分光光度计设计实验.doc

设计实验可见分光光度法测定新血宝胶囊中铁的条件实验实验者：摘要：采用分光光度法测定的铁，并且讨论了吸收波长，显色剂用量，溶液ph，显色时间和显色温度等因素对吸光度的影响，从而找到最佳实验条件，然后在此条件下测定新血宝胶囊中铁的含量。关键词：可见分光光度法：铁含量：新血宝：测定条件：实验1 综述：新血宝胶囊，为胶囊剂，内容物为棕黄色的粉末；气香，味微苦、甘，有铁腥味。为内科虚证类非处方药药品。功能主治： 补血益气，健脾和胃。用于痔疮出血、月经过多、偏食等原因所致的缺铁性贫血。成分为鸡血藤、黄芪、大枣、当归、白术、陈皮、硫酸亚铁。本实验主要是采用邻二氮菲分光光度法测定新血宝胶囊中硫酸亚铁中的铁。采用这种办法将受到很多因素的影响，如显色剂的用量，最大吸收波长，溶液ph，显色时间，显色温度等的影响，经查文献知最佳的实验条件：显色剂用量为0.15% 0.82.4ml1，最大吸收波长510514nm4，溶液ph 582，显色时间（室温下）1分钟5，显色温度293.15K及以上3等。亚铁离子容易被氧化生成三价铁离子，三价铁离子与邻二氮菲也能生成淡蓝色络合物但其不稳定。故在显色前用盐酸羟胺将三价铁离子还原成亚铁离子，化学方程式： 2 Fe3+ + 2 NH2OHHCl = 2 Fe2+ + N2 + 2 H2O + 4 H+ + 2 Cl-。2.仪器与试剂仪器：721分光光度计，phS-2型酸度计，8个25ml的容量瓶，7个50ml的容量瓶，恒温箱5个，不同规格的移液管. 试剂：供试液，铁标准液（160ug/ml），邻二氮菲（0.15%），ph=5的HAc-NaAc缓冲液，HCl（0.1mol/L），HCl（0.001mol/L），HCl（0.0001mol/L），NaOH（0.01mol/L）NaOH（0.001mol/L），NaOH（0.0001mol/L），NH2OHHCl（10%）供试品溶液的制备：取本品内容物0.25克，精密称定，置于250ml容量瓶中，加硫酸溶液（1-20）2.5ml和水100ml,混匀，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取滤液2ml ，置于50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀即得。对照品溶液浓度:160ug/ml.。3.实验条件的选择3.1显色剂的用量原理：不同量的邻二氮菲与亚铁离子在ph=29的还原性溶液中生成橙红色的配合物在510nm测得其吸光度。据资料1可知100ug/ml的铁标准液稀释50倍，显色剂邻二氮菲（0.15%）的用量为13ml时，吸光度值基本不变。本实验选用的铁标准液为160ug/ml，稀释50倍后，粗估邻二氮菲的用量应在25ml之间。方法:取8个25ml的容量瓶，各加铁标准液0.5ml，及5ml的HAc-NaAc缓冲液，1ml的10%的NH2OHHCl溶液，摇匀，放置两分钟后分别加入0.15%的邻二氮菲1.0ml，2.0ml，2.5ml，3.0ml，3.5ml, 4.0ml，4.5ml, 5.0ml，用水稀释至刻度，摇匀。在721分光光度计上用1cm的吸收池，在选定的波长510nm测定溶液的吸光度（A）。绘制吸光度-邻二氮菲体积曲线。V显色剂0.51.02.03.03.54.04.55.0A绘制A-v图像选取吸光度最大且恒定的显色剂用量。3.2 最大吸收波长原理：亚铁离子与适量的邻二氮菲在pH=29的还原性的溶液中生成橙红色的配合物，在不同的波长（500530nm）下测定吸光度（A）。据资料3可知亚铁离子与邻二氮菲的配合物在510514nm波长处有最大吸收，故将波长范围确定在490530nm之间。方法:取25ml的容量瓶，加铁标准液0.5ml，及5ml的HAc-NaAc缓冲液，1ml的10%的NH2OHHCl溶液，摇匀，放置两分钟后加入0.15%的邻二氮菲 ml，用水稀释至刻度，摇匀。在721分光光度计上用1cm的吸收池，在不同的波长（490530nm）测定溶液的吸光度（A）。绘制吸光度-波长曲线。选取吸光度最大且恒定的波长。波长490500510512514516518520530A3.3溶液ph原理：亚铁离子与适量的邻二氮菲在pH=39的还原性的溶液中生成橙红色的配合物，在最大吸收波长下测定吸光度（A）。据资料3可知邻二氮菲与亚铁离子显色生成橙红色络合物在ph=58范围内吸光度最大。故实验选择的ph范围为39.方法:取7个25ml的容量瓶，各加标准液0.5ml及1ml10%的NH2OHHCl溶液，摇匀，放置两分钟后加入0.15%的邻二氮菲 ml，如下表加入NaOH和HCl，用水稀释至刻度，摇匀，并用ph计测定溶液ph。在721分光光度计上用1cm的吸收池，在最大吸收波长测定溶液的吸光度（A）。绘制吸光度-PH曲线。选取吸光度最大且恒定的ph。HCl（0.1mol/L）NaOH（0.01mol/L）pH（估计值）pH（测量值）酸碱配比1ml7.5ml3酸碱配比1ml9.75ml4HCl（0.001mol/L）NaOH（0.0001mol/L）pH（估计值）pH（测量值）酸碱配比1ml7.5ml5酸碱配比1ml9.75ml6酸碱配比1ml10ml7HCl（0.0001mol/L）NaOH（0.001mol/L）pH（估计值）pH（测量值）酸碱配比9.75ml1ml8酸碱配比7.5ml1ml9PH3456789A3.4 显色时间原理：亚铁离子与适量的邻二氮菲在pH=29的还原性的溶液中生成橙红色的配合物，不同的时间（535分钟）在最大吸收波长下测定吸光度（A）。方法:取25ml的容量瓶，加标准液0.5ml，及5ml的HAc-NaAc缓冲液，1ml的10%的NH2OHHCl溶液，摇匀，放置两分钟后分别加入0.15%的邻二氮菲 ml，用水稀释至刻度，摇匀。在721分光光度计上用1cm的吸收池， （535分钟） 在选定的波长 nm测定溶液的吸光度（A）。绘制吸光度-时间曲线。min时间5101520253035A3.5显色温度原理：在不同的温度下（535度）亚铁离子与适量的邻二氮菲在pH=29的还原性的溶液中生成橙红色的配合物，适宜的时间最大吸收波长下测定吸光度（A）。据资料6可知显色时间达20分钟当温度在2030度时，吸光度最大且稳定不变.方法:取6个25ml的容量瓶，各加标准液0.5ml，及5ml的HAc-NaAc缓冲液，1ml的10%的NH2OHHCl溶液，摇匀，分别放置恒温箱（5,10,15,20,25,30,35度）中两分钟，同时将0.15%的邻二氮菲 ml放入相应的恒温箱中2分钟,然后同温度亚铁离子与邻二氮菲混合，用水稀释至刻度摇匀并置与恒温箱中 分钟之后的，在721分光光度计上用1cm的吸收池，在选定的波长510nm测定溶液的吸光度。绘制吸光度-温度曲线。温度5101520253035A总结：测量水中铁含量最佳的实验条件。1显色剂用量2 最大吸收波长3溶液ph4 显色时间5 显色温度4. 可见分光光度法测定新血宝胶囊中铁方法：:取6个50ml的容量瓶，各加标准液0.00,0.25,0.50,1.00,1.50,2.00 ml及5ml的HAc-NaAc缓冲液，1ml的10%的NH2OHHCl溶液，摇匀，放置两分钟后分别加入0.15%的邻二氮菲 ml,用水稀释至刻度，摇匀。在721分光光度计上用1cm的吸收池，在选定的波长510nm测定溶液的吸光度A。绘制铁离子浓度-吸光度标准曲线。并求出线性回归方程。C(ug/ml)00.81.63.24.86.4A在同样的条件下，测定供试液(调ph)与邻二氮菲配合物的吸光度。带入线性回归方程求出供试液的铁离子浓度为c1（ug/ml）.新血宝内容物（0.25g）里含有亚铁离子质量为m1(ug)K为稀释倍数 k=50/2=25m1=c1*K*250结论：新血宝胶囊中铁的含量为m1药典: 新血宝胶囊中铁的含量为 之间故判断该药品是否合格。参考文献1 秦岩.邻二氮菲分光光度法测定微量铁实验的改进.J沈阳医学院报,2008,10(1) :44-452 李建雄.自来水铁含量测定的实验研究.J内蒙古石油化工，2011，（6）:4