毕业论文——干扰素α1—b蛋白的精纯工艺（实习报告）

分类号； 单位代码： 密 级； 学 号： 唐山师范学院 实习报告 中文实习报告题目：干扰素1b蛋白的精纯工艺英文实习报告题目：Process pure protein interferon 1-b 学生姓名： 指导老师： XX 实习企业： 北京XX基因工程有限公司 专业名称： 生物科学 所在院系： 生命科学系 论文提交日期： 年 月 日目 录摘要IAbstractII引言11实习意义22企业介绍3 2.1公司简介3 2.2公司产品与服务3 2.3企业文化33实习程序4 3.1实习开始4 3.2实习过程4 3.3实习结束44实习过程5 4.1生产部流程5 4.1.1生产部工作流程示意图5 4.1.2 生产部工作总流程介绍4.1.3生产部工作岗位介绍 4.2精纯区 4.2.1精纯区总体介绍 4.2.2精纯区各室7 4.2.2.1精纯一室7 4.2.2.1.1 DEAE设备介绍7 4.2.2.1.2 DEAE层析柱原理7 4.2.2.1.3 DEAE层析溶液准备9 4.2.2.1.4 DEAE层析操作流程9 4.2.2.2精纯二室9 4.2.2.2.1 单抗设备介绍9 4.2.2.2.2 单抗层析柱原理10 4.2.2.2.3单抗层析溶液准备11 4.2.2.2.4单抗层析操作流程11 4.2.2.3精纯三室12 4.2.2.3.1 S100设备介绍13 4.2.2.3.2 S100层析柱原理 4.2.2.3.3 S100层析溶液准备 4.2.2.3.4 S100 层析操作流程 4.3原液准备区4.3.1准备区总体介绍4.3.2准备区设备介绍 4.3.2.1注射用水冷却设备 4.3.2.2洗衣机 4.3.2.3干烤箱 4.3.2.4灭菌柜4.3.3准备区各工作介绍 4.3.3.1配培养基 4.3.3.2洗刷烘干 4.3.3.3洗衣服 4.3.3.4灭菌5体会与收获 146实习意见15参考文献16致谢17附录18摘要：为了增加社会工作经验，2014年6月3号我来到XX基因工程有限公司实习。在实习过程中我参与了1b干扰素原液的制备生产以及药剂的包装工作。通过这段时间的实习，我了解了一些关于药品生产的GMP规章制度，熟悉了药品生产的工作流程，掌握了1b干扰素原液精纯工艺的原理和工作流程以及准备区的一些繁琐的工作。虽然我只在原液精纯区和原液准备区这两个岗位进行了实习，但是学习到了很多东西。精纯区的凝胶过滤原理及操作过程和自己在学校里学到的生物学方面的书本知识和实验知识都有很多相似之处，从而使自己进一步巩固了生物学知识。准备区的工作主要是洗刷，配培养基，灭菌柜灭菌，干烤箱烘干干烤等。由于大部分工作与所学的知识都没有关系，所以锻炼和提高了我自主学习新知识的能力以及适应陌生环境的能力。在这十个月的实习时间里我不仅巩固了课本上所学的一些知识，还学到了一些新的知识和操作技能，除此之外还懂得了该如何更好的与别人沟通交流以及该如何与上司和同事相处。这些是我以后步入社会的基础，可以让我更快的融入一个集体，从而展现出自己的才华和能力，实现自身价值。下面我以论文的形式向大家展现我在实习单位的收获。关键词：XX基因；1b干扰素；精纯工艺；凝胶过滤；药品生产 Abstract:In order to increase social work experience, June 3, 2014 I came to practice Beijing Tri-Prime Genetic Engineering Co,Ltd, In the course of the internship I participated in the 1-b interferon stock solution preparation and pharmaceutical packaging production work. By this time internship, I learned something about pharmaceutical production GMP regulations, familiar with the pharmaceutical production procedure, master the principles and procedure 1-b interferon dope pure technology and some of the tedious preparation areas the work. Although I only take part in fine purification and preparation areas two positions were training, but learned a lot. Gel filtration principle and operation of pure areas and book knowledge and experimental knowledge of biology themselves learned in school have a lot of similarities, so that their further consolidation of biological knowledge. Job planning area is mainly scrub with medium sterilizer sterilization, drying oven dry dry roast. Since most of the work with the knowledge learned it does not matter, so exercise and improved my self-learning ability of new knowledge and the ability to adapt to the unfamiliar environment. In ten months of practice time I not only to consolidate some of the knowledge learned in the textbooks, but also learned some new knowledge and skills, in addition to understand how to better communicate and interact with others and how to get along with your boss and colleagues. These are my future into the foundation of society, it can make me faster integration into a collective, and thus show their talents and abilities, realize their own values. Here I show to you in the form of papers I learned in practice units.Key words:Three yuan gene; 1-b interferon; pure technology; gel filtration; pharmaceutical production引言从学校刚走出来的我们，无论能力还是见识都还有所欠缺。但是我们有一天早晚得步入社会，所以我选择了实习，希望通过此次实习可以提高自己的学习和操作能力，同时也锻炼自己的与人相处的能力。在这篇论文里我将把我在实习过程中所得到的收获都写出来，这不仅是为了圆满的完成实习任务，也是为了给自己的实习留下一个美好的回忆。XX基因是中国第一家以基因工程命名的生物制药公司，主要从事1-b干扰素（运德素）的研发，生产和销售。在这次实习过程中，我熟练的掌握了蛋白的精纯工艺。还有准备区干烤箱，灭菌柜一些设备的使用。同时对发酵，粗纯，灌装等岗位稍微有一些了解。公司生产的干扰素类型主要有水针和粉针两种，规格包括10（30,50）ug/ml。XX基因的目标是通过不懈努力使公司成为三理想企业， 即：对顾客，XX基因是优质、高效药品的理想生产与服务企业；对员工， XX基因是学习创新，实现自我价值的理想工作与学习企业；对股东，XX基因是高成长、高收益的理想投资企业。在这样的公司里实习我觉得我是幸运的。1实习的意义 实习是我们大学学习阶段重要的实践性教学环节之一，是理论和实践相互联系，相互结合的重要方式，可以提高大学生的政治思想水平，自学，和动手操作能力以及融入社会所需要的必要的素质。在XX基因工程有限公司生产部实习的过程中，我了解了生物制药行业发展的实际情况，可以加深理解所学的专业知识，从而进一步提高自主学习的能力和发现问题，分析问题和解决问题的能力，为以后步入社会工作奠定了基础。可以使自己能更快的学习接收一些新的知识和操作。面对一些突发状况时，能够冷静下来分析和解决，所以实习可以增长见识，提高能力。 在此次实习过程中，我知道了1-b干扰素是如何从大肠杆菌中一步步的被制备成粉针药剂和水针药剂的。对生产部一部分的工作有了一定的了解，同时也可以认识和了解到自己对于该专业的什么工作比较喜欢，从而对以后步入社会工作的工作方向有了大致的选择，而使自己在毕业时不至于感到特别迷茫，一点目标也没有。为自己将来的职业发展方向提前做好前提，为尽快调整好职业发展道路，实现自己从校园到社会的无缝衔接。此外，非常重要的是，参与实习，让大学生脚踏实地的参与到工作中来，解决现在大多数大学生眼高手低，浮躁拖沓、容易推卸责任的毛病，职场的磨练，会让人更加的成熟和有责任心。2企业介绍2.1公司简介 北京XX基因工程有限公司，是一家现代医药生物技术企业，主要从事研制、开发、生产和销售医药生物技术产品，包括基因工程药物、基因工程疫苗和诊断试剂，并从事与之相关的技术贸易与技术服务业务。 现任董事长由印小明，总经理程永庆。2.2公司产品与服务 运德素XX基因于1999年5月通过国家GMP企业认证。其主要产品“运德素”是国家一类新药，用于治疗多种病毒性疾病和恶性肿瘤。“运德素”是侯云德院士从健康中国人基因中成功克隆与表达出来的重组人1b干扰素。运德素适用于治疗病毒性疾病和某些恶性肿瘤,已批准用于治疗慢性乙型肝炎,丙型肝炎和毛细胞白血病,已有临床试验结果或文献报告用于治疗病毒性疾病如带状疱疹,尖锐湿疣,流行性出血热和小儿呼吸道合胞病毒肺炎等有效,可用于治疗恶性肿瘤如慢性粒细胞白血病,黑色素瘤,淋巴瘤等,还适用于治疗病毒性疾病和某些恶性肿瘤,已批准用于治疗慢性乙型肝炎,丙型肝炎和毛细胞白血病,已有临床试验结果或文献报告用于治疗病毒性疾病如带状疱疹,尖锐湿疣,流行性出血热和小儿呼吸道合胞病毒肺炎等有效,可用于治疗恶性肿瘤如慢性粒细胞白血病,黑色素瘤,淋巴瘤等.目前剂型有粉针 水针两种，且水针已获得国家专利。 研究开发：实验室XX基因2001年被国家人事部正式批准设立博士后科研工作站。该工作站拥有一支具有现代医学、药学与生物技术等学科背景的高素质专业研发队伍，GLP标准实验室设备齐全，具有先进的程控发酵系统、蛋白纯化系统及相关的基因工程研究试验仪器，可完成从分子生物学、蛋白质提纯、细胞培养、质量控制、药理毒理、制剂学研究、直至临床研究等系统的生物技术产品研发工作。同时，利用丰富的网络信息资源，研发中心具有全面跟踪国内外新药研究动向的快速反应能力。整体研发实力在国内处于领先地位。工作站联合国内一流科研机构如复旦大学、北京大学、清华大学、中国协和医科大学、军事医学科学院等共同培养博士后。 研究方向：基因工程蛋白类药物：治疗病毒性疾病、肿瘤、心血管病以及免疫病等各类药物； 蛋白质药物特殊制剂：长效制剂、缓释制剂、粉雾剂、透皮吸收剂、口服制剂等； 治疗性抗体：治疗肿瘤、自身免疫性疾病等的人源化抗体。 基因诊断和基因治疗：基因诊断平台技术及试剂盒，有应用前景的基因治疗方法； RNAi: 针对病毒性疾病、肿瘤等的新设计和制剂研究； 干细胞和组织工程：干细胞和组织工程的基础与应用； 疫苗：创新性和替代性疫苗和制剂； 临床前药物评价：开发新的评价方法。2.3企业文化 XX基因的目标是通过不懈努力使公司成为三理想企业， 即：对顾客，XX基因是优质、高效药品的理想生产与服务企业；对员工， XX基因是学习创新，实现自我价值的理想工作与学习企业；对股东，XX基因是高成长、高收益的理想投资企业。2.4管理团队 XX基因实行董事会领导下的总经理负责制，原任董事长由中国工程院院士侯云德先生担任，现任董事长由印小明先生担任。总经理程永庆先生是中国最早从事高技术创业与风险投资的职业经理人之一。3实习程序 3.1实习开始 当我们被一辆面包车拉到XX基因工程有限公司的那一刻起，我们的实习便拉开了帷幕。刚来到这，所有的事情都感觉那么新鲜，我们在公司领导的带领下，先参观了制剂车间，包括配互，准备，灌装等工作岗位，还有一些大型的机器。在车间里转着，我们好像进了迷宫一样。当我们的车间分配好后，韩师傅又带着我们参观介绍了原液车间，原液车间比制剂车间还要复杂，时不时的就走错方向。参观完毕后，我们做的第一项工作就是打扫卫生。墙，房顶，地面，桌子都需要用消毒剂擦完，再用水擦一遍，没过几天我们便被分到新的岗位。3.2实习阶段 我被分配的新岗位便是精纯，精纯是原液车间比较重要和关键的一个岗位，被分到这个岗位我很开心也很知足，精纯区的操作的合格与否直接关系到原液的产量和质量，在精纯的期间我先后学习到了DEAE阴离子交换层析系统的原理和操作流程，单抗亲和层析系统的原理和操作流程，S100分子筛层析系统的原理和操作流程。在精纯实习了大约九个月后，我被调到了原液准备区，在准备区我学到了灭菌柜，干烤箱，洗衣机的操作规则及该如何配制发酵所用的培养基，还有该如何清洗玻璃容器，准备区的工作与精纯比起来比较繁琐，虽然如此，但和大家在一起工作还是感到很开心。实习期间学校的老师来看过我们，让我们对实习更充满动力了。3.3实习结束 刚来准备一个月的时间，对一些操作流程掌握的还不是特别透彻，便要结束实习了。回想一个月的实习生活，有开心的也有不开心的的事，但现在想想所有的事情都是值得回忆的。实习结束后，我们需要写实习毕业论文，让我又把十个月里学到的知识和操作又回忆了一遍。4实习过程4.1生产部流程4.1.1生产部工作流程图4.1.2生产部工作总流程介绍 从工作流程图可以大体了解生产部主要由原液车间，制剂车间，包装车间三大车间组成，原液车间主要包括发酵，粗纯，精纯，准备四个区域，制剂车间主要包括准备，洗瓶，灌装，压盖四个区域。大肠杆菌菌种经原液车间经四个区域制备成1-b干扰素蛋白原液，制备出的原液拿到制剂车间经一系列操作被制成粉针和水针两类药剂，最后制出的药剂经包装车间包装成箱1。4.1.3生产部工作岗位调动介绍 从来公司实习以来，因为工作需要和人事方面的变动，我在精纯区实习了九个月，最后一个月被调到原液准备区，精纯区分为三个室：精纯一室，精纯二室，精纯三室。分别进行凝胶过滤操作的层析系统为DEAE阴离子交换层析系统，单抗亲和层析系统，S100分子筛层析系统。因为在精纯待得时间比较长，所以对精纯区三个室层析系统的原理和操作规则都比较熟悉，所以在论文里我会详细的描述一下精纯区的工作。对于原液准备区，因为待了一个月，所以对里面的一些操作也稍微有了一些了解，我会把我了解到的一些操作流程都写出来，以保证此次实习论文的完整性，同时我也希望通过此次实习毕业论文可以为我的实习画上一个圆满的句号。4.2精纯区4.2.1精纯区总体介绍 精纯区的工作总体来说就是凝胶过滤。由粗纯区过滤完的菌体上清液传送到精纯区，通过DEAE阴离子交换层析系统单抗亲和层析系统S100分子筛层析系统后制备成1-b干扰素蛋白原液。由精纯制备出的1-b干扰素蛋白原液经质保工作人员送到质检部检验，其纯度必须大于等于95才算合格。将合格的原液送到一楼制剂车间制备成药剂。精纯是原液车间最后一个步骤又因为精纯区为C级区，所以相对于原液车间的其他区域来说，在操作方面要更严格一些，以避免要求的纯度达不到或者沾染杂菌。精纯在整个药剂生产中都占据着特别重要特别关键的地位，它直接关系到药剂的质量和多少，从而关系到公司的利益，所以精纯在生产的地位显而易见2-3。4.2.2精纯区各室介绍4.2.2.1精纯一室4.2.2.1.1DEAE设备介绍 精纯一室的设备主要是DEAE阴离子交换层析系统，此系统包括DEAE阴离子交换层析柱，医用蠕动泵，8823A型紫外检测仪，3057型便携式记录仪四大部分。层析柱里装的是DEAE-Sepharose凝胶，用于过滤掉菌体上清液中的一些杂质和部分杂蛋白，对上清液进行初步纯化。蠕动泵通过泵速来控制运输到层析柱中液体流速的一种输送装置。检测仪是用于检测通过DEAE层析柱后菌体上清液的蛋白浓度,灵敏度设为1A。记录仪是用于记录检测仪里检测的结果,记录仪量程设为100mV。（见图1）4.2.2.1.2DEAE层柱原理 生物大分子如蛋白质、核酸等多价电解质有不同的分子大小及电荷排列方式。离子交换剂是通过化学键合的方法向惰性支持物上连接可解离的化学基团后的产物。可人为选择性地使其带有正电荷或负电荷。当在一定pH下净电荷为负的蛋白质分子可通过静电力结合到带正电荷的离子交换剂(阴离子交换剂) 。 大分子依其与离子交换剂亲和力的不同，而在以不同牢度被吸附于离子交换剂，通过改变离子强度或(和)pH使大分子再从离子交换剂上先后被洗脱下来。 离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂；而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。由于蛋白质也有等电点，当蛋白质处于不同的pH条件下，其带电状况也不同。阴离子交换基质结合带有负电荷的蛋白质，所以这类蛋白质被留在柱子上，然后通过提高洗脱液中的盐浓度等措施，将吸附在柱子上的蛋白质洗脱下来。结合较弱的蛋白质首先被洗脱下来4-5。4.2.2.1.3DEAE层析溶液准备（1）DEAE浓缩液：Tris 121.2g加入800ml注射用水溶解，用浓盐酸调PH为7.50.05，再加注射用水定容至1000ml。（2）0.5mol/LNaoH：NaoH60g,加注射用水溶解后定容至3L。（3）DEAE平衡液：量取250ml浓缩液，加注射用水至10L。（4）DEAE洗脱液：Tris3.03g Nacl17.53g加注射用水600ml,溶解后，用浓盐酸调PH7.00.05后，用注射用水定容至1L。4.2.2.1.4DEAE层析操作流程（1） 装柱：将DEAE凝胶均匀装入处理好的层析柱内，连接层析系统，用注射用水压实柱胶，并检验是否合格（柱床内柱胶表面平整，无断层，无气泡）。若不更换填料，无需每次都装柱，装柱后用平衡液平衡10个柱体积，流速控制为4050ml/min。（2） 上样：上样前，要先测PH是否为7.50.05并取样，调节检测仪T为100； 0.02A为0，再将样品用蠕动泵泵入层析柱里，流速为30-40ml/min。（3） 冲洗：上样结束后继续用平衡液冲洗十个柱床体积，流速为40-50ml/min。（4） 洗脱：用洗脱液洗脱，洗脱流速20-25ml/min，紫外检测值超过5mv时，开始收集蛋白峰，降到20mv时停止收集，将收集的样过滤后取样，至-35保存。（5） 清洁：用0.5mol/lNaoH2000ml冲洗柱床3个体积，冲水至出口液体呈中性，冲平衡液十个柱体积至液体呈中性。4.2.2.2精纯二室4.2.2.2.1单抗层析设备介绍 精纯二室的设备为单克隆抗体亲和层析系统。该系统主要去除一些杂蛋白而筛选出单一的目的蛋白，此系统的组成除了柱胶不同外其他都与DEAE的组成相同，用途也相同。（如图2） 图24.2.2.2.2单抗层析原理 样品在适宜结合目标分子的特定条件下结合到一个对应的位置上（配基），目标物专一性的结合到配基上并且是可逆的。在适宜于结合分子洗脱的条件下，回收目标蛋白质，使用可以专一性的与目标分子竞争配基的物质进行洗脱，或者通过非特异性的方法，如改变PH值，离子强度或者溶液极性，目标蛋白质以被纯化和浓缩的方式进行收集6-7。4.2.2.2.3单抗层析溶液准备 PBS溶液：磷酸氢二钠42.1g 磷酸二氢钠20.7g 氯化钠131.4g用注射用水溶解并定容至18升。 PBST溶液：磷酸氢二钠42.1g磷酸二氢钠20.7g氯化钠1051.2g 吐温-20 90ml用注射用水溶解并定容至18升。甘氨酸溶液：甘氨酸和氯化钠4.2.2.2.4单抗层析操作流程（1） 上样：用PBS缓冲液将样品的蛋白浓度稀释到1mg/ml以下，上样前设定检测仪灵敏度为0.5A，记录仪灵敏度设为100mv，然后将样品泵入单抗柱，流速为10-15ml/min。（2） 平衡：用PBS缓冲液平衡3个柱体积，流速为20-25ml/minPBST缓冲液平衡5个柱体积，流速为20-25ml/minPBS缓冲液平衡5个柱体积至基线流速同上。（3） 洗脱：用甘氨酸缓冲液洗脱流速为10ml/min，紫外检测值为5mv时开始收集，降到5mv时停止收集，调PH，过滤，取样后放在-35保存。（4） 平衡：用PBS缓冲液冲洗平衡至PH7.0,备用。4.2.2.3精纯三室4.2.2.3.1S100层析设备介绍 精纯三室的设备为S100分子筛层析系统。该系统主要筛选出小分子的目的蛋白原液，其纯度必须95才算合格，该系统的组成除了柱胶不同外其他与精纯一室的组成相同，用途也相同。（如图3） 图34.2.2.3.2S100层析原理 凝胶过滤柱料颗粒是球状的，样品上柱，缓冲液和样品流过柱子。小一些的分子移动的更远，进入柱料，在柱子中停留时间更长，当缓冲液持续流过柱子，大于柱料孔的分子不能进入孔中，流过柱子。小分子进入空中延时流过柱子。大分子首先流过柱子，紧接着依次是小一些的分子。全部分离过程需要一个全柱体积的缓冲液通过凝胶过滤柱料8-9。4.2.2.3.3S100层析溶液准备 PBS和单抗的配制相同，0.5mol氢氧化钠4.2.2.2.4S100层析操作流程（1） 确认层析柱名称以及上样用单抗制品的批号，体积。（2） 上样前设定检测仪灵敏度为0.2A，记录仪灵敏度为100mv。（3） 上样流速为15-25ml/min，上样结束后，用PBS缓冲液冲洗柱子，流速为25-30ml/min,紫外检测值为50mv时开始收集蛋白峰降到10mv时停止收集。（4） 过滤取样后放在-35下存放。（5） 样品收集完后，用15L0.5mol的氢氧化钠溶液冲洗柱子静置2小时再用20升的注射用水和PBS缓冲液冲洗柱子，直至流出的液体显中性。4.3原液准备区4.3.1准备区总体介绍 原液准备区的工作比较琐碎，最主要的几工作是配培养基，洗涮烘干，洗衣服，灭菌四大项工作。培养基是为发酵配得LB培养基。洗刷烘干主要是将精纯发酵用完的瓶子洗刷出来后再放到干烤箱里烘干干烤，为他们下次使用准备好充足的灭过菌的瓶子。洗衣服是将精纯C级区的衣服每天洗一遍，准备发酵D级区的衣服一周洗一次。灭菌是精纯发酵用过的一些物品灭菌，还有配过的一些溶液和培养基灭菌。准备的工作总体来说就是这些，其实都是为精纯和发酵服务的。4.3.2准备区设备介绍4.3.2.1注射用水冷却设备按下墙壁上注射用水冷却点下方的绿色按钮，绿色指示灯亮，（如图4）注射用水开始冷却，待黄色灯亮即冷却到合适温度，此时可以使用，不用是再按一下绿色按钮。“注射用水：纯化水再经蒸馏所制得的水，亦称为无热原水。为配制注射剂用的溶剂。”5 图44.3.2.2洗衣机 洗衣机为分洗型全自动洗衣机，按照规定设置好程序后按下启动暂停键便可以开始洗衣服。（如图5） 图5 4.3.2.3干烤箱 干烤箱是RXH干燥灭菌烘箱，也被称为热风循环洁净烘箱其原理是热风循环烘箱空气循环系统采用风机循环送风方式，风循环均匀高效。风源由循环送风电机采用无触点开关带动风轮经由加热器，而将热风送出，再经由风道 至烘箱内室，再将使用后的空气吸入风道成为风源再度循环，加热使用。确保室内温度均匀性。当因开关门动作引起温度值发生摆动时，送风循环系统迅速恢复操作状态，直至达到设定温度值。（见图6） 图6 该干烤箱的操作流程：接通电源，进入控制屏主界面。点击参数设定进入参数设定界面，烘干阶段设恒温时间90min 恒温设定100 报警温度300打印时间10min;干烤阶段设恒温时间为60min恒温设定250报警温度300打印时间5min。（如图7） 图74.3.2.4灭菌柜 该灭菌柜是脉动真空灭菌柜，其原理是在连续进蒸汽条件下，抽真空到10.713.3 kPa(80100 mmHg)的绝对压力，重复23 次；或抽真空到10.713.3 kPa(80100 mmHg)的绝对压力后，进一次蒸汽(一个蒸汽脉冲)，重复23次，从而使腔体内反复通入无热原蒸汽，达到腔内及灭菌物品冷空气的有效置换，使腔内无冷点。当腔内压力稳定时，灭菌蒸汽均匀地分布在腔内灭菌物品的有效部位进行彻底灭菌，保证了灭菌效果。连续进蒸汽有利于防止和降低物品中空气的残留量。脉动真空灭菌器腔室中的温度-压力曲线如图2所示。当然，如果因被灭菌物品性质比较特殊而有必要时，可采用3 次以上的蒸汽脉冲和抽真空步骤。制药企业常用的灭菌器一般属脉动式灭菌器，灭菌程序完成后，还需检漏，因此需进行相应的功能设置。（如图8）10-11 图8 灭菌柜的操作流程:a半开灭菌柜蒸汽阀以及夹套蒸汽阀2min，将蒸汽管道的冷凝水排放干净，然后再打开上述蒸汽阀，压缩空气阀，并确保蒸汽压，压缩空气压以及水压均大于2kg/cm。B打开灭菌柜总开关，并将所有电闸开关合上，并打开电源缓冲器开关。C将要灭的物品放在转运车上推进灭菌室内，四周不要贴器壁和门板。D点击触屏下方门控操作键，进入门控操作界面，右手摁住灭菌柜大门，左手同时长按装载门关键，关闭灭菌柜大门。E点击配方键，根据灭菌对象选择相应的程序类型以及程序名称，点击下载键，点击启动键进入程序启动界面，输入生产批号，点击启动程序键，开始灭菌。F灭菌结束后，点击启动，单击程序复位键，灭菌结束。待压力降至0.06Bar，温度85以下便可打开灭菌柜的门，操作结束。（见图9） 图94.3.3准备区各工作介绍4.3.3.1配培养基 培养基中需要酵母粉55g，蛋白胨110g，然后加11升得注射用水溶解，并分装在八个2000ml的三角瓶中各装1250ml，两个1000ml三角瓶中各装500ml。还需要准备三瓶注射用水一个2000ml三角瓶1250ml,两个100ml的三角瓶50ml。1500g的葡萄糖分装在四个三角瓶中两个2000ml的三角瓶中各装500g并稀释定容至1250ml，两个1000ml的三角瓶中各250g，并定容稀释到500ml，还得准备四个补料瓶。最后将所有的东西放在灭菌柜里115灭菌30min。4.3.3.2洗刷烘干 所有的玻璃瓶要先用纯化水按照规定清洗三遍，再用注射用水按照规定清洗三遍便可以放在干烤箱里进行烘干，烘干完毕后等温度降到50左右，便可以打开烤箱，用锡箔纸把玻璃瓶的口封上，再进行干烤。4.3.3.3洗衣服 C级服需要每天都洗一边，D级服一周一洗，清洗完的衣服要按照号码，叠放在一起，并装在对应的袋子里。按照区分好，在适当的时间分发给各个区。4.3.3.4灭菌 灭菌包括培养基灭菌：115 30min 织物灭菌121 30min 普通液体灭菌：12130min PBS,PBST,Gly,洗脱液，平衡液等灭菌：12140min12-14。5体会与收获 刚上岗工作时，感觉什么东西都是新鲜的，都想去学。车间的领导都很有耐心，无论我们提出什么样的问题，都会为我们解答。车间的老员工们脾气性格相当随和，细心的教给我们该怎样去操作。虽然如此，但是这些操作流程什么的我们是第一次接触，而且有些比较复杂，一时记不住也分不清楚，所以有时就会比较烦躁，不知道该怎么办才好。现在想想遇到问题，越心烦意乱，就会越想逃避。那问题就会永远在那摆着，有些问题或许越拖越严重。实习的过程中，我深深的体会了这句活，所以遇见问题就要静下心来想一想，到底哪里出现了问题，该怎么去解决？认真的将思绪整理一下，或许就会想到好的解决方法。所以实习过程中我提高了自己发现问题，分析问题，解决问题的能力，这是自己的一大收获。这对自己以后的工作生涯会有很大的帮助，我不敢说以后的工作都会做的井井有条，但至少不会像刚开始工作时那样遇到一点问题就心烦，乱作一团。这让我更好的体会到自己工作的意义。 实习本来就是自己在看和问老员工操作的过程中，不断地去总结经验和技巧。以前老师在课上总讲一些理论的知识，由于自己求知欲很差，所以很多都是过滤性听讲，但是到了这不一样，在这是将理论和实际相结合，弥补了以前单一理论教学的不足，从而进一步巩固和深化了所学的知识。 来这实习，我还意识到了团队合作的重要性，并敢于表现，在学校的时候接触外面的人比较少，即使是同学也是和自己宿舍的人接触的最多。但是来公司不一样，接触最多的是我们岗位和车间的人，相处了一段时间后我知道该怎么与同事们相处。有些工作不是凭一个人就能完成的，需要大家共同完成，但是每个人的想法都不一样，所以就需要我们互听意见并敢于说出自己的意见，综合出一个最好的意见来完成工作。若一意孤行，就会造成更多的矛盾和冲突。 在实习的过程中，我还了解了生物制药方面的前景，生物制药副作用小，而且用量小。所以生物制药会越来越受到大家的喜爱。很庆幸自己能来XX基因实习，不仅提高了自我认知和与别人沟通的能力，还锻炼了我动手操作和发现，分析，解决问题的能力。我还学到了精纯区凝胶过滤的原理和操作，这些对我以后步入社会的发展很有必要。更重要的是我认识了一帮真心待人，耐心教人的大哥，大姐们，还和曾经不太熟的同班同学建立了很深的实习情，这些人我一辈子都不会忘。6实习意见 在XX基因待了大约十个月，对公司有了少许的了解。下面我想发表一下自己的意见，由于自己对公司的还不是特别了解，若意见有不妥当的地方，还请公司各领导见谅，并指正出来，我一定会虚心接受，并给公司提出更精准的意见。进入公司，第一印象肯定是公司的环境，公司的卫生是没得说，到处都很干净，整洁。但是我觉得公司应该绿化一下，多种些绿色植物，再稍微搭配一些花，这样让走进公司的人心情愉悦，我相信任何一个员工都想在一种轻松的氛围内工作。还有就是公司的企业文化，一进公司在大厅里有几个字敬业，勤业，精业让人对公司的精神风貌有了一定的了解。但是公司的企业文化还需要宣传一下，让员工更了解公司，以至把公司当成自己的家一样。有谁不会爱自己的家呢？我相信公司一定会发展的更好。还有就是公司应该定期的给员工进行培训，无论是技术还是原理都应该涉及到，这样员工才会更加熟悉自己的工作，以至可以在工作中少犯错误。还有要设定一定的奖惩制度，这样才会提高员工的积极性。 对于学校，我希望学校能和公司长保持联系，多了解一下我们实习生的情况，并给我们的实习过程提出建议，以至于我们可以更好地融入到公司。参考文献1 王波等.