idea or problem)； (2)文献检阅,调查访问(Critical review of literatures)； （3）假说形成，提出设想(Formulation of hypothesis)； （4）陈述问题，开题讨论(Statement of the problem) 2安排实验，验证假说，是战术组织。 (1)实验设计(Experimental design)； (2)实验观察(Experimental investigation) (3)数据资料积累(Accumulation of raw data)。 3总结工作，完成论文，是拿出战果。 （1） 数据资料处理(Treatment Of raw data)； （2）统计分析(Statistic analysis)； (3) 提出结论(Conclusions)。 医学科研工作基本程序及相互关系见下图 初始意念， 提出问题 文献查阅， 调查访问 假说形成， 提出设想 陈述问题， 开题讨论 确定研 究题目 实验 设计 实验 观察 整理实 验结论 分析实验得 出结论 专业设计 统计学设计 5 预实验 正式实验 6 调整实验设计 7 数据资料积累 重 复 8数据处理 9统计分析 10 写出论文 三、医学科研中对实验动物和动物实验的有关要求 医学科研中应用的实验动物应当具备下列完整的资料 品种、品系及亚系的确切名称； 遗传背景或其来源； 微生物检测状况； 合格证书； 饲育单位负责人签名。 应用实验动物应当根据不同的实验目的，选用相应的合格 实验动物。应用不合格实验动物，实验结果是不被承认的。 撰写医学论文时有关实验动物和动物实验方面 的描述，规范与否在一定程度上影响论文的质量。 所描述的主要内容应包括种系、名称、背景资料、 规格，甚至饲养条件和某些处理方式（如麻醉剂的 种类、剂量与方法，给药途径与方法，动物的处死 方法等）。实验动物品系或品种描述要准确，避免 使用通俗称谓。如Wistar大鼠、SD大鼠不能俗称 为大白鼠，昆明种小鼠不能俗称小白鼠。背景资料 中应包括动物来源、遗传学分类及微生物检查合格 证号和饲养环境合格证号。 医学论文中有关实验动物描述的要求 第二节 生物医学研究的基本途径 临床研究实验室研究 研究的对象是病人，目的是研究疾病的发生和发展过程， 提高诊断水平，改进治疗方法。 特点 它是前瞻性研究，即必须直接跟踪。单纯回顾性病例分析并 不是临床试验，因为它没有从一开始就直接观察。同样，临床 流行病学调查中的病例对照研究不是临床试验，因为它也是回 顾性研究。 在临床试验中必须有一种或多种处理。作为处理因素的可以 是预防或治疗某种疾病的方法、设备或制度等。 临床试验必须有对照组，使处理的效应可与之对比。在临床 试验中，可用接受安慰剂或不接受任何处理者作为对照，也可 接受当时认为是标准的治疗者作为对照。 临床实验是以人为对象，因此必须考虑对象的安全及某些伦 理问题。 研究的对象是实验动物和微生物及试管试验，这些都离 不开实验动物。与临床试验相比，动物实验具有以下独特的 特点和优点： 可以更严格地控制实验条件 可以缩短研究周期 可以最大限度地获取反映实验效果的样本和资料 可以进行药物的长期疗效和远期效应的观察 可以进行临床上难以做到或完成的实验 1、临床研究和实验室研究的不同点 研究对象不同：临床研究对象是病人，实验室研究的对象是动 物和细菌等； 实验对象的健康情况不同：临床：不健康；实验室：健康并可 排除各种病因的作用(可选用无细菌动物、纯系动物等)，动物 可用一种病因作用而发生某一疾病； 实验的具体要求(年龄、性别、体重)不同：动物可达到要求而 临床研究则不能达到(动物的遗传性质、特异性可以选择)； 实验条件的选择不同：实验室的温度、光线、饮食、活动范周 等可以严格控制；而临床病人很难达到； 关于药物远期效应：动物可以不考虑，而病人则不行；药物的 长期效果观察：动物可以长期进行，而病人则较难进行。 三、临床研究和实验室研究 比较 2、动物实验的优点 在人体不便进行的研究可在动物身上进行：如增加 痛苦或疾病； 在平时见不到的疾病可在动物身上复制出来：如急 性放射病及烧伤和冻伤等； 可以根据需要观察疾病全过程：可细致的观察疾病 是怎样发生、发展，最后怎样结局的； 实验室条件可以严密控制并且可以进行严密对照； 动物实验符合多快好省，可以大大缩短研究周期： 很多在自然条件下潜伏期或病程长的疾病(如肿瘤 、肺心病等)可以用动物复制成与人类各种相似的 疾病模型。 动物实验也有一些缺点，如动物机体结构和 代谢特点和人有较大差异，所以动物实验的结果 不能完全照搬照抄用于人；有些因素在动物身上 不易观察如头痛及其它精神因素，这是由于动物 没有语言，不能表达主观察觉；实验动物往往是 在麻醉情况下进行实验和观察的，与正常清醒情 况下有一定区别，所以在动物实验设计时必须选 择与人相似的实验动物做实验，实验时注意麻醉 浓度适中和其他各种因素的控制，来克服上述动 物实验的缺点。 3、动物实验的缺点 第三节 实验动物的选择原则 不同的实验有不同的目的、要求，而各种动物 又有各自的生物学特性和解剖生理特征，因而不能 随便选一种动物来进行某项实验研究。事实上，每 项科学实验都有其最适合的实验动物，如果选择得 当，则可节省人力、动物和时间，以最小的代价最 大限度地获得可靠的实验结果。否则，不仅会造成 不必要的浪费，而且会影响实验结果的判断。因此 ，掌握正确的实验动物选择方法非常重要。 一、相似性原则 二、差异性原则 三、易化性原则 四、相容或相匹配原则 五、可获性(或易获得性)原则 六、重复性和均一性原则 实验动物的选择原则实验动物的选择原则 一、相似性原则 结构、功能及代谢的相似性 医学领域内研究的根本目的是解决人类疾病的预防和治 疗，因此应选择那些结构、功能、代谢和人类相似的动物进行 实验。一般来说，实验动物进化层次愈高，其功能、结构愈复 杂，反应也愈接近人类。猴、猩猩、狒狒、长臂猿等灵长类动 物是最类似人的实验动物。它们是研究人类脊髓灰质炎、脑炎 、痢疾、肝炎、麻疹等传染病的理想动物，也是放射医学、牙 科学、生理学、免疫学、营养学的良好动物模型。猕猴生殖生 理和人非常相似，是人类生殖课题研究的首选动物。 近年来发现的一种小型灵长 类动物，体重仅20250g的树鼩 ，在新陈代谢方面比起啮齿动物 与人类更相似，在乙型肝炎、睡 眠生理、疱疹病毒等研究中有重 要用途。 年龄的近似性 选择实验动物时必须了解有关动物的寿命并安排与人的某 年龄时期相对应的动物进行实验研究。 犬与人的年龄对应 动动物种 类类 最长长寿命平均寿命 猩猩3720 狒狒2415 猴3010 犬2010 猫3012 家兔158 豚鼠75 大鼠53 小鼠32 猪2716 山羊189 田鼠32 犬龄龄（ 年） 人 龄龄 （年） 犬 龄龄 （年） 人龄龄（ 年） 115952 2241056 3281160 4341264 5361368 6401472 7441576 8481680 群体分布的相似性 以群体为对象的研究课题，要选择群体基因型、表型分布 与人相似的实验动物。如药物安全性评价、药物筛选时，应 考虑人类与实验动物群体在代谢类型上的差异。通常以封闭 群模拟自然群体基因型动物作为实验研究对象。 生态或健康状况的近似性 在人的生命过程研究中，寻找与人类生态情况相似的替代 模型非常重要。在实验动物的遗传背景、营养及环境背景标 准化后，其生态和健康状况对实验的影响就显得至关重要。 现有的GF（无菌动物）、SPF、CL（清洁动物）和CV（普 通动物）及动物分别代表着不同的微生态模式，具有不同的 特点，适用于不同的研究。在选择时应结合课题目的、研究 方法、实施条件及经费等作综合考虑，然后做出正确选择。 疾病特点的相似性 许多自发或诱发性疾病模型能局部或全部的反映出与人类 相似的疾病过程及临床表现。可根据研究目的，选择合适的 疾病动物模型进行实验研究。 操作实感的相似性 为临床操作打基础的动物实验，应选用与临床操作较接近 的动物。如模拟人类心脏移植，练习手术操作的动物实验， 可选择猪器官作实验材料，因为猪的心脏形态和大小与人很 接近；练习胃肠吻合术、脾切除术等可用犬作实验材料。 二、差异性原则 （尽量选用不同种系存在的某些特殊反应或对刺激敏感的动物） 各种实验动物在基因型、组织型、代谢型、易感性等特点上 的差别也是实验可比性内容。当研究过程中要求以这种差异为 指标或特殊条件时，选用不同种系实验动物的某些特殊反应， 更适合于不同研究目的的需求。 如：家兔颈部的交感神经、迷走神经、减压神经是分别存在 、独立行走的，而人、猪、犬、猫等减压神经并不单独行走， 如果要观察减压神经对心脏的作用，选择家兔更合适；家兔的 胸腔结构与其他动物不同，很适合做开胸和心脏实验。大鼠垂 体-肾上腺系统发达，应激反应灵敏，适于作应激反应和垂体 、肾上腺等内分泌实验；豚鼠易于致敏，适于作过敏性试验； 研究物质的致癌作用，常选用大、小鼠；研究毒物对皮肤局部 作用选用豚鼠和兔；复制动脉粥样硬化常用兔、鸡、鸽；烧伤 、烫伤研究中最好选用小型猪。 三、易化性原则 （尽量选用结构简单又能反映研究指标的动物） 在动物实验过程中，进化程度高、结构功能复 杂的实验动物，有时会给实验条件控制和实验结 果分析带来难以预料的困难。有鉴于此，在确保 研究目标的前提下，可选择结构、功能较简单实 验动物。如选择两栖类进行神经反射弧试验。利 用果蝇寿命短(12d)，染色体数目少（2n=8）等 特点，成功地进行遗传学研究，并确定了染色体 的连锁互换定律。而同样方法若以灵长目动物作 为实验材料，其难度可想而知。 四、相容或相匹配原则 在设计动物实验时，所选用的动物质量等级要 与实验设计、实验条件、实验者的技术、方法及 试剂性能等相匹配。避免应用高精仪器、先进的 技术方法、高纯度的试剂与低质量、非标准化、 反应性能低的动物相匹配，或利用低性能的测试 手段、非标准化的实验设施与高质量、高反应性 能的动物相匹配。如果将经过微生物控制的SPF动 物或无菌动物购回后，饲养在普通环境中进行实 验，无疑也是对实验动物资源的一种浪费。 五、可获性(或易获得性)原则 许多啮齿类实验动物，因其繁殖周期短，具有多胎 性、饲养繁殖容易、遗传和微生物控制反变等特点， 在生物医学实验中应用广泛。如实验大鼠、小鼠是在 生物医学领域用量最多，用途最广的实验动物。而灵 长类大型实验动物，虽然在许多方面有着不可替代的 优越性，但由于繁殖周期长，繁殖率低，饲养管理困 难，价格昂贵等因素而影响了其易获性，能得到普及 使用。 在不影响实验质量的前提下，选用最易获得、最经 济、最易饲养的动物是实验研究时必须坚持的原则。 六、重复性和均一性原则 重复性和均一性是实验结果可靠、稳定的重要保证 。若实验结果不能再现或不稳定，则不能被公认。生物 医学实验应选用标准化实验动物，只有选用标准化的实 验动物，才能排除因遗传上的不均质引起的个体反应差 异，排除动物所携带微生物、寄生虫和潜在疾病对实验 结果的影响，获得可靠的实验结果，并便于在国际上与 同类研究进行比较和交流。在标准化实验动物中，近交 系Fl代动物、突变系动物均有很好的遗传均质性，个体 差异小，而SPF动物则是排除了一切疾病影响的健康动 物。医学科学研究中应杜绝使用随意交配而来的杂种动 物和未经任何微生物控制的非标准动物。 第四节 选择实验动物应注意的问题 选择实验动物应注意的问题选择实验动物应注意的问题 *年龄与体重 *性别 *生理及功能状态 *健康状态 *品系与等级 一、年龄与体重 年龄是一个重要的生物量，实验动物的机体反应性随年龄而有 明显变化。幼年动物往往较成年动物敏感。不同年龄尤其是年龄 差距较大的动物，对药物的毒性反应亦有差异。 大多数实验都选择成年实验动物。因为幼年动物敏感性高， 其实验结果常与成年动物不一致。而老年动物，则因代谢功能降 低，反应不灵敏，如非特殊需要亦不宜选用。因此，急性毒性实 验规定小鼠体重在1822g，但有例外，如慢性实验或长期毒性试 验，由于实验周期长，大多选择幼年和体重较小的实验动物，研 究性激素对机体影响的实验，一定要用幼年或新生的动物。而老 年医学研究，则多选用老年实验动物。对应人60年的老年小鼠约 为1.3年，老年大鼠为1.7年 （文献记载文献中记载老年小鼠月龄 为1224月；老年大鼠为1524月。） 同一实验中，动物体重应尽可能一致，若相差悬殊，则易增 加动物反应的个体差异，影响实验结果的准确性。 二、性别 实验动物对药物的毒性反应有性别差异，并主要表现在 成年动物。一般而言，雌性动物对药物的敏感性高于雄性， 但随着受试物不同而异。如雌性小鼠对四氧嘧啶、叶酸和新 胂凡纳明等药物的敏感性高于雄性小鼠，但雄性小鼠对乙醇 、氨基比林、氯仿、麦角固醇和烟碱等药物的敏感性则明显 高于雌性小鼠。麦角新碱在56周龄雄性大鼠可见镇痛效果 ，但在雌性大鼠则不出现镇痛作用。 一般认为，动物对激素的依存性，是其药物毒性反应性 别差异的主要原因。研究发现小鼠对氨基比林、氯仿，大鼠 对巴比妥类、野百合碱、印防己毒素和海葱，犬对地高辛等 的毒性反应的性别差异，都与性激素有关。 在医学科学研究中，通常选择实验动物应雌雄各半。若发 现有明显的性别差异时，则应分别测定不同性别实验动物的 LD50值。 三、生理及功能状态 实验动物在处于特殊的生理状态如怀孕、哺乳时，其 体重及某些生理生化指指标将有所不同。如在妊娠期间， 许多酶的活性降低，肝微粒体单胺氧化酶对某些外来物的 代谢作用亦碱弱。此时，它们对外界环境因素作用的反应 亦与非怀孕、非哺乳的实验动物有着较大差异。因此一般 实验研究不宜采用怀孕、哺乳的实验动物。但为了某种特 定的实验目的。如为了阐明药物对妊娠及产前胎儿的影响 时，就必须选用妊娠和哺乳期的实验动物（大、小鼠是最 适合用的实验动物）。 动物所处的功能状态不同，也常影响对药物的反应。动 物在体温升高时对解热药较敏感，体温不高时对解热药就 不敏感；血压高时对降压药较敏感，血压低时对降压药就 不敏感。 四、健康状态 动物健康状况对实验结果正确与否有直接的影响。患 病动物对药物的耐受性较健康动物小，而患病动物容易在 实验过程中中毒死亡。患病或营养不良的家兔不易复制出 动脉粥样硬化模型。犬食量不足，体重下降1020后 ，麻醉时间显著延长，甚至因饥饿、创伤等原因导致休克 。为确保实验动物健康，要做好实验前的动物健康检查工 作。 健康检查有如下主要项目：眼睛：瞳孔是否清晰，眼 睛有无分泌物，眼睑有无发炎。耳：耳道是否有分泌物溢 出；耳壳里有无脓疮、血痂。鼻：有无喷嚏以及浆性粘膜 分泌物流出。皮肤：有无创伤，脓疡、疥癣、湿疹。头部 ：姿势是否端正(若有歪斜，常证明有内耳疾患)。胃肠道 ：有无呕吐、腹泻、便秘、肛门口被毛是否洁净。神经系 统：是否有震颤、不全性麻痹等。 五、品系与等级 品系和等级能分别表示实验动物按遗传学控制和微生物控制 的标准化条件。 一般情况下，近交系动物的生物反应稳定性和实验重复性 都较封闭群好；F1代动物生命力强，带有两个亲代品系的特性 ，虽然遗传型是杂合的，但个体间的遗传型和表型都是一致的 ，应用时能获得正确的结论。封闭群动物和杂种动物在实验的 重现性上有较大的误差。 有学者认为动物实验中的差异，25因遗传型的差异，75 受环境影响。不同品系实验动物遗传上的差异，造成其形态 与功能的特性，并导致对刺激的不同反应。 等级是指实验动物的微生物标准化程度。各级动物具有不同 特点，分别适用于不同的研究目的。 急性实验在确信无碍时，可选用微生物级别较低但无疾病 的动物；而慢性实验应选用等级较高动物。移植、接种等实验 的供体和受体应选用级别高、无感染动物。 项项目无菌动动物SPF动动物普通动动物 传传染病无无有或可能有 寄生虫无无有或可能有 实验结实验结 果明确明确有疑问问 应应用动动物数少量少量多或大量 统计统计 价值值很好可能好不准确 长长期实验实验可能好可能好困难难 自然死亡率很低低高 长长期实验实验 存活率约约100%约约90%约约40% 实验实验 的准确设计设计可能可能不可能 实验结实验结 果的讨讨 论论价值值 高中低 无菌动物、SPF动物和普通动物优缺点比较 第五节 动物实验准备与描述 *动物实验的准备与管理 *动物的购入 *动物实验的描述 家兔 一、动物实验的准备与管理 动物实验准备应根据实验目的、实验规模（实验动物数目） 、动物实验周期等来确定。应根据所计划所用的动物等级选择 相应的标准动物实验室。饲养动物的器具、器材，应在动物购 入前准备好，笼盒及盖、饮水瓶在使用前应彻底清洗与消毒， 并检查是否完好、配套。还应准备好笼卡、记录本、垫料、饲 料、台称、温度计、湿度计等必须物品。 实验过程中应按设计要求和饲养操作规程进行饲养管理，定 时定量加水加料，定期更换笼盒与垫料，每笼盒动物饲养数适 当，垫料、饮水、饲料、笼具、实验仪器等按要求消毒灭菌， 并控制好室内环境条件。动物饲养应有专人负责，并做好详细 记录。自然死亡或实验处死的动物尸体，妥善处理。 二、动物的购入 在做好动物实验的各项准备工作之后，按照所确定的实验 动物数量，从具有相应质量合格证的实验动物供应单位订购 所需要的实验动物。购入时，应向供应单位及时索要动物的 遗传背景、微生物背景、质量合格证、动物年龄、体重、健 康营养状况等资料。 动物运输容器应根据动物等级来选择。普通动物可用饲养 笼运输，而清洁级以上动物常用带有过滤介质的瓦楞纸箱装 运，无菌动物则用特制的金属罐运输。 购入动物后，不能直接进入动物实验室，必须先在检疫区 验收和检疫。有条件时应进行病原学检查。检查验收时将雌 雄动物分开，并分笼在隔离区饲养一段时间，以便动物得以 恢复体能并适应新的环境。 动物分组前，应对动物称重。称重应在给食前。每次称重 应固定在同一时间。 三、动物实验的描述 动物实验研究报告或论文中关于实验动物和动物实验的描述主要 有以下内容： 实验动物种名 论文题目应标明实验动物种名，如大鼠正常 心电图100例分析、家兔细菌性角膜炎动物模型的建立。 文中第一次出现实验动物种名时还应用括号注明其拉丁文学名， 并用斜体排印。 实验动物的品种（系） 用不同的实验动物品种（系）做实验 ，由于不同动物其生物学特性不同，会出现不同的实验结果。因 此在论文中应正确而详细的注明使用实验动物品种（系）名称。 关于品种（系）的详细名称可向动物供应单位咨询。 实验动物的来源、遗传背景、微生物背景 所使用的实验动物 来源于何地，是近交系还是封闭群或是杂交F1动物，是近交系第 几代等应在论文中注明，如因其他原因购于市场，也应注明“市 售”或购于何地。实验动物的微生物等级，最近检测结果也应在 论文中注明。 实验动物和动物实验设施合格证 论文中应将供应单位提 供的相应实验动物及动物实验设施合格证的名称、编号、颁 发单位在论文中描写清楚。 实验动物体重、性别、年龄。 实验室环境 温度、湿度、照明度、季节等描写清楚。 动物饲养方式 如动物饲养密度、笼具规格、饲料及垫料 种类、饲料和饮水投喂、消毒等情况。 处理因素的施加方式 如经口灌胃、腹腔注射，手术过程 ，技术线路等 .其他需要说明的问题 如麻醉剂与麻醉方法，取材方法， 材料固定液，动物处死方法等。 总之，动物实验的描述应全面、详细、准确、简练。对实验 动物和动物实验描述清楚的研究论文，不仅可避免学术交流 中争论，而且可提高论文质量，对于从事系列研究和高、精 、尖的研究尤为重要。 第六节 影响动物实验效果 的动物实验技术环节因素 *动物的选择 *实验季节 *昼夜过程 *麻醉深度 *手术技巧 *实验药物 *对照问题 一、动物的选择 选择好适合研究需要的实验动物是获得正确实验结果和实验 成功的重要环节。应按照不同实验的要求选择合适的动物。如 做肿瘤的研究工作，就必须了解哪种动物是高癌种，哪种是低 癌种，各种动物自发性肿瘤的发生率是多少。如A系、C3H系 、AKR系、津白等小鼠是高癌品系小鼠，C3HHe系经产雌 鼠有80100的自发性乳腺癌。AKR系89月龄小鼠有80 90自发性白血病。 C57BL系、津白等小鼠是低癌品系小 鼠。不同动物对同一因素的反应往往相似的，但也常常会遇到 动物出现特殊反应的情况。如5岁以上的雌犬常有自发性乳腺肿 瘤，如果给犬雌激素，就更容易诱发乳腺肿瘤。雌激素还容易 引起犬发生贫血，这在其它实验动物是很少见的。 二、实验季节 生物体的许多功能随着季节产生规律性的变动。目前已有 大量资料表明，动物对化学物作用的反应也受到季节的影响 。例如在春、夏、秋、冬分别给10只大鼠注入一定量的巴比 妥纳，发现入睡时间以春季最短，秋季最长，而睡眠时间则 相反。 大鼠对巴比妥纳反应的季节变化 季 节节 入睡时间时间 （ min） 睡眠时间时间 （ min） 季节节 入睡时间时间 （ min） 睡眠时间时间 （ min） 春 56.111.047034.0 夏 93.511.324214.3 秋 120.019.019018.7 冬 66.58.2 36033.0 不同季节，动物的机体反应性有一定改变。如不 同季节对辐射效应有影响。家兔的放射敏感性在春 夏两季升高，秋冬两季降低。在犬的实验中，在春 、夏两季照射后的死亡率比秋、冬为高。小鼠的放 射敏感性，在冬季和初夏显著升高，而初秋和夏季 则降低。大鼠的放射敏感性则没有明显的季节性波 动。因此，这种季节的波动在进行跨季度的慢性实 验时是必须注意的。 三、昼夜过程 动物对照射的敏感性在昼夜间也有不同的变化，这种变 化见于不同性别、种系和年龄的小鼠和大鼠。白天放射敏 感性降低(死亡较少，体重下降较少，肝脏损伤较轻)，夜 间升高。同时，在小鼠和大鼠实验除了夜间(2l24点)的高 峰外，还发现白天(小鼠912点，大鼠15点)损伤加重情下 午和后半夜放射敏感性最低。大鼠与小鼠不同，其放射敏 感性虽有昼夜间的明显动，但不很剧烈。经实验证明实验 动物的体温、血糖、基础代谢率、内分泌激素的分泌均发 生昼夜节律性变化。因此，这类实验的察必须设有相应的 对照，并注意实验中某种处理的时间顺序对结果的影响。 为了得到可比性的实验结果，所有实验组动物应在同一时 间内进行照射或其它实验处理。 四、麻醉深度 动物实验中往往需要将动物麻醉后才行各种手术和实验。 要求麻醉深度要适度，而且在整个实验过程中要保持始终恒 定。不同的麻醉剂有不同的药理作用和副作用，应根据实验 要求与动物种类而加以选择，使用合适，麻醉深度的控制是 顺利完成实验获得正确实验结果的保证。如果麻醉过深，动 物处于深度抑制，甚至濒死状态，动物各种正常反应受到抑 制，那是不能做出可靠的实验结果的。麻醉过浅，在动物身 上进行手术或实验，将会引起强烈的疼痛刺激，使动物全身 ，特别是呼吸、循环功能发生改变，消化功能也会发生改变 ，如疼痛刺激会反射性的长时间中止胰腺的分泌。所以麻醉 深度必须合适。由此也不难理解在整个实验中保持麻醉深度 的始终一致是如何必要了。因为麻醉深度的变动，会使实验 结果产生前后不一致的变化，给实验结果带来了难以分析的 误差。 五、手术技巧 动物实验中除了要注意选择合适的实验动物 ，用的试剂要纯粹，仪器要灵敏，方法要准确 外，还必须注意手术技巧，即操作技术的熟练 。手术熟练可以减少对动物的刺激，动物受的 创伤、出血等就少，将会提高实验成功率和实 验结果的正确性。要达到动物手术操作熟练， 必须要了解各种动物的特征，组织、器官的位 置，神经、血管的走行特点，通过在动物身上 反复实践，即可达到熟中生巧、操作自如。 六、实验药物 动物实验中常常需要给动物体内注入各种药物以观察其作 用和变化。因此给药的途径、制剂和剂量是影响实验的很重要 的问题。如有的激素在肝脏内破坏，经口给药就会影响其效果 。有些中药用粗制剂静脉注射，因其成分复杂，如含有钾离子 ，可以有降血压作用，若把这种非特异性降压作用解释为特殊 性疗效就不恰当。这类实