过敏源检测.ppt

1,我武生物市场部,新员工产品培训,第五章 过敏原检测,2,过敏原,过敏原/变应原-常见诱因,凡经吸入或食入等途径进入体内后能引起IgE类抗体产生并导致变态反应的抗原性物质 过敏原种类 食入性：牛奶、鱼虾、鸡蛋等； 吸入性：尘螨、花粉、动物皮屑、真菌、昆虫等； 接触性：油漆、清洁剂、乳胶等； 药物过敏：磺胺类、抗生素类等； 昆虫毒液,3,过敏原检测的临床意义,（1）过敏性疾病的诊断必须明确过敏原 典型的过敏症状病史：症状、发作环境、家族遗传史、体格检查等 试验诊断：过敏原检测试验,ARIA2008： 变应性鼻炎诊断是根据典型的过敏症状病史和与其相一致的试验诊断结果而共同做出的,4,过敏原检测的临床意义,（2）过敏性疾病的治疗必须明确过敏原,过敏性疾病的治疗是一项系统工程，WHO推荐 “四位一体”的最佳治疗方案。,避免过敏原 对症药物治疗：抗炎、缓解症状 变应原特异性免疫治疗：SLIT、SCIT 患者教育,5,过敏原检测的临床意义,（3）给指导患者提供依据 针对性地对患者进行教育，指导有效避免过敏原 早期确定出有可能发展成变态反应疾病的高危婴幼儿，提供机会来防止疾病加重,6,尘螨是国内的主要过敏原,单一尘螨过敏原检测的意义,尘螨是国内最主要的过敏原，80%以上的过敏性疾病患者都对尘螨过敏。 多重过敏患者如其症状病史与尘螨相关性高，单一尘螨脱敏亦可保证脱敏疗效。 目前国内上市用于脱敏治疗的药物仅针对尘螨过敏患者 其他常见的食物与花粉等过敏原可通过问诊确定并加以避免。 单一尘螨点刺普查价格便宜，更易在科室开展。,鼻部：鼻痒，阵发性喷嚏，清水样鼻涕，鼻塞，嗅觉障碍，天转凉流鼻涕，天转热打喷嚏。 咽喉：慢性咽喉炎 肺部：慢性咳嗽，咳嗽，呼吸困难同时们有喘息，常在清晨或夜间发生 眼部：不同程度眼痒，异物感，畏光流泪，充血，灼烧干涩，伴有分泌物 皮肤：痛痒，有干燥史，红斑，大小不等的小丘疹或水肿，渗出或结痂，表皮剥落、苔藓化,哪些症状需尘螨过敏原检测？,9,临床使用的过敏原检测方法,体外实验：主要是特异性IgE检测（血检） 体内试验：主要是皮肤点刺试验 激发试验 鼻粘膜激发、 口腔激发、 支气管激发、 食物激发、 药物激发、 现场激发 皮肤试验 划痕试验； 点刺试验； 挑刺试验； 皮内试验； 特应性斑贴试验,10,基于sIgE水平的检测方法,11,血清检测(详见竞品分析),体外检测，血清里游离的IgE ImmunoCAP “敏筛”过敏原检测系统（AllergyScreen） 欧蒙、全自动酶免仪(e-STAR plus) 等 目前普遍采用标记免疫分析技术 放射性标记免疫分析法（放免法） 酶标记免疫分析法（酶标法） 酶荧光免疫标记分析法（CAP检测系统）,12,变应原检测-体外sIgE检测,13,血清体外sIgE检测原理,96孔ELISA板,14,sIgE诊断标准,血清sIgE水平分级标准,15,体内试验,激发试验（结膜、支气管、口腔） 皮肤试验 (问世于1909年) 划痕试验（Scratch tests） 点刺试验（Prick tests） 挑刺试验（Puncture tests） 皮内试验（Intradermal skin tests ） 特应性斑贴试验 （Atopy patch tests）：型过敏性疾病,16,激发试验,鼻激发、支气管激发、口腔激发、粘膜激发 金标准 操作繁琐，存在危险性,17,皮肤点刺试验,Skin Prick Tests (SPT),18,皮肤点刺试验的优势,WAO认为皮肤试验是检测IgE的金标准，是准确的IgE检测方法；GA2LEN和ARIA认为SPT是诊断患者是否过敏的首选方法；EAACI推荐为最佳体内诊断方法，现为欧美公认的最方便、最有效的过敏原诊断方法 安全性高，操作简便，快速（10-15分钟出结果） 灵敏度高，临床相关性好 患者几乎无痛苦，小儿也能接受 费用低,19,适应症与禁忌症,适应症 IgE介导的变应性疾病的诊断，结合患者症状、病史，可以作出致敏原的确诊 从婴幼儿到老年患者都可以使用，但要注意结果解读 禁忌症 无已知禁忌症 患严重影响全身状态的疾病； 试验部位发生病理变化。当患者手部异位性皮炎发作时，可能出现假阳性反应。在这种情况下，应代之在背部进行点刺试验，或待疾病缓解后，才进行点刺试验 怀孕期； 接受受体阻滞剂或ACE抑制剂治疗者； 肾上腺素禁忌症,20,SPT原理,皮肤点刺试验是一种体内特异性免疫学检测方法,局部皮肤反应： 毛细血管扩张(红斑)，通透性增强，渗出增加，最后出现风团和红晕反应,21,SPT的安全性,点刺过敏原进入皮肤的量为1-510-9克（纳克级） 吸入性过敏原点刺严重不良反应少，因为日常经常接触，有耐受能力，日常过敏原量甚至为微克级 询问有无严重食物过敏史,22,不良反应及其处理,不良反应 可能发生局部过敏反应，如瘙痒，但很轻微 系统性不良反应发生率极低 处理方法 一般不需用药，可在1小时内自行缓解 反应强烈者，可口服抗组胺药或局部使用激素抹膏 建议 询问过敏史，对高敏患者应准备好休克抢救措施 建议诊室中准备好药物（如1mg/ml肾上腺素），以治疗可能出现的过敏反应,23,过敏原检测方法的比较,特异性IgE检测,体内试验,首选皮肤点刺试验，结果呈阳性且与病史相关性强则无需再进行血检 如强烈提示过敏而点刺呈阴性、或个别患者不适合皮肤点刺，建议血检 尘螨与病史具有相关性的前提下，尘螨点刺或者血检结果呈阳性，都需考虑脱敏治疗,24,尘螨过敏原检测方法的选择,25,畅点：Spotter,商品名：畅点 通用名：粉尘螨皮肤点刺诊断试剂盒 阳 性 对 照：磷酸组胺溶液 阴 性 对 照：生理盐水溶液 配套：一次性使用采血针（片式点刺型） 国药准字：S20080010 适应症： 用于点刺试验，辅助诊断因粉尘螨致敏引起的型变态反应性疾病,26,点刺视频,27,试验前-试剂准备,变应原及阴、阳性对照 点刺液 阴性对照:生理盐水溶液 阳性对照:磷酸组胺溶液 点刺液应储存在28C的冷藏柜中 一次性使用采血针（片式点刺型）,28,试验前-询问,询问患者服药情况 如果患者符合以下情况，皮肤点刺试验应延迟 近3日内未服用抗组胺药；息斯敏等长效抗组胺药需停药7天以上。抗组胺成分常见于抗过敏药、部分感冒药等 近1日内未服用全身性长效糖皮质激素药物 近1日内未在试验部位皮肤上使用糖皮质激素类药物 部分用于治疗过敏的中药可能也有抗炎的作用 如果使用了浴液/保湿剂/香波，患者需清洗臂部,29,30,Allergy2012：EAACI POSITION PAPER，Practical guide to skin prick tests in allergy to aeroallergens,31,试验前-询问,是否有皮肤划痕症 建议改用血清sIgE检测 如皮肤点刺过程中发现，可延长点刺结果观察时间。一般来说，皮肤划痕征所致风团比点刺所致风团消失得更快。可等阴性对照风团消失后观察。 皮肤是否对酒精过敏 常见于低龄儿童。这种患者可改用生理盐水进行皮肤清洁,32,试验前-询问,是否有过敏性休克史或严重的过敏不良反应 考虑sIgE检测 是否有晕针,33,晕针 晕针是一种血管性晕厥，它是由强烈的针刺等刺激，通过迷走神经反射，引起血管的扩张，外周血管阻力降低，回心血量减少，进而心输出量降低，血压下降，导致暂时性广泛脑血流量减少，从而引发晕厥，是一种突发性 短暂性的意识丧失，属于神经源性休克。晕针多在注射的当时或数分钟内发生，轻者表现为面色苍白、无力、头晕、恶心、出冷汗等，重者血压下降 大小便失禁，可昏倒造成意外。其发生原因是脑缺血，主要与患者的心理因素（心理恐惧）、体质虚弱、饥饿疲劳、体位、注射的刺痛程度、环境因素及护理行为有关 处理一般是让患者保持安静，平卧休息，喝温茶或糖水。,34,过敏性休克 过敏性休克是典型的型超敏反应，主要发生原因是抗原抗体反应。抗原物质进入人体后，刺激机体产生IgE，IgE借其Fc段与分部于皮肤、气管、血管壁上的肥大细胞、嗜碱性粒细胞的Fc段受体结合。当相同的变应原再次进入机体，可迅速与体内已经存在的相应亲细胞IgE结合，使肥大细胞、嗜碱性粒细胞释放大量的组织胺、五羟色胺、白三烯、激肽、血小板活化因子、乙酰胆碱、过敏休克素等，使许多脏器组织在极短时间内产生一系列剧烈的反应，包括中、小血管的充血、扩张、通透性增加，渗出增多（有效循环血量骤减），可致喉头水肿、鼻塞、分泌物阻塞、血压下降，支气管平滑肌及许多脏器平滑肌痉挛，可出现呼吸困难、窒息及脏器绞痛，直至休克。过敏性休克大多也是猝然发生且很强烈，多数患者在给药5分钟内发生。初期有嘴唇、舌、咽喉发痒或灼烧感，尾随的症状有发痒的斑丘疹 过敏性休克发生时应立即：1.使患者平卧采取足高头低位，解开衣带保温并保持安静。2.吸氧并保持气道通畅 。3.注射肾上腺素 4.应用抗过敏药物（肾上腺皮质激素） 5.纠正酸中毒 6.注射钙盐及其他对症治疗,35,晕针与过敏性休克的区别 晕针一般只在注射当时或者数分钟内发生，过敏性休克可即时发生，也可在注射后数小时内发生 晕针症状（晕倒）体征（血压下降，慢慢恢复）都是先重后轻，过敏性休克先轻后重 过敏性休克一般都有心动过速，脉搏快、弱，呼吸正常至深呼吸；而晕针是心率减慢，一般无心动过速，脉搏表现慢而饱和，因气道阻塞而发生有声呼吸 过敏性休克有时可先见皮疹，以及荨麻疹、血管性水肿、支气管痉挛等过敏症状，点刺发生过敏性休克时一般会伴随点刺部位的风团、红晕的扩散。,36,过敏性休克预案,37,点刺操作步骤及注意事项,患者手臂放松,平放于桌上，用酒精清洁其前臂掌侧皮肤。酒精过敏者可采用生理盐水清洁。 注意擦拭方向 自然风干,1、常规消毒/清洁,38,依次将变应原点刺液、阴性对照、阳性对照滴在消毒后的皮肤上 液滴之间距离为3-5厘米（间距不可小于2厘米） 防止点刺后的红晕互相 融合 只准许液滴碰到皮肤， 瓶盖和滴管不应碰到,2、滴加点刺液,39,3、点刺操作,绷紧皮肤，避开血管，点刺针透过液滴垂直刺入皮肤（刺破皮肤，使针尖下面有少量试液进入皮肤（深度1mm），点刺针停留1秒钟后提起，不同的液滴需更换新的点刺针。,40,4、拭去残液,点刺操作2-3分钟后，拭去皮肤上的残液，注意不要交叉污染,41,5、观察结果,点刺10-15分钟后观察点刺结果（皮试反应达到高峰），测量阴性对照、粉尘螨点刺液、阳性对照的点刺部位产生风团和红晕的面积，并记录。,42,6、结果判断,临床比较风团面积最简便的方法是目测，以阴性对照风团或红晕面积做校正，比较粉尘螨与阳性对照风团或红晕的面积，若粉尘螨风团和红晕面积为阳性对照面积的25%以上，即可判断该粉尘螨阳性。,43,阳性,户尘螨,粉尘螨,阴性,艾蒿,葎草,法国 梧桐,阴性,阳性,粉尘螨,户尘螨,葎草,蒿属花粉,法国梧桐,44,如何精确测量风团和红晕的面积大小,1.用油性笔描绘风团及红晕四周边线 2.然后用透明胶带将油性笔描绘的圈转移到mm心电图纸上 3.比较粉尘螨及阳性对照的风团所占格子数来确定该患者对粉尘螨变应原反应强度,45,操作步骤要点回顾,问诊（服药、划痕征、严重过敏史、晕针、酒精过敏） 消毒/清洁 划号（点刺液种类多时可在清洁皮肤后划号，最后滴加阳性对照） 点（部位、间距、瓶口勿触皮肤、交叉污染） 刺(绷紧皮肤、用力适当、刺后停顿、交叉污染（更换点刺针） 拭残液(交叉污染) 看结果(15min、风团),46,常见问题-1,阳性对照/阳性结果出现阴性反应(假阴性） 操作手法：点刺针未刺破表皮，阳性对照液未进入皮肤 用药：点刺前服用抗阻按药、皮质类激素等 其他疾病减弱了皮肤反应，如神经系统和感染性疾病（如麻风病）可导致SPT出现假阴性皮肤反应性差 局部变应性鼻炎 点刺液存放不当或时间过长而失效,47,常见问题-2,阴性对照出现阳性结果(假阳性） 试验中，与阳性对照液或粉尘螨液混合造成的干扰； 皮肤划痕症及压力性荨麻疹的影响 建议试验前先对患者做简单的皮肤划痕症试验，并询问患者有无荨麻疹病史； 皮肤划痕症患者建议使用血清IgE检测。如果点刺后发现是皮肤划痕症患者（出现假阳性），建议阴性对照风团（划痕症风团）消失后观察结果，或者扣除划痕风团后计算。 邻近强反应部位的非特异性反应增强 点刺时用力过度,48,皮肤划痕症,原则上，应在试验前48小时停止服用抗组胺药物（长效抗组胺药物需停药21天） 钝园针用力划皮，出现三联反应（triple response） （1）315 红线条 （2）1545 红线条两侧现红晕 （3）13 隆起成苍白或淡红色风团性线条 具此三联征，并且观察3-5min依然不消退，叫皮肤划痕症阳性。,49,常见问题-3,无症状人群的点刺/血检阳性 ARIA2008：SPT或者血清sIgE阳性并不意味着与临床症状相关。无症状人群点刺阳性比例很高 ARIA2008：SPT阳性的无症状的人群可预测变态反应性疾病包括哮喘的发生 注：点刺的适应症是对有症状病史的患者进行疾病确诊,50,特异性体质者1,特异性体质者2,特异性体质者3,正常情况 点刺、血清阳性表现症状者,皮肤反应差的 过敏患者,sIgE水平低于阳性临界值的过敏患者,皮肤反应，血清检查都假阴性的过敏患者,点刺阳性,血清阳性,表现出过敏性症状,皮试、血清检测与过敏症状的关系,51,常见问题-4,点刺几个+就可以进行 过敏性疾病的诊断：症状病史；过敏原检测（点刺或血清sIgE）阳性；阳性过敏原与症状病史相关 脱敏原：与症状病史相关的过敏原 脱敏与否应看脱敏原与患者的症状病史是否相关，而不是看点刺的级别,问题：如何判断相关性？,52,常见问题-5,ASIT随访过程中是否需要SPT（allergy 2012，Position Paper）？ ASIT能够降低SPT对吸入性过敏原的反应，但在临床实践中，SPT不能用来评估ASIT的疗效，而且也不能通过SPT反应来决定ASIT的终止 注：重复进行SPT试验主要用于检测患者是否出现新的过敏,53,常见问题-6,过敏原检测阳性解读 点刺阳性反应的强弱，反映的是受试者皮肤点刺部位的皮肤敏感程度，并不表示疾病的严重程度 点刺阳性级别与受试者过敏症状的严重程度有关系（皮肤反应越强，受试者由该阳性过敏原引起过敏的临床相关的可能性越大），但不是正相关 血清sIgE的体外检测也是如此，如很多致敏个体sIgE水平低于临界值（0.35KU/L）,而很多无症状患者却有很好的sIgE,54,过敏原检测分级 症状严重程度,过敏症状严重程度的影响因素 sIgE抗体（游离的sIgE、结合的sIgE） 介质的释放 靶器官对介质的反应 服药影响 非特异性过敏,55,过敏原检测分级 症状严重程度,皮肤点刺结果级别的影响因素 患者个体皮肤反应、点刺部位 服用药物 操作手法 年龄影响 季节,56,常见问题-7,血清sIgE与点刺检测都属于定性检测,症状明确，血清sIgE与皮肤点刺（采用标准化的变应原）均能明确引起患者过敏的变应原，但上述两者都是定性检查，其检测结果只能确定病人是否过敏，但分级并不代表过敏的严重程度,定性 检查,为什么都是定性,虽然与疾病相关性比较好，也有分级，但点刺影响因素太多，严重度还是个相对值，同时风团的绝对大小受患者个体皮肤反应、点刺部位、季节、操作手法、药物、年龄影响，所以定量不准确，只能定性,点刺,血清,血清检测所提到的定量检测，是定sIgE的量，而不是过敏强度的量，通常sIgE值与症状严重程度无相关性（ARIA），所以也只是定性,57,体内检测 北京协和医院 ALK NHD,血清检测 UniCAP、 ImmunoCAP “敏筛”、欧蒙 全自动酶免仪(e-STAR plus),国内市面上其他诊断产品,58,体内检测（非标准化，变应原产品种类繁多） 皮内注射 皮肤点刺,北京协和院内皮试制剂,59,皮肤点刺液（Soluprick） 2ml/瓶4瓶/盒 户尘螨变应原点刺液； 粉尘螨变应原点刺液； 阳性对照点刺液； 阴性对照点刺液 2-8储存 有效期为生产日期后的12个月；小瓶首次开启后的有效期为6个月,安刺SQ,60,阿罗格（NHD）,皮肤点刺液 国内提供多种变应原（50种以上常用20种），另外提供测试盒G（用于存放点刺试液瓶，可放30瓶，内有一块塑料板，一张贴在盒盖内面的变应原目录表），测试盒K（增加了存放点刺试液瓶的数量，可放72瓶）及点刺针 一般分吸入组、食物组和水果组 地方械字号证,61,通过检测sIgE筛查过敏原，酶联荧光免疫法 ImmunoCAP 100、 ImmunoCAP 250 检测试剂：总IgE、吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop）、食入性过敏原过筛试验（fx5）、600种左右的sIgE检测、嗜酸细胞阳离子蛋白（ECP）、类胰蛋白酶 号称“金标准” 价格昂贵，80元/每个过敏原 有医疗设备批文，但是试剂没有证 无法大量普及,UniCAP、ImmunoCAP,62,63,1911年，Pharmacia 几经买卖易主1995年，Pharmacia公司美国普强药厂合并为Pharmacia & Upjohn ，公司总部在瑞典Uppsala，2002年被Pfizer收购 2006年Pharmacia诊断更名为Phadia 2010年12月Phadia收购南京维康乐贸易实业有限公司 (WKL) ，WKL原属于南京美瑞制药有限公司（2011年1 月被GSK收购） 2011年8月，赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific）收购Phadia,64,敏筛过敏原检测系统（Al