农副产品中亚硫酸盐的测定.docx

XXX实验室检测中心管理体系文件作业指导书（第A版 第0次修改）文件编号：编写：审核：批准：批准日期：受控状态： 受控 非受控正副版本： 正本 副本持有者：发布日期： 实施日期：作业指导书文件编号：第1页 共5页标 题：农副产品中亚硫酸盐的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日1.目的使农副产品中亚硫酸盐的测定处于受控状态，保证亚硫酸盐检测结果的准确性与一致性；规范参加本项目检测工作人员的操作规程。2.适用范围适用于农副产品中亚硫酸盐的测定；本方法检出限:1mg/kg3.引用标准食品中亚硫酸盐的测定 GB 5009.34-2003中华人民共和国国家标准 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 6682-2008；4.概述亚硫酸盐，通常指二氧化硫及能够产生二氧化硫的无机性亚硫酸盐的统称，是一类很早即在世界范围内广泛使用的食品添加剂。大量使用亚硫酸盐类食品添加剂会破坏食品的营养素。亚硫酸盐能与氨基酸、蛋白质等反应生成双硫键化合物，能与多种维生素结合，特别是与维生素B1的反应为不可逆亲核反应，结果使维生素B1裂解为其它产物而损失。由此，FDA规定亚硫酸盐不得用于作为维生素B1源的食品。我国规定生产A级绿色食品不得使用硫磺漂白剂。亚硫酸盐能够使细胞产生变异，亚硫酸盐会诱导不饱和脂肪酸的氧化。动物长期使用含亚硫酸盐的饲料会出现神经炎，骨髓萎缩等症状，并对成长有障碍。5.测定5.1 原理亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色络合物，此络合物于波长550nm处有最大吸收峰，且在一定范围内其颜色的深浅与亚硫酸盐的浓度成正比，可以比色定量。结果以试样中二氧化硫的含量表示。5.2 试剂5.2.1 四氯汞钠吸收液：称取13.6g氯化高汞及6.0g氯化钠，溶于水中并稀释至1000mL放置过夜，过滤后备用。作业指导书文件编号：第2页 共5页标 题：农副产品中亚硫酸盐的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日5.2.2 氨基磺酸铵溶液(12g/L)。5.2.3甲醛溶液（2g/L）：吸取 0.55 mL无聚合沉淀的甲醛（36%），加水稀释至100 mL，混匀。5.2.4淀粉指示液：称取1g可溶性淀粉，用少许水调成糊状，缓缓倾入100 mL沸水中，搅拌煮沸，放冷备用，此溶液临用时配制。5.2.5亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100 mL5.2.6乙酸锌溶液：称取22g乙酸锌溶于少量水中，加入3mL冰乙酸，加水稀释至100 mL。5.2.7盐酸副玫瑰苯胺溶液：称取0.1g盐酸副玫瑰苯胺（C19 H18 N2CL.4H2O:p-rosaniline hydrochlo-ride）于研钵中，加少量水研磨使溶解并稀释至100 mL。取出20mL，置于100 mL容量瓶中，加盐酸（1+1）充分摇匀后使溶液由红变黄，如不变黄再滴加少量盐酸至出现黄色，再加水稀释至刻度，混匀备用。5.2.8碘溶液c(1/2I2)=0.100 mol/L。5.2.9硫代硫酸钠标准溶液c(Na2S2O35H2O)=0.100 mol/L。5.2.10二氧化硫标准溶液：称取0.5g亚硫酸氢钠，溶于200 mL四氯汞钠吸收液中，放置过液，上清液用定量滤纸过滤备用。吸取10.0 mL亚硫酸氢钠-四氯汞钠溶液于250mL碘量瓶中，加100 mL水，准确加入20.00 mL碘溶液（0.1mol/L），5 mL冰乙酸，摇匀，放置于暗处，2min后迅速以0.100mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色，加0.5 mL淀粉指示剂，继续滴定至无色。另取100 mL水，准确加入0.1mol/L碘溶液20.0 mL、5mL冰醋酸，按同一方法做试剂空白试验。二氧化硫标准溶液的浓度按式(1)进行计算。式中： X二氧化硫标准溶液浓度（mg/mL）；V1测定用亚硫酸氢钠-四氯汞钠溶液消耗硫代硫酸钠标准溶液体积（mL）；作业指导书文件编号：第3页 共5页标 题：农副产品中亚硫酸盐的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日V2试剂空白消耗代硫酸钠标准溶液体积（mol/L）；C硫代硫酸钠标准溶液的摩尔浓度（mol/L）；32.03每毫升硫代硫酸钠c(Na2S2O35H2O)=1.000mol/L标准溶液相当于二氧化硫的质量(mg)。5.2.11二氧化硫使用液：临用前将二氧化硫标准溶液以四氯汞钠吸收液稀释成每毫升相当于2g二氧化硫。5.2.12氢氧化钠溶液（20g/L）。5.2.13硫酸（1+71）。5.3仪器分光光度计。5.4分析步骤5.4.1样品处理5.4.1.1水溶性固体试样如白砂糖等可称取约10.00g均匀试样（试样量可视含量高低而定），以少量水溶解，置于100 mL容量瓶中，加入4mL氢氧化钠溶液（20g/L），5min后加入4mL硫酸（1+71），然后加入20mL四氯汞钠吸收液，以水稀释至刻度。5.4.1.2固体试样如饼干、粉丝等可称取5.0g10.0g研磨均匀的试样，以少量水湿润并移入100 mL容量瓶中，然后加入20mL四氯汞钠吸收液，浸泡4 h以上，若上层溶液不澄清可加入亚铁氰化钾溶液 及乙酸锌溶液各2.5mL，最后用水稀释至100 mL刻度，过滤后备用。5.4.1.3液体试样如葡萄酒等可直接吸取5.010.0 mL试样，置于100mL容量瓶中，以少量水稀释，加20 mL四氯汞钠吸收液，摇匀，最后加水至刻度，混匀，必要时过滤备用。5.4.2测定吸取0.50ml5.0 mL上述试样处理液于25 mL带塞比色管中。另吸取0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.50、2.00 mL二氧化硫标准使用液（相当于0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、3.0、4.0g二氧化硫），分别置于25mL带塞比色管中。作业指导书文件编号：第4页 共5页标 题：农副产品中亚硫酸盐的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日于试样及标准管中各加入四氯汞钠吸收液至10 mL，然后再加入1 mL氨基磺酸铵溶液（12g/L）、1mL甲醛溶液（2g/L）及1 mL盐酸副玫瑰苯胺溶液，摇匀，放置20 min。用1cm比色杯，以零管调节零点，于波长550 nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。5.4.3计算试样中二氧化硫的含量按式（2）进行计算。式中： X测试样中二氧化硫的含量（g/kg）；A测定用样液中二氧化硫的质量（g）；m试样质量（g）；V测定用样液的体积（mL）。计算结果表示到三位有效数字。5.4.4精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不提超过10%。6.相关文件A. 天平称量操作规程；B. 722N可见光分光光度计操作规程；C.数显鼓风干燥箱操作规程7.注意事项A.本实验法检出浓度为1mg/kg。B.要求在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过10%。C.亚硫酸和食品中的醛、酮和糖相结合，以结合型的亚硫酸存在于食品中。加碱是将食品中的二氧化硫释放出来，加硫酸是为了中和碱，这是因为总的显色反应是在微酸性条件下进行的。D.显色时间时显色有影响，所以在显色时要严格控制显色时间。E.盐酸副玫瑰苯胺的精制方法如下：称取20g盐副玫瑰苯胺于400mL水中，用50mL盐酸（1+5）作业指导书文件编号：第5页 共5页标 题：农副产品中亚硫酸盐的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日酸化，徐徐搅拌，加4g5g活性炭，加热煮沸2mm。将混合物倒入大漏斗中，过滤（用保温漏斗趁热过滤）。滤液放置过夜，出现结晶，然后再用布