课件：细菌培养及检测.ppt

细菌及其培养和检测的学习汇报,目录,第一讲微生物细菌学 第二讲细菌培养 第三讲大肠杆菌 第四讲金黄色葡萄球菌 第五讲真菌学及其检测 第六讲微生物学及其检测,第一讲 微生物细菌学,球菌形态,细菌的结构及功能,基本结构由外到内细菌的依次是,细胞壁、细胞膜、细胞浆,和核质,。,特殊结构有,荚膜、鞭毛、菌毛和芽孢。,其中能维持细菌的固有形态的结构是,细胞壁，,控制遗传性状的是,核质，,与细菌的毒力有关的结构是,荚膜和菌毛，,抵抗力强,的是,芽孢，,决定细菌有无运动性的结构是,鞭毛。,芽孢,菌体,细菌的生理,第二讲 细菌培养,一、细菌培养的实验原理,二、目的要求,大肠杆菌的生长状态,三、材料用具,四、细菌培养的方法和步骤,（五）、培养,（四）、接种,（三）、搁置斜面,（二）、灭菌,（一）、培养基的配置,（一）、培养基的配置,打开高压蒸汽灭菌锅，将里面的灭菌桶取出，向锅内加水（最好用开水），水面与底架平齐为宜。,排出锅内的冷空气。接通电源，当压力上升到49KPa时，打开排气阀放气，当压力降到0是时，关闭排气阀。重复上述放气过程一次，以彻底排出锅内的冷空气。,当锅内的压力上升到98KPa时，控制火力大小，使压力维持在98KPa左右20min。切断电源。,将扎好的试管管口向上竖放在灭菌桶内，再将灭菌桶放回灭菌锅。注意：灭菌桶内的物品不能放得太挤，否则影响灭菌效果。,加盖，并将排气软管插入灭菌桶的排气槽内。以两两对称的方式，同时旋紧相对的两个紧固螺栓，以防漏气。,当压力降至0以后，打开排气阀，10min以后，旋松紧固螺栓，取出试管。最后。将灭菌锅里的水排放干净。,（二）、灭菌,（三）、搁置斜面,（四）、接种,1,3,2,4,5,用肥皂将双手洗净，擦干，再用酒精（75）棉球擦拭双手。,当手上的酒精挥发完毕以后，点燃酒精灯。注意：一定要等手上的酒精挥发完毕后，在点燃酒精灯，否则，容易将手烧伤。,接种 注意：整个实验操作过程都要小心谨慎，不要碰翻酒精灯，以免烧伤。,（1）用左手大拇指、食指和无名指夹住菌种试管和待接种和斜面试管，右手拧松棉塞，不取下。 （2）右手拿接种环，在火焰上烧灼灭菌，特别是箍处。 （3）在火焰边取下两个棉塞，不能放下;烧灼管口一周。 （4）将接种环伸入试管内，冷却后，轻轻挑取少量菌体，立即将接种环抽出。 （5）在火焰旁将沾有菌种的接种环迅速伸到斜面培养基的底部，由里向外画蛇形细线。 （6）抽出接种环后。烧管口，塞棉塞，接种环灭菌。,熄灭酒精灯。实验后的带菌培养基，如果用的是致病菌，必须经高压蒸汽灭菌后方可倒掉；如果是非致病菌，也要经过加热后再倒掉。,接种完毕，将所接菌种、接种日期、接种者姓名填写在标签上。,（五）、培养,五、结论 观察斜面培养基上的细菌生长状况如何？,细菌在液体培养基中生长后，常出现混浊，沉淀或形成菌膜。 细菌接种在固体培养基上，经过一定时间的培养后，表面出现肉眼可见的单个细胞集团，称为菌落。,液体培养基,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,固体培养基：菌落、菌苔,六、讨论,问题,答案,1.在高压灭菌开始之前，为什么要排尽灭菌锅内的冷空气？,在高压锅灭菌以前，如果国内的冷空气没排尽，当压力上升到98KPa，锅内的温度就不会达到应有的温度，导致灭菌不彻底。,2.灭菌完毕以后，如果压力未降到0就打开排气阀，会出现什么现象？为什么？,如果压力未降到0就打开排气阀，试管内的培养基就会冲出管口，这是因为高压蒸汽灭菌锅内外的压力不平衡所致。,3.这种操作为什么一定要在火焰旁进行？,空气中存在有大量的微生物，而接种灯得火焰旁能形成一个无菌区域，在这里操作，可以避免杂菌污染。,第三讲 大肠杆菌,大肠杆菌,1、培养：在LB液体培养基上扩大培养,2、分离：,大肠杆菌检测方法和步骤,方法：用平板涂布法将样品稀释后（每个水样做3个浓度）涂布到伊红美蓝培养基后，待长出菌落，观察符合特征的群落，计算菌落数目，从而求出总数目。,培养基成分及其配置,1、成分：蛋白胨10g、乳糖 10g 、磷酸氢二钾 2g 、琼脂 2030g、蒸馏水1000ml 、2%伊红水溶液 20ml、0.5 %美蓝水溶液 13ml,2、配置方法：先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.27.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115灭菌20min，冷却备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至5055，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。,实验步骤涂布平板法,1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。 2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。 3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。 4.将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上2030min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。,涂布平板操作,第四讲 金黄色葡萄球菌,葡萄球菌属微球菌科，本菌有19个菌种，从人体上可检出12个种。 葡萄球菌属主要与皮肤腺体和温血动物的粘膜相关系，有些种是人及动物的条件致病菌。 金黄色葡萄球菌对人类有致病性，通常被称为病原性球菌。金黄色葡萄球菌可引起化脓性炎症，又称为化脓性球菌。,概括,易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。 需氧或兼性厌氧。 最适生长温度37，最适生长pH 7.4。耐盐性强，在含1015%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于筛选菌种。 在普通营养琼脂平板上培养1824，可形成圆形、表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内，不渗至培养中。,培养特性,在血平板上可形成明显透明的溶血环。为型溶血。 可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成周围有白色沉淀环的菌落。 大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红试验、 VP试验多为阳性，不产生靛基质。触酶阳性。,检测方法,材料与方法 1、材料 培养基：7.5%NaCl肉汤培养基，血琼脂平板培养基（按常规方法制作） 试剂：7.5%NaCl肉汤培养基，革兰氏染色，血琼脂平板，Baird-Parker琼脂平板，生理盐水，兔血浆（1：4）， 器材：温箱，显微镜，天平，均质器，载玻片，L型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，试管及试管架，研磨，1ml注射器， 实验动物：健康的小白鼠,2、方法 待检样品25g+225ml灭菌生理盐水 直接计数法 增菌培养方法 Baird-Parker琼脂平板 7.5%NaCl肉汤培养基 血平板 血平板 涂片染色镜 溶血观察 动物接种试验 血浆凝固试验 ,报告,第五讲 真菌学及其检测,1、真菌是一类具有细胞壁，不含叶绿素，无根、茎、叶的分化，以寄生或腐生方式生存的真核微生物。异养型。真菌种类多，有10余万种，大多对人体无害，有的甚至有益。繁殖方式两种：即无性和有性繁殖。还有少数真菌，能致人、动植物发病，称为病原性真菌。,一、真菌学,2、分类：,二、检测,标本,直接镜检,墨汁染色,乳酸酚棉蓝染色,不染色,抗原检出,分离培养,二相性真菌,氢氧化钾消化后涂片镜检,脑心浸液,病原性真菌,脑心浸液,沙氏培养基,血琼脂平板,观察菌落性状和菌丝孢子形态,显微镜检查湿片法或直接涂片高倍视野镜检，见有菌丝孢子或单细胞真菌（有诊断价值，但不能确定真菌种类）,第六讲 微生物学及其检测,主要有四个方面 种类多 分布广 繁殖快 易变异,一、微生物学,1、 微生物是指广泛分布于自然界中的一群肉眼看不到的微小生物，具有单细胞或简单的多细胞结构，或没有细胞结构的一群最低等的生物。,2、微生物特性,3、微生物的形态结构,4、微生物的化学组成,C，H，O，N，P，S以及其他元素,5、微生物的营养物质,1 水和无机盐 2 碳源:凡能为微生物提供生长繁殖所需碳元素的营养物质 3氮源：凡能为微生物提供所必需氮元素的营养物质 来源：周围环境中得有机 无机含氮物质 作用:主要用于合成蛋白质，核酸以及含氮的代谢产物 4 能源:能为微生物生命活动提供最初能源来源的营养物质或辐射能 5生长因子：微生物生长不可缺少的微量有机物,6、微生物检测步骤,一、液体样品： 1、打来紫外灯灭菌30min 2、把所有做诶生物的物品一并带入无菌室 3、用酒精棉对手进行消毒，取出灭菌平皿并编号（根据本厂的菌落数进行编号）以下样液的菌落数小于100 4、用灭菌吸管吸取1ml灭菌盐水放入编号为“0”的平皿中 5、哟偶那个灭菌吸管分别吸取1ml样品放入编号为原液的两个平皿中（若盛装样液的容器诶桶装则应先把样液转入灭菌容器中再进行取样） 6、吸取样液1ml放入灭菌的9ml盐水中，摇匀后分别放入编号为-1的两个平皿中 7、点燃酒精灯，倒入温度在46（不低于40）的营养琼脂，摇匀，带琼脂凝固后倒扣放置于温度为361的培养箱中培养48h2h 8、吸取样液10ml放于3支双料管中 9、吸取样液1ml放于3支单料管中 10、吸取样液0.1ml放于3支单料管中 11、把8、9、10所得最终溶液摇匀放置于温度为361的培养箱中培养24h1h 12、观察7、11的结果并记录,二、固体样品： 1、打开紫外灯灭菌30min 2、把所有做微生物的物品一并带入无菌室 3、用酒精棉对手进行消毒，取出灭菌平皿并编号（根据本厂的菌落数进行编号） 4、用灭菌吸管从226ml盐水瓶中吸取1ml灭菌盐水放入编号为“0”的平皿中 5、称取磨碎或搅碎的样品25g放入225ml盐水瓶中，摇匀（此步得到样品稀释10倍的溶液，即“-1”溶液） 6、用灭菌吸管分别吸取1ml“-1”溶液放入编号为“-1”的两个平皿中 7、吸取“-1”溶液1ml放入灭菌的9ml盐水中，摇匀（此步得到：-2“溶液） 8、分别吸取1ml”-2“溶液放入编号为”-2“的两个平皿中 9、点燃酒精灯，倒入温度在46（不低于40）的营养琼脂，摇匀，带琼脂凝固后倒扣放置于温度为361的培养箱中培养48h2h 10、吸取”-1“溶液10ml放于3支双料管中 11、吸取”-1“溶液1ml放于3支单料管中 12、吸取”-1“溶液0.1ml放于3支单料管中 13、把8、9、10所得最终溶液摇匀放置于温度为361的培养箱中培养24h1h 14、观察7、11的结果并记录,谢 谢！,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用,主要经营：网络软件