林医生白细胞降低性肺炎患者CD4CD25调节性T细胞的表达与临床意义.doc

白细胞降低性肺炎患者CD4+CD25+调节性T细胞的表达与临床意义林燕梅 （东莞市大朗医院内一科，广东 东莞，523770）林燕梅，女，1972年出生，呼吸内科硕士，副主任医师。通讯方式：广东省东莞市大朗镇金朗中路85号大朗医院内一科, 邮编 523770。电话号码【摘要】背景：白细胞降低往往容易导致特殊病原体肺炎的漏诊及误诊，且研究表明该类肺炎与细胞免疫学的异常密切相关。CD4+CD25+ T细胞(Treg)是一种具有抑制性功能的调节性T细胞，在某些类型的肺炎患者的表达升高，但白细胞降低性肺炎患者的Treg表达如何，其临床意义何在？目前尚缺少相关研究。目的：探索Treg在白细胞降低性肺炎发病机制的作用。方法：收集白细胞降低的肺炎患者40例，在连续进行痰培养的3天内采集外周血，采用流式细胞术检测外周血Treg数量，并且将该细胞的数量与病原体的滴度进行相关性分析；另外收集40例志愿者作为对照组。结果：与对照组比较，肺炎组患者的Treg含量明显降低(P0.05)；从自身变化看，第1天的CD8+CD28-含量最低，第2天次之，第3天显著高于前两天(P0.05)。20例患者的病原体依次为：支原体、衣原体、上呼吸道病毒；相关性分析显示Treg数量与支原体感染现在显著相关性(r=-0.783, P0.05)。结论：Treg数量降低在白细胞降低性肺炎发病机制起到重要作用，其含量有助于支原体肺炎的早期诊断。关键词：肺炎；白细胞降低；CD4+CD25+ T细胞；发病机制Role of CD4+CD25+ regulatory T cells (Treg) in the pathogenesis for the pneumonia patients with leucopenia LIN Yan-mei. (Internal Medicine Department of Dalang Hospital, Dongguan 523770, China) Abstract: Background: The blood cells reduce often missed diagnosis and misdiagnosis easily lead to special pathogen pneumonia, and studies have shown that this type of pneumonia and cellular immunological abnormalities are closely related. CD4 + CD25 + T cells (Treg) is one kind has the inhibitory function of regulatory T cells, in certain types of pneumonia in patients with higher expression, but white blood cells reduce pneumonia patients express how Treg and its clinical significance? It is the lack of related research. Objective: To explore the Treg in white blood cells reduce the effect to the pathogenesis of pneumonia. Methods: 40 patients with collection of white blood cells reduce pneumonia, sputum culture in continuous 3 days to collect peripheral blood, using flow cytometry test peripheral blood Treg number, and that the number of cells and pathogens of drop degree correlation analysis; In addition to collect 40 volunteers as control group. Results: Compared with control group, the content of Treg in patients with pneumonia group was obviously decreased (P 0.05); From their own change, 1 day of CD4 + CD25 + most, 2 days, 3 days significantly higher than the previous two days (P 0.05). 20 patients of pathogens in the order: mycoplasma, chlamydia, upper respiratory tract virus; Correlation analysis showed that the correlation between Treg and mycoplasma is the most significant (P 0.05). Conclusion: Decreasing of Treg in white blood cells reduce pneumonia pathogenesis play an important role, its content is help in the early diagnosis of mycoplasma pneumonia.Keywords: pneumonia; White blood cells; CD4 + CD25 + T cells; The pathogenesis 多数肺炎表现为白细胞(WBC)升高，但部分肺炎却表现为WBC正常或降低，从而被漏诊或误诊，这对患者病情预后非常不利。病原体培养是确诊病人的直接方法，但由于培养往往需要较多的时间而耽误病情，痰培养又容易受到痰液标本留取不合理等因素影响1。因此笔者认为，如果有一种可快速协助诊断的方法，则大大提高确诊率。CD4+CD25+T细胞(Treg)是一个具有免疫抑制和免疫下调双重作用的重要T细胞亚群，在多数急慢性炎症的发病机制中起到重要作用2。究竟Treg在白细胞降低性肺炎患者的表达情况如何？目前尚未见临床报道。为此，笔者观察了不同病原体患者外周血Treg特点，发现支原体肺炎患者Treg降低，预示该细胞对病原体感染可能具有鉴别诊断作用，具体如下。1临床资料与方法1.1 一般资料 收集2012年1月至2013年6月我院肺炎患者作为观察对象，符合以下情况者纳入研究标准：具有发热、咳嗽等临床表现，经X-线证实肺部炎症；WBC计数在正常范围内或者低于正常值；排除其他原因引起的发热；无合并其他免疫性疾病；近期无使用激素及其他免疫抑制剂3。按照以上标准共有40例患者纳入观察范围，其中男性23例，女性17例，平均年龄31.829.26岁；选取同期的40名健康体检者作为对照组，男性16例，女性14例，平均年龄32.569.19岁。经检验，两组的性别构成及年龄均无统计学差异。1.2 治疗方法 以上治疗均以经验性治疗为主，在首诊时给予头孢类、喹诺酮类类或红霉素类抗生素，视血象等情况给予病毒唑治疗；以上药物并且连续使用3天，待病原学结果回复则给予针对性治疗，并给予对症处理4。1.3 检测指标在就诊（住院）当日、次日及第三天连续采集以肺炎患者外周静脉血，经肝素抗凝后使用Beckman流式细胞术检测其CD8+CD28-T细胞的百分比；同时比较患者白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞的数量变化5。采集对照组健康人的血标本，检测上述项目并进行比较。1.4 统计学处理定量指标采用(s)表示，两组间定量资料采用t检验；计数资料采用n表示，组间采用c2检验。使用统计软件包SPSS 13.0分析数据，当P0.05代表差异具有统计学差异。2 结果 2.1 两组观察对象的比较与健康对照组比较，肺炎组患者的白细胞计数明显降低，且单核细胞比例同样降低，两者的组间差异具有显著性(P=0.026，0.023)。但两组中性粒细胞及淋巴细胞的比例无组间差异（表1）；流式细胞术结果显示肺炎组患者的Treg频率为(3.891.65)%，显著低于健康对照组的(7.393.52)% (t=-3.124, P=0.013)。表1 两组白细胞及其分类比例的比较(s)分组WBC (G/L)NEU (%)MONO (%)LYM (%)肺炎组4.271.3963.1810.612.680.7135.7217.83健康组6.621.7661.729.375.822.3637.4615.27t-2.3621.892-2.217-2.012P0.0260.0980.0230.0872.2 不同病原菌的动态比较最后痰培养的结果显示：肺炎支原体感染占26例（归入A组），上呼吸道病毒占9例（B组），衣原体占5例（A组）。A、B及C三组的Treg组间比较显示：A组显著低于B及C组(分别为P=0.013，0.021)，且B与C组之间无统计学差异(P=0.083)。对患者进行以上26例支原体肺炎患者进行阿奇霉素治疗，分别在第后第1、2、3天进行外周血采集，检测Treg含量，结果分别为(4.161.92)%、(5.722.16)及(7.213.02)%。通过重复测量方差分析发现，治疗后第1与第2天的Treg含量无显著性差异(P=0.103)，且第2及第3之间亦无统计学差异(P=0.091)，但第3天显著高于第1天(P=0.028)。2.3 相关性分析Pearson相关性分析显示Treg与白细胞及单核细胞比例均呈正相关性(P=0.021及0.032)，但与中性粒细胞及淋巴细胞均呈负相关性(P=0.016及0.021)。图1 Treg的流式细胞图说明：每个图的右上象限代表Treg细胞的频率，点越浓密代表含量越高；越疏代表含量越低。A. 代表健康组的Treg细胞含量（为5.18%）；B、C及D分别代表肺炎组患者治疗后第1、2及3天外周血Treg含量。3 讨论作为T细胞亚群的重要成员，CD4+CD25+ 调节性T细胞(Treg）以表面表达CD4及CD25分子为主，统称为调节性或抑制性T细胞亚群，具有免疫下调作用，其约占外周血及脾脏CD4+T细胞的5%10%6。Treg除表达CD4分子和CD25分子外，其重要特征以分泌细胞因子IL-10及TGF-1为主，后两者是Treg执行免疫下调的重要基础7。国内外研究已发现肺炎患儿的Treg降低8，但成人肺炎患者的Treg表达如何，其与病原体的关系如何？目前尚缺少相关研究。本研究发现，WBC降低的肺炎患者的Treg显著低于健康对照组，这初步说明Treg与WBC降低有关；通过比较A、B及C三组不同病原体感染的肺炎患者外周血Treg频率特点，我们进一步发现病毒性肺炎及衣原体肺炎患者的Treg仍然与对照组无统计学差异，这给我们一个重要预示：在引起WBC降低的常见肺炎病原体当中，Treg对于判断支原体性肺炎具有一定的特异性8，该现象具有相当显著的临床意义：在首次查血常规时，可以进行CD8+CD28-的检测，如果发现其明显升高者，则可以拟诊为支原体肺炎而给予红霉素类抗生素治疗9，这对患者的病情恢复具有重要意义。我们还发现给予阿奇霉素治疗后，分别在第后第1、2、3天进行外周血采集，发现Treg呈进行性升高。通过重复测量方差分析发现治疗第3天显著高于第1天，这说明阿奇霉素起效时间可能在治疗后48小时；若需对病情进行动态评估，建议在治疗后的48h内进行外周血检测。通过本研究我们认为Treg数量降低在白细胞降低性肺炎发病机制起到重要作用，其含量有助于支原体肺炎的早期诊断。本研究还存在一些局限，主要表现在观察的例数不够多，Treg的动态观察时间较短，且除引起白细胞降低的原因还包括支原体、衣原体及病毒等，笔者将在后续的研究加以改进。参考文献1 Fang MT, Yang GL, Chong YT, et al. Study on characteristics of cellular-mediated immune responses of novel H1N1 influenza A patients with pneumoniaJ.Zhonghua Shi Yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi, 2010,24(6):412-414. 2 Shimizu Y, Dobashi K, Endou K, et al. Decreased interstitial FOXP3(+) lymphocytes in usual interstitial pneumonia with discrepancy of CXCL12/CXCR4 axisJ.Int J Immunopathol Pharmacol,2010,23(2):449-461.3 Saito H, Tsurikisawa N, Tsuburai T, et al. The proportion of regulatory T cells in the peripheral blood reflects the relapse or remission status of patients with Churg-Strauss syndromeJ.Int Arch Allergy Immunol,2011,Suppl 1:46-52.4 Liu F, Liu J, Weng D, et al. CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells depletion may attenuate the development of silica-induced lung fibrosis in miceJ.PLoS One,2010,5(11):e15404.5 宋磊,徐明,侯静红,等.肺炎支原体感染患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其临床意义J.标记免疫分析与临床,2011,18(6):356-359.6 Jaffar Z, Ferrini ME, Girtsman TA, et al. Antigen-specific Treg regulate Th17-mediated lung neutrophilic inflammation, B-cell recruitment and polymeric IgA and IgM levels in the airwaysJ.Eur J Immunol,2009,39(12):