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高效液相色谱法测定大豆乳清中大豆低聚糖李婷婷济宁学院 化学与化工系 应用化工技术2班1基本原理利用混合物中各组分在不同的两相中溶解,分配,吸附等化学作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离。两相中有一相是固定的,叫做固定相,有一相是流动的,称为流动相,流动相又叫洗脱剂,溶剂。2实验方法2.1仪器和试剂岛津LC-6A高效液相色谱仪;RID-6A示差检测器,C-R6A数据处理机;Waters U6K进样阀。D(十)棉子糖和水苏糖(Sigma公司),蔗糖(分析纯,天津市化学试剂一厂),其余试剂均为分析纯。供试材料为黑龙江三江食品公司提供的低温脱脂豆粉。2.2色谱条件色谱柱:Hypersil-NH2柱,250x4.6mm,5m(大连依利特科学仪器公司);示差检测器;流动相:乙睛-水(68:32);流速1mL/min;柱温:室温。2.3样品制备(1)标准溶液的制备准确称取蔗糖、棉子糖、水苏糖各50mg,用50mL超纯水溶解,配得各种低聚糖标准溶液的浓度分别为10g/L。(2)样品的制备根据碱提酸沉法分离大豆蛋白的生产工艺制取大豆乳清,其工艺如下:大豆乳清用盐酸调Ph=4.3,加入占固形物5%的Cacl2在50下加热15-20min,过滤,经5m的微孔滤膜过滤,滤液即可用于高效液相色谱分析。3结果与讨论3.1流动相比例的确定采用乙睛-水体系作流动相,流动相的极性越强,低聚糖的保留时间越短。本实验采用乙睛-水(68:32)为流动相,3种糖的保留时间分别为蔗糖(tR=3.4min)、棉子糖(tR=7.06min)、水苏糖(tR=10.4min)。3.2 HPLC法测定的线性范围将蔗糖、棉子糖、水苏糖的标准溶液稀释成如下标准系列:2、4、6、8、10(g/L),进样量均为10L。根据标准样品的浓度和测得的峰面积进行线性回归,蔗糖、棉子糖、水苏糖的线性回归方程和相关系数分别为:蔗糖:Y=1514.IX-102.57,r=0.9963;棉子糖:Y=1143.6X-120.67,R=0.9999;水苏糖:Y=1937.6x-777.24,R=0.9995。3.3精密度实验在相同的实验条件下,对6份相同的样品进行平行测定,根据测定结果求得蔗糖、棉子糖、水苏糖标准偏差和相对标准偏差分别为:蔗糖0.2083和1.9020%;棉子糖0.1407和5.7796%;水苏糖0.2063和3.1833%。3.4样品的测定采用前述方法测定了大豆乳清中大豆
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