颜生胶囊中阿魏酸的定性鉴别与含量测定-毕业论.doc

内蒙古医科大学毕业论文(设计) 题 目颜生胶囊中阿魏酸的定性鉴别与含量测定 学生姓名 崔月映学 号 2011050921 院 系 药学院专 业 中药学指导教师 顾艳丽二一五年 月 日 目录中文摘要.41、 仪器与试药.4二、阿魏酸的定性鉴别.52.1阴性对照的制备.52.2硅胶板的制备.52.3阿魏酸的提取分离.52.4薄层色谱条件.52.5紫外分析仪检测.52.6方法筛选结果.6三、阿魏酸的含量测定.63.1供试品溶液的制备.63.2对照品溶液的制备.63.3色谱条件.63.4线性关系.63.5精密度.73.6空白阴性对照.73.7稳定性.93.8含量测定.93.9加样回收率.104、 结果.105、 讨论.106、 参考文献.11七、英文引言.12八、致谢.13颜生胶囊中阿魏酸的定性鉴别与含量测定崔月映、武俊伟内蒙古医科大学中药学专业，呼和浩特 010059摘要：目的：测定颜生胶囊中阿魏酸，以期为颜生胶囊的药品生产提供参考。方法：采用薄层色谱法鉴别当归、川芎，采用高效液相色谱法测定阿魏酸。阿魏酸的色谱条件：流动相为甲醇-1%冰乙酸溶液（30:70），柱温为室温，检测波长为320nm。结果：通过本课题的研究，薄层鉴别斑点清晰，阴性无干扰。方法学研究表明，阿魏酸质量浓度在0.2515ug-1.509ug范围内，r=0.9995，溶液的峰面积与质量浓度线性关系良好，为颜生胶囊的进一步研究和开发生产提供了质量控制指标依据，为颜生胶囊的大量开发和应用奠定了一定的基础。结论：该方法简便、准确、重复性好、阿魏酸的含量测定用于评价颜生胶囊的质量是可行的。关键词：薄层色谱法；高效液相色谱法；颜生胶囊；阿魏酸颜生胶囊是由五味子、柏子仁、炒枣仁、夜交藤、红花、决明子、大黄、丹参、当归、川芎、何首乌、黄芪、威灵仙、火麻仁组成的复方制剂。用于养心安神，活血调经、润肠通便、养颜驻容。本实验以颜生胶囊的主药当归、川芎中含有的阿魏酸为指标成分,采用薄层色谱法和高效液相色谱法进行定性鉴别与含量测定,以控制制剂质量,保证临床疗效。一、仪器与试剂三用紫外分析仪（天津天光光学仪器有限公司）恒温水浴锅（DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器，河南省予华仪器有限公司）；硅胶（青岛裕民源硅胶试剂厂）；羧甲基纤维素钠（沈阳化学试剂厂）高效液相色谱仪（岛津SCL-10AVP、MODEL:SPD-10AVP,CAT.NO.228-40000-38，SERIAL:NO.C20994111516 LP）、色谱柱：(DESC:Kromasi1 5u 100A C18 SIZE:250*460mm 5u microm S/NO:229087-12 ) 电子天平（AL204和AB135-S）25mL容量瓶10个五味子；柏子仁；炒枣仁；夜交藤；红花；决明子；大黄；丹参；当归；川芎；何首乌；黄芪；威灵仙；火麻仁（武警内蒙古总队医院提供）颜生胶囊（武警内蒙古总队医院提供）阿魏酸对照品（中国食品药品检定研究所 编号:110773-201313 id:3SYD-14YX 50mg）、化学试剂：乙醚（天津市风船化学试剂科技有限公司）、甲醇（天津市风船化学试剂科技有限公司）、环己烷（天津市福晨化学试剂厂）、冰乙酸（北京北化精细化学品有限责任公司）、二氯甲烷（天津市光复科技发展有限公司）、稀盐酸（天津市化学试剂三厂）、碳酸氢钠（天津市永大化学试剂有限公司）、碳酸钠（天津市永大化学试剂有限公司）、二、阿魏酸的定性鉴别2.1薄层板的制备1 取5g硅胶G与0.5%CMC-Na的滤液按1:3比例混合。研磨均匀后，涂布于玻璃板上（10*15或20*20），厚度为0.25mm室温干燥后，置烘箱中于105摄氏度活化30min，置于干燥器中放冷备用。2.2阿魏酸的提取分离方法2-3a 取当归对照药材粉末和川芎对照药材粉末各2g，加1%碳酸氢钠溶液50ml，超声处理20min离心15min取上清液用稀盐酸调ph至2-3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液。b 取当归对照药材粉末和川芎对照药材粉末各2g，加5%碳酸钠溶液30ml，超声处理40min，滤液用乙醚萃取，弃乙醚层，用稀盐酸调ph值至1-2在用乙醚提取3次，每次15ml，合并乙醚液。c 取当归对照药材粉末和川芎对照药材粉末各2g，加稀盐酸80ml于500ml烧杯中。超声处理40min后，离心15min，取上清液，用乙醚提取2次每次20ml，合并乙醚液。d 取当归对照药材粉末和川芎对照药材粉末各2g，置于锥形瓶中，加甲醇适量，超声30min，分取甲醇液，水浴蒸干。残渣加少量水溶解。用稀盐酸调ph至2左右，乙醚萃取3次（30.20.20ml）。合并萃取液，回收乙醚，残渣用少许甲醇溶解，得对照药材溶液。2.3阴性对照的制备 按武警内蒙古总队医院提供的处方制法，将含有阿魏酸的当归、川芎两味药材去掉按制法制作，得到阴性对照品。2.4 薄层色谱条件 照薄层色谱法试验4，吸取供试品溶液10ul，点于薄层板上，在吸取对照药材溶液各10ul点于同一薄层板上，在吸取阿魏酸标准品溶液10ul点于同一薄层板上，在吸取阴性对照药材溶液10ul点于同于薄层板上，将点样后的薄层板置于以展开系统：环己烷：二氯甲烷：冰乙酸（16ml:16ml:2ml）为展开剂的饱和层析缸内（层析缸先饱和1.0h），展开。2.5 紫外分析仪检测置紫外灯365nm检视，供试品薄层色谱图中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。2.6 方法筛选结果经实验以上4种提取方法中以第四种方法为佳，提取后所得阿魏酸含量较高。结果见图1a方法b方法c方法d方法图13、 阿魏酸的含量测定 3.1 对照品溶液的制备 取阿魏酸对照品精密称取5.03mg,加甲醇溶解，超声30min,甲醇定容至100ml，摇匀，浓度为0.0503mg/ml,作为对照品溶液。3.2供试品溶液的制备 取颜生胶囊5粒,去囊壳,取内容物2 g精密称量,置锥形瓶中,加甲醇50ml,超声处理30 min,分取甲醇液,水浴蒸干,残渣加20 ml水溶解,并用稀盐酸调pH 12,置分液漏斗中,用乙醚萃取3次(30,20,20 ml),合并乙醚萃取液回收乙醚至干,残渣用甲醇溶解定容至25ml,得供试品溶液。3.3 色谱条件流动相：甲醇-1%冰乙酸水溶液（30:70）；等度洗脱，保留时间：20.465min，流速：1ml/min；柱温：25；检测波长：320nm。理论塔板数按阿魏酸峰计不低于3000。3.4线性关系分别精密吸取对照品储备液(5.00mg/100ml),分别在25ml容量瓶中稀释成0.25ug/ul,0.50ug/ul,0.75ug/ul,1.00ug/ul,1.25ug/ul,1.50ug/ul,按上述色谱条件进样测定，以峰面积积分值A为纵坐标，对照品量C(ug)为横坐标，作线性回归，得回归方程y=131443x+451980,r=0.9995,结果表明，阿魏酸0.25-1.50ug范围内线性关系良好。结果见图2图23.5 精密度精密吸取对照品溶液1.25ug，及供试品溶液各25ul，分别重复进样5次，按上述色谱条件测定，阿魏酸峰面积积分值相对标准偏差RSD分别为0.35%，0.73%。结果见表1编号12345RSD%标准品205979920579672051794204141120520830.35供试品143288814254821448862144117714379770.73表13.6空白阴性对照阴性对照溶液的制备 按颜生胶囊处方和制法，制成缺当归和川芎阴性制剂，精密称取2g，再按供试品溶液制备方法制备阴性溶液。进样25ul测定，结果阴性样品在相同位置处无阿魏酸的色谱峰，表明对阿魏酸测定无干扰，结果见图31.标准品阿魏酸；2.阴性对照品；3.颜生胶囊；4.当归对照药材；5.川芎对照药材 （标准品阿魏酸1）（阴性对照品 2）（颜生胶囊3）（当归对照药材4）（川芎对照药材5）图33.7 稳定性取供试品溶液，第1h进样1次(25uL)，第2h进样1次，第3h进样1次，第4h进样1次，第5h进样1次，共进样5次，按上述色谱条件分别测定，表明供试品溶液在5h内基本稳定。结果见表2编号12345RSD%供试品144014314587521476926143324714180691.6标准品205985620579642051894204153420524650.35表23.8含量测定取供试品5粒，定容至25ml容量瓶中，按“3.3”条件测定，分别进样（25ul），结果见表3编号12345平均每粒含量mg/粒RSD%供试品含量（mg/粒）0.1140.1150.1170.1160.1130.1151.4 表33.9加样回收率实验取已知含量的样品1.Og，共5份，精密称定，精密加入等量的阿魏酸对照品，按供试品溶液制备项下的方法制备，依法测定，计算回收率。结果见表4加样回收率试验编号样品中阿魏酸含量（mg）加入对照品量（mg）实测阿魏酸含量（mg）回收率（%）平均回收率（%）RSD(%)10.1510.1500.29999.399.221.420.1540.1500.30199.030.1560.1500.30198.440.1500.1500.29698.750.1450.1500.297100.7表44、 结果通过实验，建立了颜生胶囊的HPLC分析方法，结果表明颜生胶囊浓度在0.25ug-1.50ug范围内与其峰面积呈良好线性关系，且专属性强，精密度、稳定性和加样回收率均良好，说明该方法灵敏度高，能够检测出颜生胶囊中阿魏酸的含量。 五、讨论5.1颜生胶囊中阿魏酸提取方法筛选经反复试验，通过优选实验方法时发现，将药材用碳酸氢钠、碳酸钠提取，酸化后萃取，测到阿魏酸含量很少，即使点样浓度很大，在对照品色谱相应的职位上，显相同颜色的斑点很浅，酸液提取也得不到大量的阿魏酸，而采取分取甲醇液的方法即d方法，可以测到其中的阿魏酸且斑点清晰明亮、现象明显。此结果说明颜生胶囊复方制剂中含有特殊结构的药材利用d方法可以有效的提取出颜生胶囊中的阿魏酸，经比较之后d方法证明提取阿魏酸量大，斑点清晰、现象程度好，干扰少，且此方法操作简便、稳定，为高效液相色谱法测定颜生胶囊中阿魏酸含量奠定基础。5.2流动相筛选采用甲醇溶液为流动相A，0.8%冰乙酸溶液为流动相B且配比为甲醇0.8%冰乙酸溶液（30:70）为流动相洗脱时颜生胶囊与杂质无法分离且峰型差，采用甲醇溶液为流动相A，1%冰乙酸溶液为流动相B且配比为甲醇1%冰乙酸溶液（30:70）为流动相时洗脱颜生胶囊时分离效果好且峰型好，经过对流动相的筛选最终选择甲醇1%冰乙酸溶液（30:70）为流动相参考文献：1薄层扫描法测定逍遥丸中阿魏酸的含量 许英爱，金瑛（第四军医大学吉林军医学院，吉林 132013）2薄层色谱法鉴定冬葵子中阿魏酸 陈燕飞，刘乐乐，王玉华，张翠荣，蒋红，范晓燕，罗素琴（内蒙古医科大学药学院，内蒙古 呼和浩特 010059）3脑心通胶囊中阿魏酸的定性鉴别与含量测定 穆惠军，关桂菊，高琴，(1.山东福瑞达生物化工有限公司,山东济南250014; 2.济南宏济堂制药有限公司,山东济南250100)4国家药典委员会，中华人民共和国药典2005年版一部M.北京：化学工业出版社，2005.289七、英文引言Johannes vilhelm Jensen capsule qualitative identification and content determination of ferulic acidCui Yueying, Wu Junwei Inner Mongolia medical university of Chinese materia medica major, Hohhot 010059Abstract: Objective: to determine Johannes vilhelm Jensen capsule of ferulic acid in order to provide reference for Johannes vilhelm Jensen capsule pharmaceutical production.Methods: using TLC to identify radix angelicae sinensis, rhizoma ligustici wallichii, using high performance liquid chromatography (HPLC) method for determination of ferulic acid.Chromatographic conditions of ferulic acid ：Mobile phase of methanol to 1% ice acetic acid solution (30:70), and column temperature to room temperature, detection wavelength of 320 nm. Results: through the research of this topic, the thin layer identification spots were clear, negative without interference.Methodology research shows that the quality of ferulic acid concentration in ug - 1.509-0.2515 ug range, r = 0.9995, the solution of the peak area and concentration linear relationship is good, to the further research and development of Johannes vilhelm Jensen capsule production provides a basis for quality control indicators, to a large number of development and application of Johannes vilhelm Jensen capsule laid a certain foundation. Conclusion: this method is