免疫细胞功能测定.ppt

病原生物学与免疫学教研室 Tel:03733831083 第三讲: 免疫细胞功能测定 主要内容 中性粒细胞吞噬功能实验 E花环形成实验 淋巴细胞转化实验 单个核巨嗜细胞吞噬功能实验 【实验目的】 熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法 通过本实验理解机体的非特异性免疫机制 【实验原理】 吞噬作用（phagocytosis）：是指细胞从周围环境摄取 固体颗粒（如：微生物或较大的细胞残片）的活动 血液中的中性粒细胞是一种小吞噬细胞，通过趋化、 调理、吞入和杀菌等步骤，能吞噬和消化衰老、死亡 细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重 要组成部分 【实验原理】 吞噬细胞（phagocyte）：主要包括中性粒细胞（ neutrophil）和单核吞噬细胞（mononuclear phagocyte） 两类 大吞噬细胞 吞噬细胞的分类 小吞噬细胞 大吞噬细胞 来源： 单核巨噬细胞 存在部位： 血液（单核细胞)、全身结缔组织及小 血管的基底膜组织（巨噬细胞） 功能基础： 富含溶酶体及线粒体 功能： 吞噬病原微生物（寄生虫等），死亡细胞 反应时间及寿命：反应时间长（48h），寿命长 小吞噬细胞 来 源： 血液的中性粒细胞 存在部位： 血液、炎症部位（全身） 功能基础：溶酶体，过氧化物酶及杀菌物质 功 能：主要吞噬化脓菌 反应时间及寿命：反应时间短，数分钟到几小时 ，寿命短，平均数小时 吞噬过程示意图 中性粒细胞的吞噬作用 吞噬过程 【实验器材】 1、无菌肉汤，白葡菌液，PBS缓冲液，瑞氏-姬姆 萨染液 2、注射器,解剖器材,玻片,显微镜等 【实验方法】 1.诱导：实验前1小时给小白鼠腹腔注射(头低位、曲 形进针)无菌淀粉肉汤2ml，诱导浆液渗出 2.注射：给小白鼠腹腔内注射白葡菌液1ml，轻揉腹 部，让小鼠活动 3.取样：注射后30分钟处死小白鼠，抽取腹腔液涂 片 4.干燥：室温或者放温箱中完全干燥标本 5.瑞氏-姬姆萨染液染色： 滴加3滴A液于标本上，以完全盖住标本为宜， 染色40秒。 滴加8滴B液，用洗耳球吹出微风使液面产生涟 漪，使两液充分混匀，染色5分钟。 水洗（勿先倒掉染液，应以流水冲去）。 吸水纸拍干水分，干燥。 6.油镜镜检 油镜使用镜油的原理 光 线 丢 失 光线保留光线保留 油镜的使用方法 低倍镜找到视野后，下降载物台，滴加香 柏油，调节物镜使用油镜镜头，从侧面观 察，用“粗调节器”上升载物台至物镜镜 头浸入油内（有些镜头可以伸缩）；从目 镜观察，用粗调节器下降载物台，在此过 程中可能会有比较清晰的视野一闪而过， 此时，立即停止并调节“细调节器”倒回 ，调整后就可以看到比较清晰的视野 前后左右调节载物台，寻找满意视野 下降载物台，去载玻片，用擦镜 纸和擦镜液擦油镜镜头 油镜找视野 油镜找细胞 收显微镜 低倍镜找视野 【实验结果】 小吞噬 大吞噬 实验二 E花环形成实验 实验原理 CD2是人T细胞独特的表面标志。 在一定的条件下，绵羊红细胞（SRBC）与T细胞表面的 CD2结合，使SRBC环绕在T细胞的周围，形成玫瑰花样 的细胞团。 E花环实验原理示意图 + 油镜下E花环形态 【临床意义】 E花环形成实验可作为人外周血T细胞的鉴定和计数 ，同时作为人细胞免疫功能状态的一个检测指标， 也是分离T细胞的常用方法之一 。 E花环形成实验应用最广泛的是总E花环实验（Et） 以及活性E花环实验（Ea）。 【临床意义】 E花环形成率= E花环阳性细胞数/总T细胞数100% 正常值为689.9% E花环降低：免疫缺陷性疾病、病毒感染 E花环增高：甲亢、慢性肝炎、移植排斥反应 实验三 淋巴细胞转化实验 淋巴细胞在体外培养时，当受到非特异刺激物如 植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）、美洲商陆 （PWM）等有丝分裂原刺激后，转化为淋巴母细胞并且 发生特征性的形态变化 【实验原理】 【实验原理 】 转化和未转化淋巴细胞的形态特征 淋巴母细胞 lymphocytoblast 淋巴细胞转化率 转化率 已转化的淋巴细胞数 淋巴细胞总数 100 临床意义 【正常参考值】 形态学检查法：70%左右 LTT 50%60%为转化偏低； LTT 50%为转化低下。 由PHA刺激而测得的淋巴细胞转化率可反映受试者T细 胞总体水平的应答功能。 临床意义 LTT正常值，见于Down综合症 LTT正常值，见于细胞免疫缺陷或功能低下者，如运 动失调性