小槐花大极性部位的化学成分研究.docx

小槐花大极性部位的化学成分研究 小槐花大极性部位的化学成分研究 小槐花Desmodium caudatum DC.为山蚂蝗属小槐花亚属植物，该植物生于山坡、路旁草地、沟边、林缘、林下，分布于我国长江以南各省区，在印度、斯里兰卡、锡金、不丹、缅甸、马来西亚、日本、朝鲜亦有分布。小槐花作为我国民间常用药物，全株入药，性温味微苦，具有祛风除湿，消食杀虫等功效。前人对小槐花的化学成分及药物活性研究较少，目前从小槐花植物中共分离得到34个化合物，研究多集中在较弱极性部位成分，特别是黄酮苷元类化合物 3-5。本实验利用多种分离分析手段，对小槐花全草大极性部位（60%乙醇提取物大孔树脂60%乙醇洗脱部分）的化学成分进行了研究，从中分离得到13个化合物，通过核磁共振波谱、质谱及理化性质的分析、比较，鉴定了它们的结构。除化合物5外，其余12个化合物均为植物小槐花中首次分离得到的化合物，化合物2，3，68，1113等8个化合物为山蚂蝗属植物中首次分离得到的化合物。 1 材料 Bruker Avance 400 spectrometer型核磁共振仪和Bruker Avance 600 型核磁共振仪（瑞士Bruker公司），Thermo Scientific Q Exactive 质谱仪（赛默飞公司），LC-20AD高效液相色谱仪（日本岛津）。各种色谱硅胶均系青岛海洋化工厂生产，ODS，Sephadex LH-20为Pharmacia公司进口分装产品，色谱甲醇和乙腈均来自德国 Merck公司，分析纯氯仿、丙酮、甲醇等试剂均来自国药集团化学试本文由收集整理剂有限公司。植物样本由福建省永春县林业局邹秀红工程师鉴定为豆科山蚂蝗属植物小槐花D. caudatum的全草。 2 提取与分离 取干燥小槐花全草18 kg，加10倍量60%乙醇回流提取3次，每次2 h，收集滤液，减压浓缩至无醇味。称取D101大孔树脂13 kg，用95%乙醇浸泡过夜，次日用水洗净至无醇味。将所得小槐花提取液上柱，以乙醇-水系统（0， 20%， 60%， 95%）为流动相进行梯度洗脱，得到4个流分。 取大孔树脂60%乙醇-水洗脱部分（400 g），用大量甲醇溶解后抽滤，收集甲醇溶解部分，减压浓缩得DEC-3（225 g）。DEC-3部分经硅胶开放柱色谱，氯仿-甲醇系统梯度洗脱，根据TLC显色（10%硫酸乙醇溶液）结果合并为DEC-3ADEC-3S共19个子流分。DEC-3C部分经硅胶开放柱色谱，石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱，得到DEC-3C-1DEC-3C-4共4个流分，DEC-3C-3部分有晶体析出，得到化合物1（22.4 mg）。DEC-3D部分经Sephadex LH-20，氯仿-甲醇（11）等度洗脱，得到DEC-3D-1DEC-3D-4共4个流分，其中DEC-3D-3部分经硅胶开放柱，环己烷-乙酸乙酯系统梯度洗脱，得DEC-3D-3ADEC-3D-3L共13个流分，DEC-3D-3F部分经高效液相色谱制备（15%乙腈水加0.1%甲酸）得到化合物2（21.9 mg），3（4.1 mg）。DEC-3H部分经硅胶开放柱色谱，环己烷-丙酮系统另加2‰乙酸作为洗脱剂梯度洗脱，得到DEC-3H-1DEC-3H-14，其中DEC-3H-2部分有无色针状晶体析出，得到化合物4（7.0 mg）。DEC-3O部分经硅胶开放柱色谱，以氯仿-甲醇-水系统梯度洗脱，得到流分DEC-3O-1DEC-3O-7，共7个流分，其中DEC-3O-5（2.26 g），经聚酰胺凝胶开放柱色谱，甲醇-水（3565，5050，6040， 1000）梯度洗脱，得到DEC-3O-5ADEC-3O-5F，DEC-3O-5C有结晶析出，得到化合物5（559.2 mg），DEC-3O-6部分经Sephadex LH-20柱色谱，甲醇-水（11）等度洗脱，得到DEC-3O-6ADEC-3O-6O共计15个流分，其中DEC-3O-6C部分经反相ODS中低压色谱柱，甲醇-水系统梯度洗脱，得到DEC-3O-6C-1DEC-3O-6C-5，共5个流分，其中DEC-3O-6C-3部分经反相半制备HPLC（9%乙腈水）分离纯化，得到化合物6（7.0 mg），DEC-3O-6I部分经反相半制备HPLC（12.5%乙腈水）分离得到化合物7（2.5 mg），8（8.3 mg），DEC-3O-6K部分经反相半制备HPLC（15%乙腈水）分离得到化合物9（111.4 mg），DEC-3O-6L部分经反相半制备HPLC（15%乙腈水）分离得到化合物10（8.8 mg），11（49.6 mg），DEC-3O-6N部分经反相ODS中低压柱色谱，甲醇-水系统梯度洗脱，得到DEC-3O-6N-1DEC-3O-6N-4，其中DEC-3O-6N-1部分经反相半制备HPLC（16%乙腈水）分离纯化，得到化合物12（5.2 mg）。DEC-3P部分经硅胶开放柱色谱，氯仿-甲醇系统梯度洗脱，得到流分DEC-3P-1DEC-3P-5，其中DEC-3P-3部分经反相ODS柱色谱，甲醇-水系统梯度洗脱，得到DEC-3P-3ADEC-3P-3L，其中DEC-3P-3G有结晶析出，过滤得到化合物13（180.5 mg）。 3 结构鉴定 化合物1 无色针状结晶，ESI-MS m/z 153M+H+，175M+Na+。，600 MHz）δ： 9.81（1H，s，CHO），7.40（2H，m，H-2，6），7.02（1H，d，J=8.5 Hz，H-5），6.22（1H，s，4-OH），3.95（3H，s，3-OCH，150 MHz）δ： 191.1（CHO），151.9（C-4），147.4（C-3），130.1（C-1），127.7（C-6），114.6（C-5），109.0（C-2），56.3（3-OCH）。以上数据与文献对照基本一致，由此确定化合物1为香草醛。 化合物2 白色粉末，ESI-MS m/z 197.1 M+H+，219.1 M+Na+。OD，600 MHz）δ： 5.75（1H，s，H-7），4.22（1H，m，H-3），2.42（1H，m，H-4a），1.99（1H，ddd，J=14.4，2.8 Hz，2.5 Hz，H-2a），1.76（3H，s，H-11），1.74（1H，m，H-4b），1.53（1H，dd，J=14.4，3.7 Hz，H-2b），1.47（3H，s，H-9），1.27（3H，s，H-10）； 13C-NMR（CDOD，150 MHz）δ： 185.8（C-6），174.5（C-8），113.5（C-7），89.1（C-5），67.4（C-3），48.1（C-2），46.6（C-4），37.3（C-1），31.2（C-10），27.6（C-11），27.1（C-9）。以上数据与文献对照基本一致，由此确定化合物2为黑麦草内酯。 化合物3 淡黄色针状晶体，ESI-MS m/z 146 M+H+。H-NMR（acetone-d6，600 MHz）δ： 11.18（1H，br s，N-H），10.03（1H，s，H-9），8.22（1H，d，J=7.5 Hz，H-4），8.19（1H，s，H-7），7.54（1H，d，J=7.9 Hz，H-1），7.27（1H，td，J=7.4，1.2 Hz，H-6），7.24（1H，td，J=7.4，1.1 Hz，H-5）； 13C-NMR（acetone-d6，150 MHz）δ： 185.4（C-9），138.4（C-8），138.1（C-1），125.6（C-3），124.6（C-6），123.1（C-5），122.3（C-4），120.2（C-2），113.1（C-7）。以上数据与文献对照基本一致，由此确定化合物3为吲哚-3-甲醛。 化合物4 无色结晶，ESI-MS m/z 139 M+H+。H-NMR（acetone-d6，400 MHz）δ： 7.90（1H，dd，J=11.4，1.3 Hz，H-6），7.53（1H，dt，J=11.3，1.3 Hz，H-4），6.95（1H，d，J=11.4 Hz，H-3），6.94（1H，t，J=11.4 Hz，H-5）； 13C-NMR（acetone-d6，100 MHz）δ： 172.8（C-7），163.2（C-2），136.8（C-4），131.4（C-6），120.1（C-5），118.2（C-3），113.3（C-1）。以上数据与文献对照基本一致，由此确定化合物4为水杨酸。 化合物5 黄色粉末，三氯化铝显色为亮黄色，ESI-MS m/z 447 M+H+，469M+Na +。H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）（旋阻异构引起的信号分裂）δ： 7. 97（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′），6.85，6.83（1H，s，H-8），6.82，6.81（1H，s，H-3），4.63，4.59（1H，m，H-1″），4.20，4.01（1H，m，H-2″），3.86，3.88（3H，s，-OCH3），3.71，3.36（2H，m，H-6″），3.093.23（3H，m，H-3″5″）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）（旋阻异构引起的信号分裂）δ： 182.3，182.0（C-4），165.0（C-7），163.9，163.8（C-2），161.3（C-4′），160.4，159.6（C-5），156.9，156.8（C-9），128.6（C-2′，6′），121.0（C-1′），116.0（C-3′，5′），109.7，109.7（C-6），104.7，104.2（C-10），103.1，103.1（C-3），91.1，90.2（C-8），81.9，81.7（C-5″），79.1，79.1（C-3″），72.9，72.6（C-2″），71.0，70.9（C-1″），70.3，69.7（C-4″），61.8（C-6″），56.5（-OCH3），56.3（-OCH3）。以上数据与文献对照基本一致，由此确定化合物5为当药黄素。 化合物6 无色粉末，ESI-MS m/z 463 M+H+。H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ： 7. 56（1H，d，J=3 Hz，H-6），7.33（1H，dd，J=9.1，3.1 Hz，H-4），6.91（1H，d，J=9.1 Hz，H-3），4.97（1H，d，J=2.3 Hz，H-1″），4.74（1H，d，J=7.3 Hz，H-1′），4.00（1H，dd，J=11.1，1.9 Hz，H-6′a），3.96（3H，s，-OCH3），3.94（1H，m，H-4″a），3.90（1H，d，J=2.3 Hz，H-2″），3.74（1H，m，H-4″b），3.61（1H，dd，J=11.1，6.4 Hz，H-6′b），3.57（2H，s，H-5″），3.53（1H，m，H-5′），3.42（1H，m，H-3′），3.41（1H，m，H-2′），3.34（1H，m，H-4′）；13C-NMR（CDOD，150 MHz）δ： 171.6（C-7），158.5（C-2），151.5（C-5），127.5（C-4），119.4（C-3），119.0（C-6），113.6（C-1），111.1（C-1″），103.8（C-1′），80.7（C-3″），78.2（C-2″），78.0（C-3′），77.2（C-5′），75.1（C-4″），75.0（C-2′），71.7（C-4′），68.7（C-6′），65.7（C-5″），53.2（-OCH3）。以上数据与文献对照基本一致，由此确定化合物6为saccharumoside C。 化合物7 黄色粉末，三氯化铝显色为亮黄色，ESI-MS m/z 451 M+H+。OD，600 MHz）δ： 7. 36（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′），6.83（2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′），6.23（1H，d，J=2.2 Hz，H-6），6.21（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），5.02（1H，d，J=11.8 Hz，H-2），4.97（1H，d，J=7.3 Hz，H-1″），4.60（1H，d，J=11.7 Hz，H-3），3.87（1H，m，H-6″a），3.68（1H，m，H-6″b），3.45（1H，m，H-3″），3.43（1H，m，H-2″），3.40（1H，m，H-5″），3.39（1H，m，H-4″）；13C-NMR（CDOD，150 MHz）δ： 199.5（C-4），167.5（C-7），166.5（C-9），164.5（C-5），159.5（C-4′），130.6（C-2′，6′），129.2（C-1′），116.3（C-3′，5′），103.7（C-10），101.5（C-1″），98.5（C-6），97.1（C-8），85.3（C-2），78.4（C-5″），78.0（C-3″），74.8（C-2″），74.0（C-3），71.3（C-4″），62.5（C-6″）。以上数据与文献对照基本一致，由此确定化合物7为isosinensin。 化合物8 黄色粉末，三氯化铝显色为亮黄色，ESI-MS m/z 595 M+H+，617 M+Na +。H-NMR（DMSO-d6，600 MHz）δ： 8.08（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.90（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′），6.83（1H，s，H-8），6.44（1H，s，H-6），5.55（1H，s，H-1），5.48（1H，d，J=7.4 Hz，H-1″），3.84（1H，m，H-2），3.63（1H，m，H-3），3.56（1H，m，H-6″），3.42（1H，m，H-5），3.32（1H，m，H-6″），3.29（1H，m，H-4），3.21（1H，m，H-3″），3.19（1H，m，H-2″），3.08（2H，m，H-4″，5″），1.12（3H，d，J=6.1 Hz，H-6）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ： 177.6（C-4），161.6（C-7），160.9（C-5），160.2（C-4′），156.8（C-2），156.0（C-9），133.5（C-3），131.0（C-2′，6′），120.7（C-1′），115.2（C-3′，5′），105.7（C-10），100.7（C-1″），99.4（C-6），98.4（C-1），94.5（C-8），77.6（C-5），76.4（C-3″），74.2（C-2″），71.6（C-4），70.3（C-3），70.1（C-5），69.9（C-4″），69.8（C-2），60.8（C-6″），17.9（C-6）。以上数据与文献13-14对照基本一致，由此确定化合物8为7-O-α-L-吡喃鼠李糖基-山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。 化合物9 黄色粉末，三氯化铝显色为亮黄色，ESI-MS m/z 433 M +H+。H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ： 13.56（1H，s，5-OH），7.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′），6.78（1H，s，H-3），6.51（1H，s，H-8），4.80（1H，d，J=10 Hz，H-1″），4.05（1H，t，J=9.2 Hz，H-2″）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ： 181.9（C-4），163.5（C-7），163.4（C-2），161.2（C-4′），160.6（C-5），156.2（C-9），128.4（C-2′，6′），121.1（C-1′），116.0（C-3′，5′），108.9（C-6），103.4（C-10），102.8（C-3），93.7（C-8），81.5（C-5″），78.9（C-3″），73.1（C-1″），70.6（C-4″），70.2（C-2″），61.5（C-6″）。以上数据与文献对照基本一致，由此确定化合物9为异牡荆素。 化合物10 黄色粉末，三氯化铝显色为黄色，ESI-MS m/z 433 M+H+。H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ： 13.16（1H，s，5-OH），8.01（2H，d，J=7.9 Hz，H-2′，6′），6.89（2H，d，J=8.4 Hz，H-3′，5′），6.77（1H，s，H-3），6.26（1H，s，H-6），4.70（1H，d，J=9.6 Hz，H-1″），3.164.60（5H，m，H-2″6″）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ： 182.0（C-4），163.8（C-2），163.0（C-7），161.1（C-5），160.4（C-4′），156.0（C-9），128.9（C-2′，6′），121.6（C-1′），115.8（C-3′，5′），104.6（C-8），103.8（C-10），102.4（C-3），98.3（C-6），81.8（C-5″），78.7（C-3″），73.4（C-1″），70.9（C-2″），70.6（C-4″），61.3（C-6″）。以上数据与文献对照基本一致，由此确定化合物10为牡荆素。 化合物11 黄色粉末，三氯化铝显色为亮黄色，ESI-MS m/z 459 M+Na+。H-NMR（DMSO-d6，600 MHz）δ： 7.02（2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6），6.65（2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5），5.94（1H，s，H-3′），4.51（1H，d，J=9.8 Hz，H-1″），3.87（1H，m，H-2″），3.65（1H，dd，J=11.0，3.7 Hz，H-6″a），3.40（1H，m，H-6″b），3.22（2H，t，J=7.7 Hz，H-α），3.13（1H，m，H-3″），3.12（1H，m，H-5″），3.12（1H，m，H-4″），2.77（2H，t，J=8.0 Hz，H-β）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ： 164.8（C-4′），163.7（C-6′），161.6（C-2′），155.4（C-4），131.6（C-1），129.2（C-2，6），115.1（C-3，5），104.1（C-1′），103.6（C-5′），94.6（C-3′），81.3（C-5″），78.9（C-3″），73.6（C-1″），70.6（C-4″），70.5（C-2″），61.3（C-6″），45.6（C-α），29.6（C-β）。以上数据与文献对照基本一致，由此确定化合物11为nothofagin。 思想汇报 化合物12 黄色粉末，ESI-MS m/z 391 M +H+。OD，400 MHz）δ： 7.45（2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′），7.08（2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，5′），7.00（1H，d，J=16.3 Hz，H-8），6.87（1H，d，J=16.3 Hz，H-7），6.47（2H，d，J=1.9 Hz，H-2，6），6.18（1H，br s，H-4），4.93（1H，m，H-1″），3.90（1H，dd，J=12.0，1.56 Hz，H-6″a），3.71（1H，dd，J=12.0，5.2 Hz，H-6″b），3.35-3.48（4H，m，H-2″5″）；13C-NMR（CDOD，100 MHz）δ： 158.9（C-3，5），158.8（C-4′），141.2（C-1），133.4（C-1′），129.0（C-7），128.7（C-2′，6′，8），118.1（C-3′，5′），106.1（C-2），103.1（C-4），102.4（C-1″），78.3（C-2″），78.2（C-3″），75.1（C-5″），71.6（C-4″），62.7（C-6″）。以上数据与文献17-18对照基本一致，由此确定化合物12为resveratroloside。 化合物13 黄色粉末，三氯化铝显色为黄绿色，ESI-MS m/z 615 M +Na+。H-NMR（DMSO-d6，600 MHz）δ： 1