REACH法规第四卷译稿-38.doc

B.38 有机磷物质28天重复剂量的延迟性神经毒性1. 方法1.1. 引言在对物质毒害作用的评估中,考虑到能引发可能在其它毒性实验中不会发现的特定种类的神经毒害性的这类物质存在的可能性是非常重要的.已经观察到这种有机磷物质能引发延缓神经毒害性,并且应考虑作为评估的候选物.体外筛选测试应当被进行以证实应利用反映在活的有机体内的测定来确认这些那些可能引发延缓神经毒害性的物质；然而，从在活的有机体内体外研究中得到的负面发现阴性结果并没有并不能提供那种测定物质不是毒害神经物质的依据。这种28天内延缓迟神经毒害性的测定提供了关于由于在一段限制的时间内重复的暴晒而导致的可能的健康危机的实验数据。它也将提供信息或关于剂量反应的实验数据情况并且能提供一个无观察反作用效果水平，它可被用于建立暴漏的安全标准，的评估。能有利于建立对暴晒的安全标准的不用观察的相反效应标准的评估。又见B部分总的引言。1.2. 定义有机磷物质包括不带电荷的有机磷的酯，硫酯或有机磷的酐，有机磷酸或有机磷酰胺的酸或相关的亚磷酸，phosphonothioich或有机亚磷酰胺的酸或可能导致能在这种物质中看到的延缓神经毒害症状的其它物质。延缓神经毒害症状是与运动失调的延长的迟缓攻击，在脊椎骨和外部神经的末端和定目标为在神经中枢组织的酯酶的神经病的抑制物相联系的综合症状。1.3. 测定方法原则原理测定物质的日剂量28天内口头分配给驯良家养母鸡，直到最后剂量之后的14天，至少每天要观察母鸡的行为异常，运动失调和瘫痪症。在特殊神经变性病中旨在酯酶抑制物的生物化学的测定方法，必须在从每个组中随机抽取的母鸡身上进行，一般在最后剂量服用后的24和48小时后。服用最后剂量的两周后，剩下的母鸡要杀死，并且进行选择性神经中枢组织的组织病理学说的测定。1.4. 测定方法的描述1.4.1. 准备随机挑选的不受滤过性毒菌引起的疾病和药疗法影响的不具有步伐异常的健康年轻的成年母鸡，分配给各个测定对照组小组，至少用5天时间使它们在研究开始前适应实验室的环境。必须使用足够大的能够允许鸡自由活动的又便于观察步法的笼子和围场。每天口饲，每个星期七天都必须严格执行，最好是用胶囊的分配或强饲。液体可以是未经掺杂的或者是溶解在一种合适的溶剂中就像谷物油。固体如果可能必须是溶解的因为在强饲胶囊中大剂量的固体可能不能很好的吸收。像不似水的溶剂应该要了解它的毒性，如果不知道必须在实验前决定。1.4.2. 实验条件动物样品建议使用年龄在8到12个月的年轻成年驯良下蛋母鸡。应使用标准大小种类和血统的而且这些母鸡在正常的能允许自由活动的条件下饲养。数目和性别除了实验小组，还必须有溶剂对照组小组和直接阳性对照组小组。溶剂对照组小组和实验小组应在同一方式下测定，除了忽略测定物质的分配。在每个组应有足够数目的母鸡，保证至少有6只鸡能被生物化学上的决定所杀死（两个时间点上每次三只），并且有6只可以存活14天预先处理的病理观察期。剂量标准剂量的选择必须考虑到关于延缓神经毒害性精确测定的结果和其他任何存在的毒害性或者可得到的测定化合物的兴奋实验数据。最高剂质量标准应从促进毒害作用这一目的来选择。最好能延缓神经毒害性，但又不致死或明显的受苦。总之，这个剂质量标准逆降的顺序必须用能证明任何与剂量有关的反应和在最低剂量时没有观察到相反的影响。限制实验如果在至少1000mg每 kg体重每天的剂质量标准的实验，并使用为这个研究所描述的进行并没产生可观察到的毒性效应，并且如果毒性程度并不象期待的那样基于结构上有相连的物质，那么用更高剂量的实验就不需考虑了，限制实验除了因人为的接触表明应使用高剂质量标准外都能适用。观察期所有的动物在暴晒期间和14天后必须至少每天观察，除非是计划内的杀死。1.4.3. 实验步骤动物在28天这段时间内每个星期七天都应喂测定物质。整体全面观察观察必须在处理之后马上开始，所有的母鸡都应在28天处理期内，及喂食后的14天内至少每天观察一次，直到计划内的杀死。所毒性害的迹象都要记录下来，包括开始的种类，严重程度和行为异常的持续时间。运动失调必须用一种包含至少四种标准的普通分登级标准衡量，并且记下分析。至少一周两次，被选作进行组织学研究的母鸡应带出实验室，使其进行一系列强迫性运动，像爬梯子，这样一来有助于最少量毒害影响的观察。快死的或在痛苦中挣扎的动物应一发现就转移，人为的杀死和验尸。体重所有的母鸡在实行药物分配前必须称重，在这之后至少每周一次。生物化学从每个实验和药剂对照组小组随机选择的6只母鸡，和从直接阳性对照组小组抽取的三只母鸡（如果这个组是同步的话），在服药一些天之后杀死，准备好脑和腰脊椎柱，此外，它可能也对准备和分析用于酯酶禁止活动的毒害目标的分析的坐骨神经组织。正常地，对照组和每个实验组的三只鸡在最后的喂食24小时后杀死，另外三只48小时后如果从精确的研究中或其它（像毒理学）得到实验数据表明最后剂量后的其它时间杀死更可取，可以用这些时间，并在文件中证明根本理由。如果确认合适，对乙酰胆碱酯酶（AchE）的分析同样可以在这些样品上进行。然而，AchE的自发反应可能会在活的有机体内发生，并会导致不可估量的力量像一种AchE抑制剂一样的物质。总体全面验尸对动物样品的总体全面验尸（计划内的杀死和将死前的杀死）必须包括对脑和脊椎骨外观的观察。组织病理学说的实验在观察期存活下来的动物身上的神经组织并且未用作生物化学研究和必须进行微观实验，组织应固定在原位置，用灌注技术。划分必须包括小组（中部纵向的标准），延髓，脊椎骨和外部神经。脊椎骨应在子宫颈部分的上部，中部胸廓和腰部荐骨地区摘取。远侧的胫骨神经部分和它的到腓肠肌的肌肉坐骨神经上的分枝也必须摘取。每个部分需用合适的髓磷脂和轴突特性的着色剂着色。最初，在对照组和高剂量小组必须进行关于所有动物保存好的组织的显微测定。当在高剂量组有了影响的证明之后，显微测定也必须在从中等剂量，地剂量的小组的母鸡身上进行。2.实验数据选择这种方法（生物化学，组织病理学和行为观察学）在终点处的否定阴性结果对于延缓神经毒害性并不需要更深的测定。而模棱两可的或不准的结果可能需要更深层次的评估。应提供个别实验数据，所有的实验数据都应用表格的形式总结归纳，表示每个测定小组实验前的动物数，被损害的动物数，行为和生物化学影响，以及这些被损害和影响的种类和血统和每个的百分比。这个研究的结果应用发生率，严重程度和行为的，生物化学的组织病理学之间的交互作用以及任何其它观察到的在处理和对照组小组中的影响来评估。用数字表示的结果应用合适的普遍接受的统计方法来评估，使用的评估方法应在研究计划中选择。3. 实验结果报告测定结果报告测定结果报告，如果可能，应包括以下实验数据以下信息：3.1. 测定动物- 使用的种类- 动物样品的数目数量和年龄- 来源，居住饲养条件等等- 在实验前动物样品的个体体重3.2. 实验条件- 测定药物的准备，稳定性和同性均匀性，任何适合方面的细节- 溶剂选择的确认- 测定物质分配的细节- 食物和水质量的细节- 剂量选择的理论基础- 剂量分配的详述，包括药剂的细节，容量以及分配材料的物理状态- 如果不是24小时和48小时，生物化学决定选择其它时间的