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文档简介

实时定量PCR技术 目录 实时定量PCR基本原理 实时定量PCR实验材料 实时定量PCR实验方法 实时定量PCR实验结果 实时定量PCR基本原理 1 实时定量PCR的定义 2 实时定量PCR标准曲线 定量PCR技术：利用荧光信号的变化实时检测PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，最终精 确的对起始模板的定量分析 实时定量PCR的定义 定量PCR三个基本概念 扩增曲线 指数增 长期 平台期 线性增长期 背景期 阈值与C(t)值 阈值：是循环开始315个循环的荧光信号的标准偏差的 10倍，设定在扩增曲线指数增长期 C(t)值：荧光信号（扩增产物）到达阈值时所经过的扩增 循环次数 Threshold line C(t) value C(t) value 18.12 +/- 0.04 Threshold line C(t) value C(t) value 18.12 +/- 0.04 C(t) value 18.12 +/- 0.04 C(t) value 18.12 +/- 0.04 定量PCR的数学原理 理想的PCR反应： Xn=X02n 非理想的PCR反应： Xn=X0(1+Ex)n 方程式两边边同时时取对对数得: log Xn=log (X0 (1+Ex)n) 整理方程式得: log X0= (- log(1+Ex) )n+ log Xn 将C(t)和达到C(t)值时终产物的量Xc(t)带入上式得： log X0= (- log(1+Ex) ) C(t)+ log Xc(t) 初始浓度的对数与循环数呈线性关系 n：扩增反应的循环次数 Xn：第n次循环后的产物量 X0：初始模板量 Ex：扩增效率 荧光强度-循环数曲线 初始模板量对数-C(T)循环数标准曲线 104 103 106 105 102 10 初始模板量越多，C(t)值越小 C(t)与初始模板浓度的对数值成线性关系 实时定量PCR标准曲线 定量原理 浓度的对数值与循环数呈 线性关系，根据样品扩增 达到域值的循环数（Ct值 ）就可分析样品中起始模 板量 定量PCR的实验实验 步骤骤 1标准菌株DNA的提取 2QPCR探针和引物的设计
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