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医学细胞生物学设计型实验设计报告班级10级k-7班 评分 实验项目： 细胞核的分离与鉴定 实验原理：1、细胞内各种结构的比重和大小不同，在同一离心场内其沉降速度也不同。所以，用差速离心法可将细胞内各种细胞器及组分分级分离出来。差速离心法也是用来研究亚细胞成分的化学组成，理化特性及其功能的主要手段。2、分离细胞核最常用的方法是将组织制成匀浆，在特定的条件下进行离心分离，然后分析鉴定。3、匀浆是指在低温条件下，将组织放入匀浆器，加入等渗匀浆介质进行研磨，破碎细胞，使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液。 实验步骤：1、处死：断头处死小白鼠，手提尾部使其学业尽量流出。2、取材：迅速开腹取肝，在盛有生理盐水的小烧杯中反复洗涤，称取湿重约为1g的肝组织放在烧杯中。3、匀浆：加油8ml预冷的0.25mol/L蔗糖0.003mol/L绿化高永夜于烧杯中，尽量剪碎肝组织，将剪碎的刚组织倒入玻璃匀浆器，是匀浆器下端侵入盛有冰块的器皿（如冰盘）。左手握持匀浆器，右手将匀浆捣杆垂直插入管中匀浆，直至看不到明显的组织块。4、过滤： 用8层纱布（先用少量生理盐水或蔗糖液润湿纱布）过滤匀浆液于离心管中。5、离心：在天平上平衡每对离心管，2500r/min离心15min，取上清液于另一离心管中。 6、涂片：取上清液制一张涂片（涂片1）。将原离心管中剩余上清液吹打成沉淀成悬液，另制一张涂片（涂片2），自然干燥 。7 、染色：分别在涂片1和2上低价甲苯胺蓝染液 ，染色5到7分钟（即滴染）。8、洗涤：冲去染液，晾干。9、镜检：结合实验结果的描述，镜下观察分析。注意事项：1.操作规范，防止试剂污染。2.细胞悬液的涂片制作要轻柔。3.使用离心机要注意平衡，转速从低到高。预期结果：低倍镜下找到标本，再换高倍镜，可见肝细胞核已游离出来，被染成蓝紫色，圆形，中央有2到4个甚至更多个深蓝色的核仁。实验用品：材料：小白鼠肝脏。试剂：生理盐水、0.25mol/L蔗糖0.003mol/L氯化钙溶液、1%甲苯胺兰染液。仪器设备：显微镜、普通离心机、天平、离心管、滴管、玻璃漏斗、量筒、25ml烧杯、解剖剪、镊子、冲洗瓶、纱布、伯乐匀浆器、载玻片、盖玻片、染色盘架。设计组名单： 姓 名 学 号姜 俊1020150738 曾 祥 兵1020150739冯 国
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