病毒感染的检查防治.ppt

病毒感染的检查 方法 与防治原则 第25章 病原生物学系 强华 第一节 病毒感染的检查 一、标本的采集与送检 用于分离培养的标本： a、采集急性期标本 b、采集感染部位标本 c、冷藏 血清学诊断的标本： 急性期和恢复期双份血清，-20保存 二、病毒的分离培养与鉴 定 （一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养 1.最常用细胞培养 2.鸡胚接种：主要用于 流感病毒的分离 3.动物接种少用：主要 用于狂犬病病毒、 乙型脑 炎病毒的分离 常用的细胞培养 （二）病毒在细胞内增殖的指标 1.细胞变化 CPE、多核巨细胞、包涵体 2.红细胞吸附 3.干扰现象 4.细胞代谢改变 病毒在细胞内增殖的指标 正常细胞 病变细胞 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落 1 1细胞病变效应细胞病变效应( (cytopathic effect, CPEcytopathic effect, CPE) ) 麻疹病毒麻疹病毒 感染细胞感染细胞 呼吸道合胞病呼吸道合胞病 毒感染细胞毒感染细胞 形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞 形成包涵体形成包涵体( (inclusion bodyinclusion body) ) （三）（三）病毒数量和感染性病毒数量和感染性测定测定 1、蚀斑试验 2、ID50 或 TCID50 病毒感染鸡胚、动物或细胞后，引起 50% 发生死亡或病变的最小量。 病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶 ，称蚀斑，蚀斑是由一个感染性病毒体复制形 成的，称蚀斑形成单位，病毒悬液中的感染性 病毒量以每毫升的蚀斑形成单位PFU来表示。 三、病毒感染的血清学诊断 四、病毒的快速诊断 （一）形态学检查 （二）检测病毒抗原 抗体测病毒感染脱落细胞或分泌物细胞中的抗原 （三）检测病毒抗体已知抗原测血清中抗体测IgM， 或动态测IgG（双份血清） （四）检测病毒核酸 PCR试验 引物 核酸杂交试验 探针 基因芯片技术 病毒感染的检查 检测内容 查病毒 查特异性抗体 病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养 . 第二节第二节 病毒感染的特异性预病毒感染的特异性预 防防 灭活疫苗灭活疫苗（inactivated vaccineinactivated vaccine） 活疫苗活疫苗（living vaccineliving vaccine） 重组载体疫苗重组载体疫苗（recombinant carrier vaccinerecombinant carrier vaccine） 亚单位疫苗亚单位疫苗（subunit vaccinesubunit vaccine） 化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗重组疫苗（recombinant vaccinerecombinant vaccine） 核酸疫苗核酸疫苗（nucleic acid vaccinenucleic acid vaccine） 一、人工主动免疫常用生物制一、人工主动免疫常用生物制 品品 二、人工被动免疫常用生物制品二、人工被动免疫常用生物制品 免疫球蛋白免疫球蛋白 血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂细胞免疫制剂 IFN-IFN- 、 、 细胞因子细胞因子 IL-2 IL-2、IL-6IL-6、IL-12 IL-12 TNF TNF 、CSFCSF 淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞 LAKLAK细胞细胞 人工被动免疫 （artificial passive immunization） 如：1.血清免疫球蛋白 用于甲肝、麻疹、脊髓灰质炎预防 2.高效价含乙肝病毒表面抗体的免疫 球蛋白 用于预防母婴乙肝传播 策略：阻断病毒复制周期中吸附穿入、 脱壳、核酸复制、或装配释放 任一环节，从而抑制病毒复制 要求：抗病毒药物能穿入细胞选择性地 抑制病毒复制又不损伤宿主细胞 第三节 病毒感染的治疗 核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂 中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗 抗抗病毒化病毒化学制学制 剂剂 反义寡核苷酸反义寡核苷酸 干扰RNA 核酶（核酶（ribozymeribozyme ） 一、药物治疗 1.核苷类药物 2.病毒蛋白酶抑制剂 3.天然药物如中药 二、基因治疗 1.反义寡核苷酸 2. 核酶 3.干扰RNA 三、免疫治疗 1.中和抗体（单抗）2.治疗性疫苗3.干扰素 一、药物治疗 （一）核苷类药物 1.抑制病毒基因复制 碘尿苷(疱疹净)用异常嘧啶取代胸腺嘧啶,眼 疱疹病毒感染。也可渗入细胞DNA,故有毒性。 无环鸟苷(啊昔洛韦) ，竞争病毒复制酶。 2.抑制病毒基因转录： 病毒唑 （二）蛋白酶抑制剂 “鸡尾酒”治疗HIV，3TC加蛋白酶抑制物 （三）天然药物：黄芪、板蓝根、大青叶 二、基因治疗 1.反义寡