《ATPTCP药敏检测》PPT课件.ppt

ATP-TCA与化疗药物选择 第四军医大学肿瘤研究所 筛选筛选 药物药物筛选筛选 方案方案 pp周期特异周期特异 pp周期非特异周期非特异 pp不同机理不同机理 卵巢癌原发部位、大网膜转移及腹水药敏 检测结果 大 网 膜 转 移 腹水 原发 灶 形态形态/ /行为：行为：侵袭能力、生长速度、对激素的反侵袭能力、生长速度、对激素的反 应、对抗癌药的敏感性、免疫原性等方面差异应、对抗癌药的敏感性、免疫原性等方面差异 异质性：异质性： 变变 变变 变变 050100150200250 0 20 40 60 80 100 ATP-TCA指导的化疗 (n = 39) 传统化疗(n = 17) p = 0,0009 Weeks % Patients 050100150200250 0 20 40 60 80 100 ATP-TCA指导的化疗 (n = 39) 传统化疗(n = 17) p = 0,0016 Weeks % Patients Overall Survival Progression free Survival 引自Kurbacher CM, Cree IA, Brucker. Anticancer Drugs. 1998, 9: 51-57 传统化疗和ATP-TCA指导的化疗的 生存率比较 药敏检测方法应该具备基本条件 p标本可评价率高 p检测敏感、客观、可靠 p体内、外结果一致性高 目前主要的药敏检测方法及目前主要的药敏检测方法及问题问题 集落形成法（HTCA） 标本可评价率低，仅有标本可评价率低，仅有40704070。 实验周期长，需要实验周期长，需要4 4周以上周以上 测试药物种类和数量有限测试药物种类和数量有限 操作繁琐，难以标准化操作繁琐，难以标准化 阳性预测值较低，仅有阳性预测值较低，仅有40406060 四唑蓝比色法 (MTT) 敏感性较差，最低仅能检测敏感性较差，最低仅能检测500500个细胞个细胞 量程较小，有效量程在量程较小，有效量程在2.02.0以内以内 细胞毒性差异染色法 (DiSC) 可适用标本类型不广，目前仅用于血液肿瘤可适用标本类型不广，目前仅用于血液肿瘤 人为判断因素较大，难以推广人为判断因素较大，难以推广 标本可评价率不高，仅有标本可评价率不高，仅有70708080 阳性预测值较低，仅有阳性预测值较低，仅有70708080 胸腺嘧啶掺入法 (3H-T) 实验人员接触放射，不利于健康实验人员接触放射，不利于健康 标本可评价率不高，仅有标本可评价率不高，仅有70708080 测试结果仅能反映少量处于增殖相的肿瘤细胞测试结果仅能反映少量处于增殖相的肿瘤细胞 对某些药物的测试结果存在假阴性对某些药物的测试结果存在假阴性 ATP-TCAATP-TCA检测技术的优点检测技术的优点 p敏感性好 可检测10个细胞。其他技术需500个细胞 p 以上；同时动态检测6个剂量下药物对肿 瘤 p 的杀伤作用 p量程宽 线性范围为10105个细胞/孔（96孔培 p 养板） p精密度好 变异系数（CV）小于国家标准（10%） p结果准确 整体预测值为86% p可评价率高 标本可评价率在90%以上 p高通量检测 适合96、384、1536孔板检测分析 p检测快速 完成ATP检测仅需30分钟，其它需1 4h p自动化程度高 实验数据自动分析，结果直观可靠 ATP-TCAATP-TCA药敏检测试剂组成药敏检测试剂组成 p 1. 组织消化酶 6.ATP提取液 p 2. 96孔培养板 7.荧光酶-荧光素 p 3. 选择培养基 8. ATP生成抑制剂 p 4. 红细胞裂解液 9.荧光酶工作液 p 5. ATP标准 4.技术流程流程 Tumor Single Cell suspension Mechanical and enzymatical dissociation Incubation for 5-7 days Addition of drugs/medium ATP- Luminescence ATP extraction and stabilization Software Evaluation Construction of dose-response plots ATP + Luciferin + O2 AMP + 2Pi + Photons +