梅毒丙肝抗体检测与报告课件

梅毒、丙肝抗体检测与报告,长沙市疾病预防控制中心 2011年4月,梅毒抗体检测与报告,梅毒syphilis 梅毒是苍白（梅毒）螺旋体Treponema pallidum感染人体所引起的一种系统性、慢性经典的性传播疾病，可引起人体多系统多脏器的损害，产生多种多样的临床表现，导致组织破坏、功能失常，甚至危及生命。,流行形势日益严峻 例：1999年报告病例80406例，年发病率为6.50/10万,2009年报告病例327433例，年发病率为24.66/10万，发病率年均增长14.3%。1997年先天梅毒报告病例数为109例,报告发病率为0.53/10万活产数，2009年报告病例数为10757例，报告发病率为64.41/10万活产数，发病率年均增长49.2%。,分类 先天性梅毒 后天性梅毒：期梅毒（24周） 期梅毒（6周6个月） 期梅毒（两年及以上）,常规检测方法：病原学检查 血清学检查 非常规检测方法：PCR 胶体金法 免疫蛋白印迹法 化学发光法等,病原学检查 暗视野显微镜检查金标准 渗出液混于盐水中，暗视野直接镜观察 活体组织检查 常用镀银染色法和荧光抗体染色法 多功能显微诊断仪（MDI） 屏幕线性放大1500020000 倍的高清晰度显微镜，待检查标本不需染色及任何加工处理，直接观察,血清学检查 非梅毒螺旋体抗体血清学试验 VDRL性病研究实验室玻片试验 推荐用于检测脑脊液的方法, 对神经梅毒有重要价值。 USR血清不需加热反应素玻片试验 RPR快速血浆反应素环状卡片试验 均属VDRL 的改良试验, 由于在抗原中加入氯化胆碱和EDT A 等试剂, 使血清不必加热处理既能达到灭活和使抗原保存期延长 TRUST甲苯胺红不加热血清试验,TRUST甲苯胺红不加热血清试验 原理与RPR相同，但以甲胺苯红染料颗粒代替炭颗粒作为指示物。 疗效判断： 3个月1次，或半年1次。早期梅毒滴度下降快，晚期或不变。滴度升高4倍考虑复发。 前带现象：由于抗体的过量使得抗原抗体反应的比例不适宜而出现假阴性反应。 血清固定：某些病人经治疗后血清抗体滴度若干年内保持低滴度阳性反应。（排除神经梅毒）,血清学检查 梅毒螺旋体抗体血清学试验 FTA-ABS荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验 TPHA梅毒螺旋体血凝试验 间接血凝实验 TPPA梅毒螺旋体明胶凝集试验 ELISA酶联免疫吸附法 TPI梅毒螺旋体制动试验 检测血清中是否存在抑制TP活动的特异性抗体 鉴别生物学假阳性,FTA-ABS荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验 方法： 血清灭活（5630min）血清吸收（3730min）血清加抗原片上孵育（3730分）洗涤吹干加荧光抗人抗体孵育（3730min）洗涤吹干封片（碱性甘油）读片 结果：在荧光显微镜下,均匀地发出中等或高强度的苹果绿色荧光为阳性,均匀地发出弱苹果绿色荧光为弱阳性,呈微弱黄色光或观察不到荧光为阴性。 常规方法中检出率最高,TPPA梅毒螺旋体明胶凝集试验 原理：梅毒螺旋体致敏明胶颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应。 前带现象：以定量抗原检测抗体，若抗体过剩，可使所形成的免疫复合物反而减少，而不出现凝集。 如未致敏颗粒出现凝集反应，应进行吸收处理后再进行试验。,ELISA酶联免疫吸附法 采用梅毒螺旋体特异性抗原包被微孔板，用以检测患者血清中的梅毒抗体 对各期梅毒均有较高的敏感性和特异性 其产生的抗体可以长期存在，故ELISA阳性不能确定感染期，也不能用于临床的疗效观察,非常规检测方法 PCR聚合酶链反应 早期梅毒诊断 胶体金法 快速诊断法 化学发光法 可作为梅毒大规模筛选试验 免疫蛋白印迹法 检测特异性Tp-19(s) -IgM 抗体，诊断早期先天性梅毒,PCR聚合酶链反应 荧光PCR 荧光探针标记检测扩增片段，如Tp polA特异性片段 一期梅毒诊断中有极高特异性和敏感性, 可作为一期梅毒早期诊断的依据。 脑脊液FQ-PCR检测,可以快速准确的诊断神经性梅毒。 二期梅毒诊断中，传统血清学法优于荧光定量PCR法。,正确选择梅毒血清学试验程序 先以非梅毒螺旋体抗体血清试验（TRUST等）进行初筛，再以梅毒螺旋体抗体血清试验（TPPA等）进行确认。 同时进行梅毒螺旋体抗体血清试验和非梅毒螺旋体抗体血清试验。 先进行梅毒螺旋体抗体血清试验（ELISA），阳性时再进行非梅毒螺旋体抗体血清试验（TURST等）,可选择用TPPA等确证试验复查。,结果讨论 以TURST、FTA-ABS联合检测为例,梅毒假阳性讨论 生物学假阳性：一般人群13假阳性，滴度1:4 病原学假阳性：人体内共生或条件致病的螺旋体诱导机体产生特异性交叉抗原抗体。 病理性假阳性：怀孕、病毒性肝炎、上呼吸道感染、肺结核、肺炎、亚急性细菌性心内膜炎、类风湿性关节炎、SLE (系统性红斑狼疮) 、风湿性心脏病、干燥综合征、慢性肾炎和海洛因成瘾等 被细菌污染的血液标本：因细菌体内可能含有内源性辣根过氧化物酶, 会对ELISA检测产生非特异性干扰, 造成弱的假阳性结果 老年人梅毒假阳性：可能由于老年人所患的基础性疾病，或因自身免疫环境改变, 诱导机体产生抗类脂抗体或抗梅毒螺旋抗体的交叉抗原。,梅毒假阴性讨论 极早期梅毒（无任何抗梅毒抗体产生） 极晚期梅毒 AIDS病人合并梅毒感染,报告方法 报告梅毒结果时应注明检测方法，若有滴度检测时应注明检测滴度。 只有当梅毒螺旋体抗体血清试验和非梅毒螺旋体抗体血清试验同时为阳性时，才能作为实验室诊断依据。 检测结果应结合临床（现病史、继往史）综合分析。在现有的条件下这一点应给予特别的强调。,丙肝抗体检测与报告,病毒性肝炎 由病毒造成的肝炎按照其病毒系列不同分为甲、乙、丙、丁、戊和庚共六种类型型病毒性肝炎。 丙型病毒性肝炎 丙型病毒性肝炎是由丙型肝炎病毒( HCV) 所引起的一种严重的慢性疾病,可以对肝脏组织进行持续性的破坏。,中国丙型肝炎感染现状 HCV 主要是通过输血或使用血液制品感染。目前世界上约有2 亿人感染丙型肝炎病毒,中国约有3 700 万4 000万，且发病患者数呈逐年上升趋势。 目前还没有丙肝疫苗,HCV病程,肝癌,由于初始症状不明显,丙肝往往容易被忽略，感染者约80 %发展成慢性肝炎,在慢性丙肝感染中,HCV 不仅导致所感染的肝细胞凋亡,也会干扰肝脏免疫细胞的正常功能,从而免于被免疫系统所清除,同时会导致肝脏免疫病理变化,产生纤维化,最终导致肝癌,HCV 感染的检测方法 抗-HCV检测：ELISA酶联免疫吸附试验 抗- HCV金标法 HCV-RNA检测：RT-PCR逆转录-多聚酶链反应 FQ-PCR实时荧光定量多聚酶链反应 非常用HCV检测技术,抗- HCV 检测 ELISA酶联免疫吸附试验 目前常用的抗-HCV检测试剂盒为第三代，含有NS4抗原（c100-3）、核心抗原（c22）、NS3抗原（c33）和NS5抗原，其灵敏度和特异度均更高。 适合于大批量标本的检验。 金标法 快速检测15 min 即可判断结果。 适合于标本量少的基层医院的检验。 注意：抗-HCV可长时间呈阳性,HCV-RNA检测 RT-PCR逆转录-多聚酶链反应 定性检测方法 主要用于确定丙型病毒性肝炎的诊断 仍存在产物污染和需使用有毒化合物溴化乙锭等缺点 FQ-PCR实时荧光定量多聚酶链反应 定量检测方法 主要用于决定是否开始治疗及考察治疗效果,非常用HCV检测技术 RIBA 重组免疫印迹 利用基因重组技术和包被技术,将丙型肝炎病毒的不同重组抗原