实验壬基酚对红鲤鱼的急性毒性.ppt

实实 验验 一一 壬基酚对红鲤鱼的急性毒性壬基酚对红鲤鱼的急性毒性 毒理学中研究外源化学物的基础毒性主要是进行体内试 验，即是以实验动物为研究对象，最终向外源化学物毒 害主体-人类外推。 选用的动物体重差异不应超过平均体重的10%。 为判定受试物对不同性别动物的毒性反应有否差异，除 特殊要求外，实验中一般均应采用两种性别动物进行试 验。 所用动物进入实验室后，于实验开始前应观察一周以上 ，以删除不健康的动物，并使实验动物适应环境。 受试生物的选择方法和标准见理论课教材。 实验目的：实验目的： 1 1、学习急性毒性试验的原理和方法；、学习急性毒性试验的原理和方法； 2 2、探求化学污染物的致死剂量，以初步评估其对人类的可、探求化学污染物的致死剂量，以初步评估其对人类的可 能毒害的危险性； 能毒害的危险性； 3 3、掌握半数致死剂量、掌握半数致死剂量LDLD50 50或半数致死浓度 或半数致死浓度LCLC50 50计算计算方法和意 方法和意 义（结果评定 义（结果评定) )； 4 4、学习化学污染物急性毒性的评价方法。、学习化学污染物急性毒性的评价方法。 急性毒性试验：是指以某种接触途径将受试物（外源性 化学物）高剂量一次性给予或24h内多次给予受试物后， 在短时间内观察动物所产生的毒性反应，这样的试验即 急性毒性试验。试验测定致死的和非致死的指标参数， 致死剂量通常用半数致死剂量LD50或半数致死浓度LC50来 表示。 LD50或LC50：一定时间内能够引起受试生物50死亡的单 一受试物剂量或浓度，是经过记录、统计后计算得的估 计值。 LD50的计算参考以下公式： （农药登记毒理学试验标准 GB 156701995 /fujian/standard/guojiabiaozun/gbm/ M156700j.htm） 1gLD50=Xk-d(Pi-0.5) Xk最大剂量对数，d等比级数，Pi各组死亡率，i 组号 实 验 原 理 95可信限log-1(logLD501.96SlogLD50) logLD50的标准误（S）: 材料和用具：（略） 试验动物的饲养环境 恒定的温度：223 湿度：3070% 照度：昼夜各半 饲料合格、饮水合格、垫料合格 染毒途径的选择: 染毒途径（exposure routes）的选择需考 虑：模拟人在生活和生产环境中实际接触受试 物的途径和方式；有利于不同化学物之间急性 毒性大小的比较；受试物的性质和用途；各种 受试物毒性评价程序的要求等。 最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮 及注射途径。 染毒剂量与分组: 1查阅文献 了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状 态、熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水 溶性和脂溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成 分与含量等。 确定使用哪一种计算方法求LD50，然后再设计剂量分 组。LD50的计算方法常用寇氏法、概率单位法、霍思法 等。 找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物 的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同 接触途径所测得的LD50(或LC50)值作为受试化学物的预 期毒性中值。 实验分成3个染毒剂量组和1个未染毒对照组，每组数量 相同，平均体重（13.93.80）g，分别置于30L水池中 。染毒组剂量分别设计为50、100和200mg/kg(NP质量/鱼 体重，下同)。染毒方式为腹腔注射，注射前后各12小时 不喂食，各剂量组注射体积为每尾200l。 NP-食用油溶液：染毒剂量的设计参考文献3。先对购买 的鱼称平均重量,按照每条鱼注射200ulNP-食用油溶液配 制50mg/kg体重、100mg/kg体重、200mg/kg体重溶液，配 好后装在试剂瓶中避光保存。 染毒剂量参考： 2预试验 设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并 在该剂量的上下以3倍之差各设计l一2个剂量组作为预 试验剂量。 根据确定的剂量组进行染毒。 根据预试验的死亡资料确定组距。 可根据以下公式计算出剂量分组： i=(lgLD90-lgLD10)(n-1) 或：i=(lgLD100-lgLD0)(n- 1) 式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)； n为设计的剂量组数。 3正式试验; 一般来说、根据试验设计所选用的LD50计算方法来确定组 数。例如几率单位法、寇氏法一般设610个剂量组；霍 恩法固定设4个剂量组。求得i值后，以最低剂量组(LD0 或LD10)的对数剂量加上一个i值，即是第二个剂量组的对 数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对数即 得出各组剂量的真实值. 1 2 3 4 5 6 LgLD0 LgLD0+i LgLD0+2i LgLD0+3i LgLD0+4i 1、红鲤鱼的驯养：从市场购来大小相近的红鲤鱼，平均体 长实验前现测，在实验室驯养一周。染毒前禁食12小时。 2、预试验： 各组自己设计浓度，然后组长分工运行该试验。 （1）分缸：取三个12升的玻璃缸，加入驯养缸中的源水各 9升，每升处标上刻度线。按生物测试标准，从驯养缸中选 择体长相近、健康活泼的鱼各三条，分别放入三个缸中。 实验过程： (2) 浓度设计：查文献得知，缺乏现成的壬基酚对金鱼类 的LC50值。综合壬基酚毒性试验研究的一些结果，初步将 预试验浓度按等比级数设在三个浓度值（自己设计）。 (2) 称量并记录。 (3) 测水的硬度、温度和PH值。 (4) 分别对三个缸染毒，在各缸贴上标签，记录染毒时间 、染毒浓度。 (5) 曝气。 (6) 观察现象：前8小时连续观察，记录各浓度死亡数、死 亡时间、主要异常症状，将死亡的鱼取出，做好标记，存 放冰箱以备以后生理毒性的研究之用。 (7) 根据预试验得出红鲤鱼2/3以上死亡和1/3以下死亡的 浓度。 3、正式试验 (1) 分缸：取8个12升的玻璃缸，加入驯养缸中的源水各9 升，每升处标上刻度线。按生物测试标准，从驯养缸中选 择体长相近、健康活泼的鱼各6条，分别放入8个缸中。 (2) 浓度设计：依据预试验的结果确定最大浓度和最小浓 度，并在两者之间按等比级数再设计两个浓度，同时设一 空白对照组，各组做两个平行。 (3)(7)步骤同预试验的“(2)-(6)”。 记录内容： 高剂量组(浓度为？)的鱼在用药后？h开始死亡，？h后 全部死亡； 中剂量组(？)的鱼在？h后开始死亡； 低剂量组(？)在染毒？h后开始死亡。 全期毒性试验观测时间为？H，红鲤鱼在染毒？h后趋于 稳定，各组存活的鱼不再死亡，并逐渐恢复正常。 记录表格： 组别及组别及 浓度浓度 （或剂（或剂 量）量） 数量数量 平均平均 体长体长 （cmcm ） 平均平均 体体 重重 (g)(g) 出现出现 中毒中毒 症状症状 的时的时 间和间和 数量数量 中毒症状中毒症状 死亡死亡 时间时间 和