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文档简介
Western blot 实验技术,张 蓓,Western Blot基本原理,在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来检测。,一、实验原理 Western Blot法又称免疫印迹法（IBT），分三个阶段进行。 第一阶段：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。 第二阶段：电转移。 第三阶段：固相酶免疫测定。,三、固相酶免疫测定检测ENA自身抗体,（一）原理,（二）材料 1、洗涤液：含0.05吐温-20的pH7.4的PBS 2、酶标抗人IgG 3、阴性对照血清、阳性对照血清 4、底物溶液 5、终止液 6、恒温摇床、微量加样器、反应槽、塑料袋、 滴管、吸管等。,（三 ）方法 1次日取出已封闭的NC膜，用洗涤液漂洗5次，每次1min。 2. 将剪下条带放入反应槽中，加入1ml洗涤液，再已加入20l血清混匀，37恒温摇动40min。 3取出洗涤液漂洗5次，每次1min。 4加入1ml酶标羊抗人IgG，37恒温摇动30min。 5取出洗涤液漂洗5次，每次1min。 6加入底物液1ml，显色10min。 7加入终止液终止反应。,结果判断 用肉眼观察。出现染色条带为阳性，不出现染色条带为阴性，不同的疾病可以出现不同的条带。跟据条带位置 判断结果。 判断标准： 1抗Sm抗体：同时出现29KD、28KD、13.5KD条带。 2抗SSA抗体：60KD、52KD任意出现一条带。 3抗SSB抗体：47KD、45KD应用时出现条带。 4抗Jo-1抗体：55KD出现条带。 5抗Scl-70抗体：同时出现86KD、67KD条带。,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析,主要经营：课件设计，文档制作，网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projector or computer, or print the presentation and
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