婴儿奶粉的分析检测现状——食品分析论文.doc

食品分析论文学号：2009161438班级：09级化学姓名：余世龙婴儿奶粉的分析检测现状 前言：近年来，我国奶粉行业持续快速发展，现在市场上特别是婴儿奶粉资源充足，品种繁多，因次，消费者在购买婴儿奶粉时有很大的选择余地。他们比任何时候更加关注奶粉的质量和安全，他们需要各种高质量、安全、富有营养的奶粉。关键词： 婴儿奶粉 分析检测 现状 婴儿奶粉：2008年6月28日，位于兰州市的解放军第一医院收治了首例患“肾结石”病症的婴幼儿，据家长们反映，孩子从出生起就一直食用河北石家庄三鹿集团所产的三鹿婴幼儿奶粉。7月中旬，甘肃省卫生厅接到医院婴儿泌尿结石病例报告后，随即展开了调查，并报告卫生部。随后短短两个多月，该医院收治的患婴人数就迅速扩大到14名。 此后，全国陆续报道因食用三鹿乳制品而发生负反应的病例一度达几百例，事态之严重，令人震慑！2008年9月13日，党中央、国务院对严肃处理三鹿牌婴幼儿奶粉事件作出部署，立即启动国家重大食品安全事故一级响应，并成立应急处置领导小组。2008年9月15日，甘肃省政府新闻办召开了新闻发布会称，甘谷、临洮两名婴幼儿死亡，确认与三鹿奶粉有关。 随着问题奶粉事件的调查不断深入，奶源作为添加三聚氰胺最主要的环节越来越被各界所关注。另据医学专家介绍，三聚氰胺是一种低毒性化工产品，婴幼儿大量摄入可引起泌尿系统疾患。目前患泌尿系统结石的婴幼儿，主要是由于食用了含有大量三聚氰胺的三鹿牌婴幼儿配方奶粉引起的，多数患儿通过多饮水、勤排尿等方法，结石可自行排出。如出现尿液混浊、排尿困难等症状时，需要及时到医院就诊。发生急性肾功能衰竭时，如及时治疗，患儿也可以恢复。 三聚氰胺显然，我们想当然认为的婴儿奶粉也吸引到了奸商的注意力，这不仅仅是道德问题，更是一种活生生的谋杀，对没有多少还手能力婴儿的谋杀。在这件事情背后，作为消费者或者受害者，我们该如何？用法律的武器来捍卫我们，用科学的方法将他们送上“断头台”,下面请看如何检测奶粉：下面是辨别奶粉真假的小尝试，只是经验的总结：1. 用手捏住奶粉包装袋进行摩擦，真奶粉质细，会发出“吱吱”声，而假奶粉拌有蔗糖，会发出发“沙沙”声。 2. 打开包装后进行目测，真奶粉呈天然乳白色，而假奶粉呈结晶状，颜色较白，或呈漂白色。 3. 真奶粉闻起来有浓郁的奶香味，而假奶粉乳香味很弱或者无味。 4. 可以采取品尝的方式，真奶粉细腻发粘，溶解慢，没有糖的香味，而假奶粉入口即化，不粘，有糖的香味。 除了以上几点，我们还要提醒您，除了要注意选择奶粉成份标注清楚，制造日期、保质期明确，包装完好的产品外，还应检查奶粉包装中是否存在明显的漏气、结块等现象，如果存在这些现象，切勿购买。下面请看如何科学检测奶粉：分析检测： 何为凯氏定氮法？简单地说，凯氏定氮法是一种检测物质中“氮的含量”的方法。蛋白质是一种含氮的有机化合物，食品中的蛋白质经硫酸和催化剂分解后，产生的氨能够与硫酸结合，生成硫酸氨，再经过碱化蒸馏后，氨即成为游离状态，游离氨经硼酸吸引，再以硫酸或盐酸的标准溶液进行滴定，根据酸的消耗量再乘以换算系数，就可以推算出食品中的蛋白含量。一. 凯氏定氮法原理凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热，经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程，最后有机氮转变为无机氮硫酸铵，这一过程称为有机物的消化。为了加速和完全有机物质的分解，缩短消化时间，在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、氧化汞、过氧化氢等试剂，加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解，除硫酸钾外，也可以加入硫酸钠、氯化钾等盐类类提高沸点，但效果不如硫酸钾。硫酸铜起催化剂的作用。凯氏定氮法中可用的催化剂种类很多，除硫酸铜外，还有氧化汞、汞、硒粉、钼酸钠等，但考虑到效果、价格及环境污染等多种因素，应用最广泛的是硫酸铜。使用时常加入少量过氧化氢、次氯酸钾等作为氧化剂以加速有机物氧化。消化完成后，将消化液转入凯氏定氮仪反应室，加入过量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内，硼酸接受氨后，形成四硼酸铵，然后用标准盐酸滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算即可得出总氮量。在滴定过程中，滴定终点采用甲基红-次甲基蓝混合指示剂颜色变化来判定。测定出的含氮量是样品的总氮量，其中包括有机氮和无机氮。反应式如下：1.有机物中的氮在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，消化生成（NH4）2SO4 反应式为： H2SO4=SO2+H2O+O R. CH.COOH+O=R.CO.COOH+NH3 NH3 R.CO.COOH+O=nCO2+mH2O 2NH3+H2SO4=(NH4)2SO42.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于 H3BO3 溶液中反应式为： 2NH4+OH-=NH3+H2O NH3+H3BO3=NH4+H2BO3-3. 再用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量。反应式为： H2BO3-+H+=H3BO3蛋白质是一类复杂的含氮化合物，每种蛋白质都有其恒定的含氮量约在1418，平均为16（质量分数）。凯氏定氮法测定出的含氮量，再乘以系数6.25，即为蛋白质含量。凯氏定氮装置图 ： 1.安全管 2.导管 3.汽水分离管 4.样品入口 5.塞子6.冷凝管 7.吸收瓶 8.隔热液套 9.反应管 10.蒸馏发生瓶二. 方法和步骤（一）消化1、准备6个凯氏烧瓶，标号。1、2、3号烧瓶中分别加入适当浓度的蛋白溶液1.0mL，样品要加到烧瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶颈上。再依次加入硫酸钾-硫酸铜接触剂0.3g，浓硫酸2.0mL，30%过氧化氢1.0mL。4、5、6号烧瓶作为空白对照，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，对样品测定进行校正。4、5、6号烧瓶中加入蒸馏水1.0mL代替样液，其余所加试剂与1、2、3号烧瓶相同。2、将加好试剂的各烧瓶放置消化架上，接好抽气装置。先用微火加热煮沸，此时烧瓶内物质炭化变黑，并产生大量泡沫，务必注意防止气泡冲出管口。待泡沫消失停止产生后，加大火力，保持瓶内液体微沸，至溶液澄清后，再继续加热使消化液微沸15min。在消化过程中要随时转动烧瓶，以使内壁粘着物质均能流入底部，以保证样品完全消化。消化时放出的气体内含SO2，具有强烈刺激性，因此自始自终应打开抽水泵将气体抽入自来水排出。整个消化过程均应在通风橱中进行。消化完全后，关闭火焰，使烧瓶冷却至室温。（二）蒸馏和吸收蒸馏和吸收是在微量凯氏定氮仪内进行的。凯氏定氮蒸馏装置种类甚多，大体上都由蒸气发生、氨的蒸馏和氨的吸收三部分组成。1、仪器的洗涤仪器安装前，各部件需经一般方法洗涤干净，所用橡皮管、塞须浸在10%NaOH溶液中，煮约10min，水洗、水煮10min，再水洗数次，然后安装并固定在一只铁架台上。仪器使用前，微量全部管道都须经水蒸气洗涤，以除去管道内可能残留的氨，正在使用的仪器，每次测样前，蒸气洗涤5min即可。较长时间未使用的仪器，重复蒸气洗涤，不得少于三次，并检查仪器是否正常。仔细检查各个连接处，保证不漏气。首先在蒸气发生器中加约2/3体积蒸馏水，加入数滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影响结果，并放入少许沸石（或毛细管等），以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸馏水约20mL让水经插管流入反应室，但玻杯内的水不要放光，塞上棒状玻塞，保持水封，防止漏气。蒸气发生后，立即关闭废液排放管上的开关，使蒸气只能进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾，蒸出蒸气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却，在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。从定氮球发烫开始计时，连续蒸煮5min，然后移开煤气灯。冲洗完毕，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接橡胶管，由于气体冷却压力降低，反应室内废液自动抽到反应室外壳中，打开废液排出口夹子放出废液。如此清洗23次，再在冷凝管下换放一个盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶使冷凝管下口完全浸没在溶液中，蒸馏12min，观察锥形瓶内的溶液是否变色。如不变色，表示蒸馏装置内部已洗干净。移去锥形瓶，再蒸馏12min，用蒸馏水冲洗冷凝器下口，关闭煤气灯，仪器即可供测样品使用。2、无机氮标准样品的蒸馏吸收由于定氮操作繁琐，为了熟悉蒸馏和滴定的操作技术，初学者宜先用无机氮标准样品进行反复练习，再进行有机氮未知样品的测定。常用巳知浓度的标准硫酸铵测试三次。取洁净的100mL锥形瓶五只，依次加入2%硼酸溶液20mL，次甲基蓝-甲基红混合指示剂（呈紫红色）34滴，盖好瓶口待用。取其中一只锥形瓶承接在冷凝管下端，并使冷凝管的出口浸没在溶液中。注意：在此操作之前必须先打开收集器活塞，以免锥形瓶内液体倒吸。准确吸取2mL硫酸铵标准液加到玻杯中，小心提起棒状玻塞使硫酸铵溶液慢慢流入蒸馏瓶中，用少量蒸馏水冲洗小玻杯3次，一并放人蒸馏瓶中。然后用量筒向小玻杯中加入10 mL 30NaOH溶液，使碱液慢慢流入蒸馏瓶中，在碱液尚未完全流入时，将棒状玻塞盖紧。向小玻杯中加约5mL蒸馏水，再慢慢打开玻塞，使一半水流入蒸馏瓶，一半留在小玻杯中作水封。关闭收集器活塞，加热蒸气发生器，进行蒸馏。锥形瓶中的硼酸-指示剂混合液由于吸收了氨，由紫红色变成绿色。自变色时起，再蒸馏35min，移动锥形瓶使瓶内液面离开冷凝管下口约lcm，并用少量蒸馏水冲洗冷凝管下口，再继续蒸馏1min，移开锥形瓶，盖好，准备滴定。在一次蒸馏完毕后，移去煤气灯，夹紧蒸气发生器与收集器间的橡胶管，排除反应完毕的废液，用水冲洗小玻杯几次，并将废液排除。如此反复冲洗干净后，即可进行下一个样品的蒸馏。按以上方法用标准硫酸铵再做两次。另取2mL蒸馏水代替标准硫酸铵进行空白测定二次。将各次蒸馏的锥形瓶一起滴定。3、未知样品及空白的蒸馏吸收将消化好的蛋白样品三支，空白对照液三支，依次作蒸馏吸收。加5mL热的蒸馏水至消化好的样品或空白对照液中，通过小玻杯加到反应室中，再用热蒸馏水洗涤小玻杯3次，每次用水量约3mL，洗涤液一并倒入反应室内。其余操作按标准硫酸铵的蒸馏进行。由于消化液内硫酸钾浓度高而呈粘稠状，不易从凯氏烧瓶内倒出，必须加入热蒸馏水5 mL稀释之，如果有结晶析出，必须微热溶解，趁热加入玻杯，使其流入反应室。此外，还应当注意趁仪器洗涤尚未完全冷却时立即加入样品或空白对照液，否则消化液通过冷却的管道容易析出结晶，造成堵塞。（三）滴定样品和空白蒸馏完毕后，一起进行滴定。打开接受瓶盖，用酸式微量滴定管以0.0100mol/L的标准盐酸溶液进行滴定。待滴至瓶内溶液呈暗灰色时，用蒸馏水将锥形瓶内壁四周淋洗一次。若振摇后复现绿色，应再小心滴入标准盐酸溶液半滴，振摇观察瓶内溶液颜色变化，暗灰色在一二分钟内不变，当视为到达滴定终点。若呈粉红色，表明已超越滴定终点，可在已滴定耗用的标准盐酸溶液用量中减去0.02mL，每组样品的定氮终点颜色必须完全一致。空白对照液接受瓶内的溶液颜色不变或略有变化尚未出现绿色，可以不滴定。记录每次滴定耗用标准盐酸溶液毫升数，供计算用。三. 结果与计算运算下列公式计算出每次无机氮标准样品和未知样品的总含氮量。式中WN每毫升样品的含氮毫克数；A滴定样品消耗的盐酸量（mL）；B滴定空白消耗的盐酸量（mL）；C测定样品所取用量（mL）；0.0100标准盐酸物质的量浓度（mol/L）；14.008每摩尔氮原子质量（g/mol）。三次样品测定的含氮量相对误差应小于2%。样品粗蛋白含量总氮量 6.25 6.25为含氮量换算为蛋白质含量的系数。.这个系数来自蛋白质平均含氮量为16，实际上各种蛋白质因氨基酸组成不同，含氮量不完全相同。乳类为6.38，大米为5.95，花生为5.46等凯氏定氮法的缺陷：从凯氏定氮原理可以知道：凯氏定氮法是将含氮有机物转变为无机氮硫酸铵来进行检测，以得到含氮量的测定值乘以一定系数得出蛋白质含量。而含氮有机物不仅仅是蛋白质，还有三聚氰胺 等等。在加上食品中蛋白质含量的现行国家标准和国际通行测定方法是经典凯氏定氮法，这就为造假者提供了可乘之机。蛋白质中的含氮量不超过30，三聚氰胺的最大的特点是含氮量很高（66），溶于水后无色无味，也就是说在一杯清水中加入三聚氰胺，然后用凯氏定氮法检测，结果显示是含有蛋白质的。由于“凯氏定氮法”只能测出含氮量,并不能鉴定饲料中有无违规化学物质,所以,添加三聚氰胺的奶粉理论上可以测出较高的蛋白质含量。粗脂肪的测定索氏抽提法索氏抽提法，用于粗脂肪含量的测定。脂肪广泛存在于许多植物的种子和果实中，测定脂肪的含量，可以作为鉴别其品质优劣的一个指标。脂肪含量的测定有很多方法，如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。目前国内外普遍采用抽提法，其中索氏抽提法（Soxhlet extractor method）是公认的经典方法，也是我国粮油分折首选的标准方法。原理采用索氏抽提法中的残余法，即用低沸点有机溶剂（乙醚或石油醚）回流抽提，除去样品中的粗脂肪 ，以样品与残渣重量之差，计算粗脂肪含量。由于有机溶剂的抽提物中除脂肪外，还或多或少含有游离脂肪酸、甾醇、磷脂、蜡及色素等类脂物质，因而抽提法测定的结果只能是粗脂肪。实验材料、主要仪器和试剂1、实验材料油料作物种子、中速滤纸 2、仪器：（1）索氏脂肪抽提器（图1）或YG-型油分测定器 （2）干燥器(直径1518cm，盛变色硅胶) （3）不锈钢镊子（长20cm） （4）培养皿 （5）分析天平（感量0.001g） （6）称量瓶 （7）恒温水浴 （8）烘箱 （9）样品筛（60目） 3、试剂无水乙醚或低沸点石油醚（A.R.） 操作步骤1、切片将滤纸切成8cm8cm，叠成一边不封口的纸包，用硬铅笔编写顺序号，按顺序排列在培养皿中。将盛有滤纸包的培养皿移入1052烘箱中干燥2h，取出放入干燥器中，冷却至室温。按顺序将各滤纸包放人同一称量瓶中称重（记作a）、称量时室内相对湿度必须低于70。 2、包装和干燥在上述已称重的滤纸包中装入3g左右研细的样品，封好包口，放入1052的烘箱中干燥3h，移至干燥器中冷却至室温。按顺序号依次放入称量瓶中称重（记作b）。 3、抽提将装有样品的滤纸包用长镊子放入抽提筒中，注入一次虹吸量的1.67倍的无水乙醚，使样品包完全浸没在乙醚中。连接好抽提器各部分，接通冷凝水水流，在恒温水浴中进行抽提，调节水温在7080之间，使冷凝下滴的乙醚成连珠状（120150滴/min或回流7次/h以上），抽提至抽取筒内的乙醚用滤纸点滴检查无油迹为止（约需612h）。抽提完毕后，用长镊子取出滤纸包，在通风处使乙醚挥发（抽提室温以1225为宜）。提取瓶中的乙醚另行回收。 4、称重待乙醚挥发之后，将滤纸包置于1052烘箱中干燥2h，放入干燥器冷却至恒重为止（记作c）。 结果与计算：粗脂肪含量（%）=（ bc）/（ba） 100式中：a：称量瓶加滤纸包重（g） b：称量瓶加滤纸包和烘干样重（g） c：称量瓶加滤纸包和抽提后烘干残渣重（g） 注：（1）测定用样品、抽提器、抽提用有机溶剂都需要进行脱水处理。 这是因为：第一，抽提体系中有水，会使样品中的水溶性物质溶出，导致测定结果偏高；第二，抽提体系中有水，则抽提溶剂易被水饱和（尤其是乙醚，可饱和约2的水），从而影响抽提效率；第三，样品中有水，抽提溶剂不易渗入细胞组织内部，结果不易将脂肪抽提干净。 （2）试样粗细度要适宜。 试样粉末过粗，脂肪不易抽提干净；试样粉末过细，则有可能透过滤纸孔隙随回流溶剂流失，影响测定结果。 （3）索氏抽提法测定脂肪最大的不足是耗时过长，如能将样品先回流12次，然后浸泡在溶剂中过夜，次日再继续抽提，则可明显缩短抽提时间。 （4）YG-型油分测定器容量大，适合于样品较多的选种鉴定工作使用，温度控制在70左右，8h可提取完毕。 （5）必须十分注意乙醚的安全使用。 抽提室内严禁有明火存在或用明火加热。乙醚中不得含有过氧化物，保持抽提室内良好通风，以防燃爆。乙醚中过氧化物的检查方法是：取适量乙醚，加入碘化钾溶液，用力摇动，放置1min，若出现黄色则表明存在过氧化物，应进行处理后方可使用。处理的方法是：将乙醚放入分液漏斗，先以1/5乙醚量的稀KOH溶液洗涤23次，以除去乙醇；然后用盐酸酸化，加入1/5乙醚量的FeSO4或Na2SO3溶液，振摇，静置，分层后弃去下层水溶液，以除去过氧化物；最后用水洗至中性，用无水CaCl2或无水Na2SO4脱水，并进行重蒸馏。 操作问题：1、如何利用残余法测定油料作物种子中的粗脂肪含量？ 残余法测定油料作物种子中的粗脂肪含量，是用低沸点有机溶剂（乙醚或石油醚）回流抽提，除去样品中的粗脂肪，以样品与残渣重量之差，来计算粗脂肪含量。 2、测定过程中为什么需要对样品、抽提器、抽提用有机溶剂都要进行脱水处理？ 进行脱水处理的原因有三：第一，抽提体系中有水，会使样品中的水溶性物质溶出，导致测定结果偏高；第二，抽提体系中有水，则抽提溶剂易被水饱和（尤其是乙醚，可饱和约2的水），从而影响抽提效率；第三，样品中有水，抽提溶剂不易渗入细胞组织内部，结果不易将脂肪抽提干净。 3、在实验过程中安全使用乙醚应注意哪些问题？ 抽提室内严禁有明火存在或用明火加热。乙醚中不得含有过氧化物，保持抽提室内良好通风，以防燃爆。 4、测定样品粒子粗细有什么要求？ 试样粗细度要适宜。试样粉末过粗，脂肪不易抽提干净；试样粉末过细，则有可能透过滤纸孔隙随回流溶剂流失，影响测定结果。碳水化合物的测定1. 测定原理 样品经处理除去蛋白质等杂质后，加入盐酸，在加热条件下使蔗糖水解为还原性单糖，再用直接滴定法测定水解后样品中的还原糖总量。2. 测定方法简介 （1）样品处理：同直接滴定法测定还原糖。 （2）测定：按测定蔗糖的方法水解样品，然后再按直接滴定法测定还原糖含量。3说明分析结果的准确性及重现性取决于水解的条件，要求样品在水解过程中，只有蔗糖被水解而其他化合物不被水解。蔗糖是一种呋喃果糖苷，其水解速度比其他双糖及多数的低聚糖快得多，且在此反应条件下只有蔗糖能完全水解，其他双糖、低聚糖的水解作用微弱可忽略不计。果糖在酸性溶液中易分解，其他一些单糖类较稳定，但若长时间加热，单糖在酸性介质中将逐渐被分解，当有蛋白质、氨基酸存在时，这种分解作用更易进行故在测定中应严格控制水解条件，既保证蔗糖的完全水解又要避免其他多糖的分解。且水解结束应立即取出，迅速冷却中和，并尽快测定，以防止果糖及其他单糖类的损失。二、可溶性糖类的测定可溶性糖类的常规测定以还原糖测定为基础，普遍采用氧化还原滴定法。对于非还原性糖，常采用先使之水解为还原性糖，然后再用进行测定。在工厂生产过程中，常用简便的密度法和折光法，果胶和纤维素的测定多采用重量法。（一）可溶性糖类的提取和澄清食品中的可溶性糖通常是指葡萄糖、果糖等游离单糖及蔗糖等低聚糖。测定可溶性糖时一般须将样品磨碎、浸渍成溶液（提取液），过滤，并对提取液进行纯化，除去干扰物质，然后才能测定。2、直接滴定法原理 将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。 该沉淀与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。 在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀。 这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合物；二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由兰色变为无色，即为滴定终点； 根据样液消耗量可计算出还原糖含量各步反应式如下： 为消除Cu2O沉淀对滴定终点观察的干扰,在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾,使之与Cu2O生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下： Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O = K2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH Cu2+ + 还原糖-Cu+从反应式可知，理论上1mol葡萄糖可以将6molCu2+ 还原为Cu+。但实验结果表明，1mol葡萄只能还原5mol多点的Cu2(因为有副反应发生)，且随反应条件变化而变化。因此，不能根据上述反应式直接计算出还原糖含量，而是用已知浓度的葡萄糖标准溶液标定的方法，或利用通过实验编制出的还原糖检索表来计算。在测定过程中还要严格遵守标定或制表时所规定的操作条件，如热源强度(电炉功率)、锥形瓶规格、加热时间、滴定速度等,才能得到准确的检测结果。3、方法适用范围及特点 本法又称快速法，它是在蓝一爱农容量法基础上发展起来的，其特点是试剂用量少, 操作和计算都比较简便、快速，滴定终点明显。 适用于各类食品中还原糖的测定。但测定酱油、深色果汁等样品时因色素干扰，滴定终点常常模糊不清，影响准确性。本法是国家标准分析方法。4. 测定步骤(1)样品预处理： 乳类、乳制品及含蛋白质的饮料 (雪糕、冰淇淋、豆乳等)：称取固体样品或吸取液体样品置于容量瓶中加适量水摇匀后慢慢加入乙酸锌及亚铁氰化钾溶液加水至刻度，混匀静置0.5h 用干燥滤纸过滤，弃去初滤液收集滤液供测定用。 酒精性饮料：吸取样品置于蒸发皿中用氢氧化钠中和至中性在水浴上蒸发至原体积的 1/4 后（除去酒精）移入容量瓶中，加适量水混匀以下按项操作。 含多量淀粉的食品： 称取样品置于容量瓶中，加适量水在45水浴中加热 1h，振摇 取出冷却后加水至刻度，混匀静置吸取适量上清液于另一容量瓶中以下按 项操作。 汽水等含CO2饮料：吸取样品于蒸发皿中在40水浴上除去CO2移入容量瓶中用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶加水至刻度，混合后备用。(2) 斐林试剂的标定 主要试剂： 碱性酒石酸铜甲液：硫酸铜+次甲基蓝 碱性酒石酸铜乙液：酒石酸钾钠 + NaOH + 亚铁氰化钾 乙酸锌溶液、亚铁氰化钾溶液 葡萄糖标准溶液：准确称取经 98 100 干燥至恒重的无水葡萄糖，加水溶解后移入1000 m1容量瓶中，加入5m1盐酸(防止微生物生长)。准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml，置于250ml锥形瓶中，加水10ml，加玻璃珠3粒。从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，加热使其在2分钟内沸腾， 准确沸腾30秒钟，趁热以每2秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。 记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。平行操作3次，取其平均值，按下式计算：FcV 式中： F10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量，mg； c葡萄糖标准溶液的浓度，mgml； V标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积，m1。(3) 样品溶液的预测 吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00ml，置于 250ml锥形瓶中，加水10ml，加玻璃珠3粒，加热使其在2分钟内至沸腾，准确沸腾 30 秒钟， 趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要始终保持溶液呈沸腾状态。 待溶液蓝色变浅时， 以每2秒l滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。 样液预测的目的：1.预测样液大概的消耗量，以便在正式滴定时加快滴定速度（保证1min内完成续滴定操作），提高测定准确性；2.了解待测样液的稀释倍数是否恰当，过大过小时应加以调整，使滴定时消耗的样液量在10ml左右。(4)样品溶液正式测定 吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液各5.00ml，置于250 ml锥形瓶中，加水10 ml， 从滴定管中加入比预测时样品溶液消耗总体积少 lml 的样品溶液，加热使其在2分钟内沸腾，准确沸腾30秒钟。趁热以每2秒1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品溶液的总体积。同法平行操作3份，取平均值。4.结果计算5.如何提高测定的准确度和精密度？ 斐林试剂测糖的实质是 Cu2+ 被糖中羰基还原。 其反应是在强碱性溶液及沸腾条件下进行，反应产物极为复杂，为得到正确的结果，就必须严格遵循操作规程进行。钙的测定：EDTA络合滴定法：EDTA（乙二胺四乙酸二钠盐）滴定法测定钙含量，基于EDTA与样品消化液中的钙能形成比钙红指示剂与钙所形成的络合物更加