实验三齐墩果酸及提取.doc

实验三 齐墩果酸的提取、分离及鉴定一、实验目的 1、掌握三萜皂苷元的提取、分离和鉴定技术，熟悉三萜皂苷的性质。 2、掌握两相溶剂水解方法。 3、掌握碱溶盐析法提取萜类化合物的方法。 齐墩果酸又名庆四素，属五环三萜类化合物，广泛分布于植物界，已报道其以游离态、酯、苷或兼有的形式存在于150多种植物中，而多数是以苷的形式存在。但含齐墩果酸的量超过10的甚少。从刺五加、龙牙楤木中提得率超过10，纯度达95以上，是理想的药用资源，是一种天然产物化学成分，并己证实其具有多种生物活性。 纯齐墩果酸是白色簇状结晶，无色、无味、无臭，熔点为308-31O，不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和氯仿等有机溶剂。据研究证实，齐墩果酸具有消炎抑菌、增强免疫功能、降转氨酶、改善肝功能，纠正体内异常蛋白代谢，防止肝硬化、降血糖、降血脂等多方面的临床药理作用，它对急性黄疸型肝炎和慢性病毒性肝炎疗效显著，是国内研制的保肝、治疗肝炎的有效药物之一。此外，齐墩果酸还具有抗血栓形成、抗突变、抗艾滋病、抑制HIV-I的复制作用；以及强心、利尿和抑制S180瘤株生长等作用，其毒性小，副作用低，安全范围大。齐墩果酸还因其有抗衰老、抗突变、清除自由基的作用，还可以作为化妆品成分被广泛应用。女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait的干燥成熟果实，为常用的扶正固本中药。药理研究表明其促进免疫的主要有效成分为齐墩果酸、熊果酸及乙酰齐墩果酸。齐墩果酸以游离态和结合成苷的形式同存于女贞子中。经检测发现其齐墩果酸含量以幼果期（8月）含量最高，可达8.04，随着发育成熟下降到2.5左右。其在果实中的含量分布为外中果皮全果实内果皮种仁。女贞子还含橄榄苦苷、D-甘露醇、硬脂酸、植物蜡等。女贞子中主要有效成分：（1）齐墩果酸：C30H48O3，白色针状结晶（95乙醇），mp 305-306。可溶于热甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、丙酮等，不溶于水。（2）熊果酸：C30H48O3，白色针状结晶（95乙醇），mp 286-287。易溶于二氧六环、吡啶。可溶于热乙醇，微溶于苯、氯仿、乙醚，不溶于水。（3）乙酰齐墩果酸：C32H50O5，白色簇晶。Mp 258-260。溶于氯仿、乙醚、无水乙醇，不溶于水。 齐墩果酸 R=H 熊果酸 乙酰齐墩果酸 R=OCOCH3二、实验原理根据女贞子中齐墩果酸以游离型和结合成苷的形式共存于果实中，采用酸水解，氯仿萃取同步法提取齐墩果酸。 根据女贞子齐墩果酸以游离型和结合成苷的形式共存于果实中，采用碱溶解，制备成钠盐形式，酸沉淀方法提取齐墩果酸。三、实验材料： 1、器材：500ml圆底烧瓶、烧杯、水浴锅、滴管、球形冷凝管、索氏提取器、250ml分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、旋转蒸发器、硅胶G-CMG-Na板、层析缸等； 2、药品及试剂：女贞子果皮粗粉50g、5%氢氧化钠溶液、浓硫酸、浓盐酸、乙醇、丙酮、氯仿溶液、石油醚（沸程60-90）、冰醋酸、乙酸乙酯溶液、无水硫酸钠、乙酸酐四、实验操作步骤： 1、酸水解和氯仿同步提取法称取女贞子果皮粗粉25g，置于圆底烧瓶内，加15盐酸溶液175 ml，氯仿125 ml，70水浴回流水解2h，过滤，分取氯仿提取液（在分液漏斗中进行，注意：氯仿在下，水在上，因为氯仿密度1.4916比水大，用水洗至中性，用无水硫酸钠脱水干燥、过滤，用过滤液）另存。药渣用水洗至中性，抽干，干燥药渣至含水量小于10（摊平晾晒或低温烘干）。将干燥药渣置于圆底烧瓶内，加氯仿250 ml回流1h，合并二次氯仿提取液，取出2 ml留待薄层鉴识，其余减压回收氯仿（用旋转蒸发器或常温挥干）至糖浆状，趁热转移至烧杯中，冷后成半固状物。 女贞子果皮粗粉 氯仿提取液 回流回收氯仿至糖浆状2、分离与精制 方法1：取上述半固状物，以少量石油醚洗涤除去脂溶性较大的成分，即有固体析出，抽干，得浅黄色析出物。用1:100倍量（WV）95乙醇90回流10 min，过滤，滤液浓缩至小体积，放置，析出粗晶，抽滤得齐墩果酸粗品。反复用90乙醇重结晶，可得较纯的齐墩果酸。 即方法1： 半固状物 浅黄色析出物 乙醇回流齐墩果酸粗品 齐墩果酸方法2：同方法1用石油醚处理得浅黄色析出物，加10倍量5%氢氧化钠溶液煮沸10 min，放冷后抽滤，适量热水洗涤12次，抽干得类白色析出物，用95乙醇回流溶解，趁热过滤，盐酸调至pH l2，放置析晶。抽滤得齐墩果酸粗品，用正己烷-乙醇（1:1）重结晶，可得较纯的齐墩果酸。 即方法2： 半固状物 浅黄色析出物 氢氧化钠溶液煮沸 乙醇回流 齐墩果酸粗品 齐墩果酸3、鉴定 a呈色反应 （1）取本品约50mg，加氯仿2ml溶解后，加硫酸2滴，振摇，静止，氯仿液自无色(或淡黄色)渐变为淡红色。 （2）取本品少量，加乙酸酐lml，微热使溶解，滴加硫酸1滴，即显紫红色，放置后色渐变深。 （3）取本品少量，加香草醛的冰乙酸溶液(香草醛0.5g，加冰乙酸10ml溶解，即得)0.2ml，加高氯酸0.8ml，置沸水浴中加热数分钟，显紫红色，加乙酸乙酯2ml，紫红色溶入乙酸乙酯中，放置不变色。 b薄层色谱鉴别 薄层板：硅胶G-CMG-Na板点样：女贞子氯仿提取液、自制齐墩果酸乙醇溶液、齐墩果酸对照品乙醇溶液（1 mg/ml）。展开剂：氯仿-丙酮（95:5）、环己烷-乙酸乙酯（8:2）任选一种。显色：喷10% 硫酸甲醇溶液，105烘至显色，日光和紫外光灯（365nm）下检识。观察记录：记录图谱及斑点颜色。4、计算得率 得率=得到的齐墩果酸成品（g）/称取得样品量（g）*100%五、注意事项1、女贞子中齐墩果酸的含量因采收季节、产地不同有较大差异，可根据原料含