[基础科学]戊巴比妥钠半数有效量的测定.doc

实验三 戊巴比妥钠半数有效量（ED50）的测定 Determination Of Median Effective Does（ED50）Of Sodium Pentobarbital目的和原理 测定戊巴比妥钠腹腔注射对小鼠催眠作用的ED50值。 戊巴比妥钠为巴比妥类镇静催眠药，用适当剂量给小鼠腹腔注射后产生的催眠效应，常用翻正反射的消失来判断，该指标仅有阳性（睡眠）和阴性（不睡眠）两种现象，属于质反应。质反应量效曲线的横坐标为对数剂量，而纵坐标采用阳性反应发生的频数时，一般为常态分布曲线。如改用累加阳性频数为纵坐标时，可以得到标准的S型曲线。该曲线的中央部分（50%反应处）接近一条直线，斜度最大，其相应的剂量也就是能使群体中半数个体出现某一效应的剂量，通常称为半数效应量。如效应为疗效，则称半数有效量（ED50）；如效应为死亡，则称半数致死量（LD50）。这些数值是评价药物作用强度和药物安全性的重要参数。测定ED50和LD50的方法基本一致，只是所观察的指标不同。前者以药效为指标，后者以动物死亡为指标。常用的测定方法有Bliss法（正规机率单位法），Litchfield-Wilcoxon机率单位图解法，Kaerber面积法，孙瑞元改进的Kaerber法（点斜法）及Dixon-Mood法（序贯法）等。其中孙氏改进的Kaerber法因其简捷性和精确性更为常用。孙氏改进的Kaerber法的设计条件是：各组实验动物数相等，各组剂量呈等比数列，各组动物的反应率大致符合常态分布。若以Xm为最大反应率组剂量的对数，i为组间剂量比的对数，p为各组反应率，Pm为最高反应率，Pn为最低反应率，n为实验组数，则：ED50lg-1Xmi（P0.5）i/4（1PmPn） （45）含0%及100%反应率时，ED50lg-1Xmi（P0.5） （46）ED50的95可信限lg-1（lgED501.96S） （47） 其中Si （48） 实验材料小鼠60只，体重1824g；戊巴比妥钠溶液（sodium pentobarbital solution）2.00mg/ml，2.40mg/ml，2.89mg/ml，3.47mg/ml，4.16mg/ml，5.00mg/ml；小鼠笼，天平，0.5ml或0.25ml注射器。实验步骤1、确定给药剂量：先以少量动物做预实验，以获得小鼠对戊巴比妥钠催眠反应率为100的最小剂量（ED100）和反应率为0的最大剂量（ED0）。然后在此剂量范围内，按等比数列分成几个剂量组（一般48组），各组剂量的公比（r）为 rn-1ED100/ED0求得r后，自第一剂量组（ED0）开始乘以r，可得相邻的下一个组的剂量。若共分为6个组，各组剂量分别为ED0、rED0、r2ED0、r3ED0、r4ED0、r5ED0。2、给药：取体重1822g的健康小鼠50只，查随机数字表，随机分为6个组，每组10只。按表46所列的各组给药浓度分别腹腔注射10ml/kg。3、记录结果：以翻正反射消失为入睡指标，观察药物的催眠效应，记录各组腹腔注射后15min内睡眠鼠数，填入表46。结果整理及分析依表46所列，分别计算各组P和P2。再按（45）或（46）式计算ED50，（47）及（48）式计算ED50的95可信限。表46 戊巴比妥钠ED50计算用表 组别小鼠数药物浓度（mg/ml）给药剂量（mg/kg）对数剂量催眠鼠数PP21102.0020.01.30102102.4024.01.38063102.8928.91.46024103.4734.71.53985104.1641.61.61946105.0050.01.6990注意事项1、若用50只小鼠，随机分为5个剂量组进行实验，各组动物可参照20mg/kg、25mg/kg、31mg/kg，39 mg/kg，49 mg/kg给药。（药物浓度为2.45 mg/ml、1.96 mg/ml、1.57 mg/ml、1.25 mg/ml、1.00 mg/ml、）以20ml/kg腹腔注射。2、随机分组时，可先称各小鼠体重，将体重相同小鼠放一笼，分别做好标记。再按确定组数查随机数字表分组，使各组平均体重及体重分布尽可能一致。3、本实验为定量实验，注射药量必须准确。给药后要仔细观察药物反应，但不可过多地翻动小鼠，以免影响实验结果。思考题ED50的定义，治疗指数的定义、意义。 （张树平）实验四 戊巴比妥钠半数致死量（LD50）的测定（Determination of Median Lethal Dose(LD50) of Sodium Pentobarbital）目的和原理 测定戊巴比妥钠腹腔注射对小鼠的半数致死量（LD50）。LD50测定的方法和原理与ED50测定基本相同，区别在于测定LD50的观察指标是死亡和生存。实验材料戊巴比妥钠溶液（Sodium Pentobarbital solution）9.38mg/ml、7.50mg/ml、6.00mg/ml、4.80mg/ml、3.80mg/ml。实验步骤用孙氏改进Kaerber氏法。取小鼠50只，随机分为5组，每组10只，分别腹腔注射不同浓度的戊巴比妥钠20ml/kg（剂量分别为187.5、150.0、 120.0、96.0及76.0mg/kg），观察记录给药后24h内各组死亡鼠数。结果整理及分析1. 将实验结果列入表5-1表5-1 戊巴比妥钠的LD50计算用表分组剂量实验鼠数死亡鼠数死亡百分率（%）PP21187.52150.03120.0496.0.576.02.