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酶对固定化底物的作用 无机化学 张春丽 111102009 简介 v如何用新的方法来监测酶对固定化底物的作用 v酶的可接近性 v酶的动力学,热力学性质 v总结 二新方法来监测酶对固定化底物的作用 v双光子显微镜 v荧光显微镜 v共焦拉曼显微镜 v石英单晶微量天平 v基质辅助激光解吸飞行时间质谱法 应用双光子显微镜的实例一 丹磺酰氯(二甲氨 基萘磺酰氯)是一 种强荧光剂,可 用于测定肽链的 氨基末端,它能 专一地与链N-端 -氨基反应生成丹 磺酰-肽,后者水 解生成的丹磺酰- 氨基酸具有很强 的荧光 应用双光子显微镜的实例二 以香豆素为底物,在固相上发生酶促反应; 荧光基团 它是双香豆素衍生物 ,含有羧基用来固定在玻璃的 表面和给电子基团(酚类或苯 胺集团)作为与酶的结合部位 。 酶识别头包含一个独特的化学 结构,作为酶的结合部位,不 同的靶酶可做微调。 应用微阵列技术(是一 种将核酸序列纵横排列 成序,样品在固相载体 上以便核酸分子杂交, 结合在芯片上的不同点 ),通过TMP观测其荧 光强弱,来鉴别酶的种 类、专一性及活性。 应用石英单晶微量天平的实例 石英晶体微天平实时监测 固定底物的量。这种方法非常敏感对于测量质 量的增加和减少,可精确到在纳克水平。 首先加入的是糖原磷酸 化酶,它与固定在固相 物上的支链淀粉结合, 导致大规模的增加。 随后加入磷酸腺苷,激 活磷酸酶,开始逐步 催化溶解的淀粉、使质 量大量减少。 三、酶在固相载体上的可接近性、热 力学及动力学性质 分别在PEGA聚合物和 水溶液中,嗜热菌蛋白 酶催化合成缩氨多肽 。 即向苯丙氨酸中加入 饱和溶液Ph=7.4的N- (9-芴甲氧羰基)甘氨 酸Fmoc-Gly,在酶催 下作用观察其平衡转 化率如图所示。(疏 水效应) 固相载体对酶催化反应的平衡位置的影响 四、总结 v目前,已经有新方法来监测酶对固定化底物 的作用,但需要提供一系列适合酶在固相反 应。我们可以进一步改善来提供更方便,简 单方法来监测空间分辨率和实时操作。 v
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