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薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆莂虿袂膆蒅袅膀芅薇蚈肆芄虿袃羂芃荿蚆袈节薁袂袄芁蚃螄膃芀莃羀聿芀蒅螃羅艿薈羈袁莈蚀螁膀莇莀薄肆莆蒂蝿羂莅蚄薂羈莄莄袇袄莄蒆蚀膂莃蕿袆肈莂蚁虿羄蒁莁袄袀蒀蒃蚇腿葿薅袂肅葿螇蚅肁蒈蒇羁羇肄蕿螃袃肃蚂罿膁肂莁螂肇肂蒄羇羃膁薆螀衿膀蚈薃芈腿蒈螈膄膈薀蚁肀膇蚃袇羆膆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1.组织培养:从机体分离出的组织或细胞在体外人工条件下培养生长的技术。2.膜相结构:指真核细胞中以生物膜为基础形成的所有结构,包括细胞膜(质膜)和细胞内所有膜性细胞器如线粒体、高尔基体、内质网、溶酶体、核膜等。3.单克隆抗体:由单一杂交瘤细胞克隆分泌的只能识别一种表位(抗原决定簇)的高纯度抗体4.细胞株:具有有限分裂潜能适合于进行培养,并在培养过程中保持其特性和标志的细胞群。其分裂次数通常为2550次,最后死亡。5.细胞识别:细胞间通过表面黏附分子形成专一性黏附的相互作用。6.G蛋白奢侈基因:7.奢侈基因:是指不同的细胞类型进行特异性表达的基因,其产物赋予各种类型细胞特异的形态结构特征与特异的功能;8.细胞系:细胞系(cell line)指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。 也指可长期连续传代的培养细胞。9.细胞通讯:细胞通讯是指在多细胞生物的细胞社会中, 细胞间或细胞内通过高度精确和高效地发送与接收信息的通讯机制, 并通过放大引起快速的细胞生理反应,或者引起基因活动,尔后发生一系列的细胞生理活动来协调各组织活动, 使之成为生命的统一整体对多变的外界环境作出综合反应。10.第一信使:由细胞产生,可被细胞表面或胞内受体接受、穿膜转导,产生特定的胞内信号的细胞外信使。11.Hayflick界限(Hayflick limit):正常的体外培养的细胞寿命不是无限的,而只能进行有限次数(约50次)的增殖。由美国生物学家Leonard Hayflick提出。12.细胞决定:胚胎细胞在发生分化之前已确定向特定方向分化的变化过程。13.信号肽:分泌蛋白新生肽链N端的一段2030氨基酸残基组成的肽段。将分泌蛋白引导进入内质网,同时这个肽段被切除。现这一概念已扩大到决定新生肽链在细胞中的定位或决定某些氨基酸残基修饰的一些肽段。论述题1、指导分泌性蛋白在糙面内质网上合成需要哪些主要结构或因子?它们如何协同作用完成肽链在内质网上合成?1)需要的结构或因子:胰腺细胞分泌的酶、浆细胞分泌的抗体、小肠杯状细胞分泌的粘蛋白、内分泌腺分泌的多肽类激素、胞外基质成分等。2)协同作用:分泌性蛋白N端序列作为信号肽,指导分泌性蛋白到内质网膜上合成,在蛋白质合成结束之前信号肽被切除。只有N端信号序列而没有停止序列的多肽,合成后进入内质网腔中;停止转移序列位于多肽分子的中部,合成后最终成为跨膜蛋白;含多个起始转移序列和多个停止转移序列的多肽会成为多次跨膜的膜蛋白2、概述染色质的类型及其特征。染色质的基本概念:1)染色质(chromatin)的概念:指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构, 是间期细胞遗传物质存在的形式。2)染色体(chromosome)的概念:指细胞在有丝分裂或减数分裂过程中, 由染色质聚缩而成的棒状结构。3)染色质与染色体是在细胞周期不同的功能阶段可以相互转变的的形态结构;染色质与染色体具有基本相同的化学组成,但包装程度不同,构象不同。基本类型:常染色质(euchromatin)1)概念:指间期核内染色质纤维折叠压缩程度低, 处于伸展状态(典型包装率750倍), 用碱性染料染色时着色浅的那些染色质。2)特征:DNA包装比约为1 0002 000分之一;单一序列 DNA 和中度重复序列DNA(如组蛋白基因和tRNA基因);并非所有基因都具有转录活性,常染色质状态只是基因转录的必要条件而非充分条件 异染色质(heterochromatin)1)概念:碱性染料染色时着色较深的染色质组分。2)类型:结构异染色质(或组成型异染色质)(constitutive heterochromatin)、兼性异染色质(facultative heterochromatin) ;结构异染色质或组成型异染色质,除复制期以外,在整个细胞周期均处于聚缩状态,形成多个染色中心。 3)结构异染色质特征:在中期染色体上多定位于着丝粒区、端粒、次缢痕及染色体臂的某些节段;由相对简单、高度重复的DNA序列构成, 如卫星DNA;具有显著的遗传惰性, 不转录也不编码蛋白质;在复制行为上与常染色质相比表现为晚复制早聚缩;在功能上参与染色质高级结构的形成,导致染色质区间性,作为核DNA的转座元件,引起遗传变异。 4)兼性异染色质特征:在某些细胞类型或一定的发育阶段, 原来的常染色质聚缩, 并丧失基因转录活性, 变为异染色质,如X染色体随机失活;异染色质化可能是关闭基因活性的一种途径。3、试述核小体的结构要点及其实验证据。结构要点:1)每个核小体单位包括200bp左右的DNA超螺旋和一个组蛋白八聚体及一个分子H1;2)组蛋白八聚体构成核小体的盘状核心结构;3)146bp的DNA分子超螺旋盘绕组蛋白八聚体1.75圈, 组蛋白H1在核心颗粒外结合额外20bp DNA,锁住核小体DNA的进出端,起稳定核小体的作用。 包括组蛋白H1和166bp DNA的核小体结构又称染色质小体;4)两个相邻核小体之间以连接DNA 相连,典型长度60bp,不同物种变化值为080bp;5)组蛋白与DNA之间的相互作用主要是结构性的,基本不依赖于核苷酸的特异序列,实验表明,核小体具有自组装(self-assemble)的性质;6)核小体沿DNA的定位受不同因素的影响,进而通过核小体相位改变影响基因表达。 主要实验证据: 1)铺展染色质的电镜观察:未经处理的染色质自然结构为30nm的纤丝,经盐溶液处理后解聚的染色质呈现10nm串珠状结构;2)用非特异性微球菌核酸酶消化染色质,部分酶解片段分析结果;3)应用X射线衍射、中子散射和电镜三维重建技术研究,发现核小体颗粒是直径为11nm、高6.0nm的扁园柱体,具有二分对称性(dyad symmetry),核心组蛋白的构成是先形成(H3)2(H4)2四聚体,然后再与两个H2AH2B异二聚体结合形成八聚体;4)SV40微小染色体(minichromosome)分析与电镜观察4.糙面内质网上合成哪几类蛋白质?它们在内质网上合成的生物学意义又是什么?1)糙面内质网上合成的蛋白质主要是分泌性蛋白、膜蛋白及内质网、高尔基体和溶酶体中的蛋白。2)生物学意义在于:多肽的糖基化及其折叠与装配发生在内质网中,而肽键上的信号序列决定多肽在细胞质中的合成部位,并最终决定成熟蛋白的去向。简答题1、概述细胞核的基本结构及其主要功能。1)核被膜(包括核孔复合体):外核膜,附有核糖体颗粒;内核膜,有特有的蛋白成份(如核纤层蛋白B受体);核纤层;核周间隙、核孔(nuclear pore)。 其功能为:构成核、质之间的天然选择性屏障;避免生命活动的彼此干扰;保护DNA不受细胞骨架运动所产生的机械力的损伤;核质之间的物质交换与信息交流。2)染色质:指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白及少量RNA组成的线性复合结构, 是间期细胞遗传物质存在的形式;染色体(chromosome),指细胞在有丝分裂或减数分裂过程中, 由染色质聚缩而成的棒状结构。染色质与染色体是在细胞周期不同的功能阶段可以相互转变的的形态结构染色质与染色体具有基本相同的化学组成,但包装程度不同,构象不同。3)核仁:纤维中心(fibrillar centers,FC)、致密纤维组分(dense fibrillar component,DFC)、颗粒组分(granular component,GC)、核仁相随染色质(nucleolar associated chromatin)、核仁基质((nucleolar matrix)。其功能为:核糖体的生物发生(ribosome biogenesis),包括rRNA的合成、加工和核糖体亚单位的装配;rRNA基因转录;rRNA前体的加工。 4)核基质或核骨架(nuclear skeleton):包括核基质、核纤层(或核纤层-核孔复合体结构体系),以及染色体骨架。; 核骨架是存在于真核细胞核内真实的结构体系;核骨架与核纤层、中间纤维相互连接形成贯穿于核与质的一个独立结构系统;核骨架的主要成分是由非组蛋白的纤维蛋白构成的, 含有多种蛋白成分及少量RNA;核骨架与DNA复制、基因表达及染色体的包装与构建有密切关系。 2、已知核糖体上有哪些活性部位?它们在多肽合成中各起什么作用?活性部位及其作用:与mRNA的结合位点与新掺入的氨酰-tRNA的结合位点氨酰基位点,又称A位点与延伸中的肽酰-tRNA的结合位点肽酰基位点,又称P位点肽酰转移后与即将释放的tRNA的结合位点E位点(exit site)与肽酰tRNA从A位点转移到P位点有关的转移酶(即延伸因子EF-G)的结合位点肽酰转移酶的催化位点与蛋白质合成有关的其它起始因子、延伸因子和终止因子的结合位点 3、 什么叫细胞周期?各阶段的主要变化是什么? 细胞周期是指分裂细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的时期和顺序变化; 1) G1期:主要特征是合成一定数量的RNA和某些专一性的蛋白质(触发蛋白); 2) S期:DNA复制是S期的主要特征。此外,也合成组蛋白和非组蛋白; 3) G2期: 1个细胞核的DNA含量由2C变为4C;细胞在此期中要合成某些蛋白质; 4) M期:核分裂和胞质分裂。 4.对于多细胞生物,细胞凋亡生理意义和在?细胞内尚存在着一种自杀程序,此程序一旦激活,细胞就要自杀身亡,这一程序称为程序性细胞死亡或细胞凋亡。程序性细胞死亡有细胞外死亡信号的诱发,激活了细胞内的自杀程序。程序性细胞死亡依赖于一个蛋白质水解酶家族,这些蛋白酶通过蛋白质水解级联反应自我激活或切割激活。其中切冬酶(caspases)家族发挥了重要作用。在细胞凋亡过程中,线粒体起着关键性的作用,线粒体释放出AIF和细胞色素c,导致死亡程序的下游变化,引起核凋亡。细胞程序性死亡是动物体生长发育和存活所必须的反应体系,这一体系一旦遭受破坏,动物体的生存就要受到威胁。或者1、简述细胞凋亡的生物学意义。答案要点:1、清除无用的细胞;2、清除多余的细胞;3、清除发育不正常的细胞;4、清除已完成任务的、衰老的细胞;5、清除有害的、被感染的细胞。通过以上几方面的作用,保证器官的正常发生与构建、组织及细胞数目的相对平衡。5 微丝功能 (1) 维持细胞外形; (2) 胞质环流; (3) 变形运动; (4) 支持微绒毛; (5) 形成微丝束与应力纤维; (6) 胞质分裂; 6、比较粗面内质网和光面内质网的形态结构与功能。ER是细胞内蛋白质与脂类合成的基地,几乎全部脂类和多种重要蛋白都是在内质网合成的。形态结构:rER多呈扁囊状,排列较为整齐,在其膜表面分布大量核糖体。功能:蛋白质合成;蛋白质的修饰与加工;新生肽的折叠与组装;脂类的合成。sER常为分支管状,形成较为复杂的立体结构,在其膜的表面没有核糖体。功能:类固醇激素的合成(生殖腺内分泌细胞和肾上腺皮质);肝的解毒作用;肝细胞葡萄糖的释放(G-6PG);储存钙离子:肌质网膜上的Ca2+-ATP酶将细胞质基质中Ca2+ 泵入肌质网腔中7.试述核小体的结构要点结构要点:1)每个核小体单位包括200bp左右的DNA超螺旋和一个组蛋白八聚体及一个分子H1;2)组蛋白八聚体构成核小体的盘状核心结构;3)146bp的DNA分子超螺旋盘绕组蛋白八聚体1.75圈, 组蛋白H1在核心颗粒外结合额外20bp DNA,锁住核小体DNA的进出端,起稳定核小体的作用。 包括组蛋白H1和166bp DNA的核小体结构又称染色质小体;4)两个相邻核小体之间以连接DNA 相连,典型长度60bp,不同物种变化值为080bp;5)组蛋白与DNA之间的相互作用主要是结构性的,基本不依赖于核苷酸的特异序列,实验表明,核小体具有自组装(self-assemble)的性质;6)核小体沿DNA的定位受不同因素的影响,进而通过核小体相位改变影响基因表达。 8癌细胞的基本特征1.无限增值. (2)接触抑制现象丧失(3)癌细胞间粘着性减弱(4)易于被凝集素凝集(5)粘壁性下降(6)细胞骨架结构紊乱7.产生新的莫抗原。8.对生长因子需要量降低。答案要点:基本生物学特征1、细胞生长与分裂失去控制,具有无限增殖能力,成为“永生”的细胞。2、具有浸润性和扩散性。3、细胞间相互作用改变。4、蛋白表达谱系或蛋白活性改变。5、mRNA转录谱系的改变。6、染色体的非整倍性变化。体外培养的恶性转化细胞的特征1、具有无限增殖的能力;2、贴壁性下降;3、失去接触抑制;4、对生长因子的需求降低;5、致瘤性。9.、分析中期染色体的三种功能元件及其作用。1)自主复制DNA序列(autonomously replicating DNA sequence, ARS):具有一段11-14bp的同源性很高的富含AT的共有序列及其上下游各200bp左右的区域是维持ARS功能所必需的。2)着丝粒DNA序列(centromere DNA sequence,CEN) :两个相邻的核心区,80-90bp的AT区,11bp的保守区。3)端粒DNA序列(telomere DNA sequence,TEL) :端粒序列的复制,端粒酶,在生殖细胞和部分干细胞中有端粒酶活性,端粒重复序列的长度与细胞分裂次数和细胞衰老有关。10简述细胞膜的功能1)分隔形成细胞和细胞器,为细胞的生命活动提供相对稳定的内环境,膜的面积大大增加,提高了发生在膜上的生物功能;(2)屏障作用,膜两侧的水溶性物质不能自由通过;(3)选择性物质运输,伴随着能量的传递;(4)生物功能:激素作用、酶促反应、细胞识别、电子传递等。(5)物质转运功能:细胞与周围环境之间的物质交换,是通过细胞膜的砖运动功能实现的6)细胞膜的受体功能:受体是细胞识别和结核化学信息的特殊结构,其本质是蛋白质。附加:试述G蛋白的结构与功能的关系, G蛋白对细胞膜上腺苷酸环化酶活性的调控。1、G蛋白是三聚体GTP结合调节蛋白的简称,位于质膜内胞浆一侧,由G、G、G3个亚基组成,G和G亚基以二聚体存在,G和G亚基共价结合脂分子锚定于膜上,G亚基本身具有GTPase活性,是分子开关蛋白。在信号传导过程中起着分子开关的作用,也称信号转换蛋白,它将受体与腺苷酸环化酶偶联起来使细胞外信号转换为细胞内信号(cAMP)。当配体与受体结合,三聚体G蛋白解离,并发生GDP与GTP交换,游离的G GTP处于活化的开启态,导致结合并激活效应器蛋白,从而传递信号;当G GTP水解形成G GDP时,则处于失活的关闭态,终止信号传递并导致三聚体G蛋白的重新组装,系统恢复进入静息状态。2、当激素激活腺苷酸环化酶胞内cAMP急剧增加cAMP与蛋白激酶A(Akinase)的调节亚基结合使调节亚基和催化亚基解离蛋白激酶A活化使胞内某些蛋白氨基酸磷酸化产生快速应答; cAMP影响细胞基因表达的效应:激素 G蛋白偶联受体 G蛋白腺苷酸环化酶 cAMP cAMP依赖的蛋白激酶A 基因调控蛋白磷酸化基因转录。激活型激素受体(Rs)是与Gs(与GDP结合的活化型调节蛋白)相互作用激活腺苷酸环化酶,提高胞内cAMP水平,所以为激活型激素受体(如肾上腺素受体);抑制型激素受体(Ri)是与Gi(与GDP结合的抑制型调节蛋白)相互作用抑制腺苷酸环化酶,降低胞内cAMP水平,所以为抑制型激素受体(如肾上腺素受体);填空题1 细胞是 的基本单位,是 的基本单位,是 的基本单位,是 的基本单位。2 实验生物学时期,细胞学与其它生物科学结合形成的细胞分支学科主要有 、 和 。3 组成细胞的最基础的生物小分子是 、 、 、 , 它们构成了 、 、 和 等重要的生物大分子。4 按照所含的核酸类型,病毒可以分为 病毒和 病毒。目前发现的最小最简单的细胞是 ,它所具有的 、 、 是一个细胞生存与增殖所必备的结构装置。1. 病毒侵入细胞后,在病毒DNA的指导下,利用宿主细胞的代谢系统首先译制出 以关闭宿主细胞的基因装置。2. 与真核细胞相比,原核细胞在DNA复制、转录与翻译上具有 的特点。3. 真核细胞的表达与原核细胞相比复杂得多,能在 、 、 、 、和 等多种层次上进行调控。4. 分辨率是指显微镜能够分辩 。5. 电镜主要分为 和 两类。6. 生物学上常用的电镜技术包括 、 、 等。7. 生物膜上的磷脂主要包括 、 、 、 和 。8. 膜蛋白可以分为 和 。9. 生物膜的基本特征是 和 。10. 内在蛋白与膜结合的主要方式 、 和 。11. 真核细胞的鞭毛由 蛋白组成,而细菌鞭毛主要由 蛋白组成。12. 细胞连接可分为 、 和 。13. 锚定连接的主要方式有 与 和 和 。14. 锚定连接中桥粒连接的是骨架系统中的 ,而粘着带连接的是 。15. 细胞外基质的基本成分主要有 、 、 和 、层粘连蛋白和纤粘连蛋白等。16. 植物细胞壁的主要成
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