液相色谱仪的维护与常见故障.ppt

液相色谱仪的日常维护 与常见故障排除 一 液相色谱仪的 日常维护 储液器 使用hplc试剂/溶剂，含缓 冲盐的流动相过0.45m膜除去 微粒物质;更换流动相时,应彻 底清洗，防止交叉污染。 定期清洁储液器及附件， 防止长微生物。 输液泵 密封垫易损坏引起故障，每天实验结 束一定要认真冲洗泵,注意防止堵塞,使 用缓冲盐流动相时,更要小心。 使用hplc级试剂,注意泵压力不要太 高,要适当调整压力,一般压力上限在10- 20mpa，下限为0.5mpa，注意防止因泵堵 塞造成压力过高损坏柱塞杆或烧坏电机 。 进样器 停机前一定冲洗干净进样 器内残留的样品或缓冲盐，防 止样品和无机盐沉积造成进样 阀转子面磨损或堵塞。 注射器最好使用仪器自配 尖头、平头针，不要用其它仪 器的。 柱防止柱性能下降 1 溶剂的化学腐蚀性不能太强； 2 避免颗粒物在柱头沉降； 3 柱压不能太高，防止冲击太大； 4 流动相ph值小于7时，最好用大粒度同种填料的 予 柱； 5 柱头加滤片（烧结不锈钢), 需要时加保护柱； 6 经常清洗柱； 7 长时间不用时要保存好,一定要洗去缓冲盐,加入 大 于10%有机溶剂，将柱两端拧紧,保持柱填料湿润 。 检测器 保持清洁，每天用后与色谱柱一起 清洗； 不定期用强溶剂反向冲洗检测器； 使用脱过气的流动相，防止气泡滞 留池内； 检测器灯有一定寿命，不用时不开 灯。 记录器数据处理系统 记录仪: 热敏式打印头要注意记录纸的 质量,开机前注意检查走纸部件,不 要卡纸. 色谱工作站: 防止网上病毒损坏软件. 二 常见故障的排除 1、储液器 脱气不充分(噪声大，出毛刺) 用he脱气, 真空脱气, 超声脱气, 加热回馏脱气,(混合流动相不宜 ) 1、储液器 流动相供给不畅，泵压力不稳 流动相接近用完 过滤器堵塞（有颗粒，长霉） 流速过高,阻力大,造成空化现 象.解决的办法是:降低流速;换大 孔过滤器;加大管路内径;抬高储液 器. 1、储液器 储液器或流动相被污染 产生有规则的噪声； 基线上升，梯度洗脱出鬼峰； 原因: 溶剂质量差（含杂质多）； 配流动相的玻璃器皿不合格,微生物 影响； 配制流动相的操作不当（过滤、脱 气、搅拌). 2、输液泵 单向阀 a.球和阀座粘在一起，堵死，打不 出溶剂，(缓冲盐流动相) 用高质量的溶剂冲洗，不同极性 溶剂冲洗,如水、甲醇、异丙醇、 二氯甲烷，更换新单向阀。 2、输液泵 b. 球和阀座密封不严，压力不稳 ，气泡进入阀中，紧贴在阀体内， 使球难以返回阀座，引起倒流，压 力和流速变化大，可能有小晶体颗 粒。 清除气泡的办法：打开排液阀 ，大流量冲洗，用脱过气的甲醇冲 洗，一般可解决问题。 3、进样系统 b. 堵塞, 样品打不进去。 样品管堵塞：环管用反冲法或 超 声清洗排除（或换新管). 手动进样系统 3、进样系统 c. 注样孔 a) 装样时针头周围渗漏：孔道堵 塞，或者放空管和样品管太细，阻 力太大；针头密封管规格不对，针 头太细。 手动进样系统 3、进样系统 c. 注样孔： b)注射孔渗漏：放空管有虹吸现 象，转子密封面上孔之间有磨损。 为防止虹吸,放空管末端应在放空 瓶液面以上,更换磨损的转子. 手动进样系统 3、进样系统 c)样品滞留 阀在进样位置停留时间不够。 要求停留时间至少应让流动相 流过的体积是环体积的10-20倍。 (一般是在下一针进样前才将阀扳 到装样位置) 手动进样系统 3、进样系统 c)样品滞留 残留样品留在样品环中或注射器中 ，或从放空管中虹吸回来,污染下 一个样品.此时可用5-10倍的流动 相或新样品冲洗注射孔和注射器, 若是虹吸,应加限制管。 手动进样系统 3、进样系统 c)样品滞留 管路接头有死体积滞留样品，很难 冲洗干净,此时应检查装配情况， 确定是否需换新配件。 手动进样系统 3、进样系统 a. 样品瓶不配套 瓶小针弯、折断 瓶大样品少，抽不上样 瓶破碎 更换合适的样品瓶。 自动进样系统 3、进样系统 b. 注意样品瓶隔垫，防止污染 。 c. 进样器针头堵塞（样品、缓冲 盐、隔垫碎片、针头本身)， 可用溶剂清洗，金属丝疏通 ， 或换新针头。 自动进样系统 3、进样系统 d. 样品滞留：空白溶剂出色谱峰 . 加倍清洗，或调整样品瓶顺序 ，（从低浓度开始，高浓度放后 面）或在样品瓶前放清洗液瓶 . 自动进样系统 4、色谱柱 1)塔板数下降 a. 样品处理不合适，选择适当的样品净化 方法，选择合适流动相。 b. 柱头塌陷，填装修补。 2)峰形变坏 出现拖尾峰，分叉峰，非高斯峰。 与塔板数下降有关，峰形坏保留时间不变， 可能是柱堵塞(不锈钢烧结片)，或柱头有空 穴。 4、色谱柱 3)柱压突然增大 样品沉积在柱内,用能溶解样品 的 溶剂冲洗（断开柱和检测器）可 正 向冲，反向冲。 柱内硬件有问题： 滤片堵塞，换新片; 塌陷：用相同填料填充、修补。 4、色谱柱 4)保留时间改变 不同柱保留时间的变化,主要是填料 差异造成的,不同牌号柱出峰顺序不变， 保留时间有小的变化。 若峰顺序变化，保留时间变化较大， 应考虑换柱或优化分离条件。 对专门的分析最好用同一批号的柱子 。 由色谱柱引起的故障 故 障现现 象解决办办法 过滤过滤 片堵 塞 压压力增高、n下 降、峰形差 倒柱冲洗或换过滤换过滤 片 柱头头塌陷峰分叉、n下降修补补柱头头 健合相流失 保留值值改变变、峰形 差、n下降 换换柱 样样品堵塞压压力高用能溶解样样品的溶 剂剂冲洗 强吸收样样 品 n下降、保留值值小强溶剂剂反冲 5、检测器 a.灯故障:基线噪声大,灵敏度低, 氘灯寿命:1000h 汞灯和钨灯寿命:2000h 一般使用6个月以上可能接近寿 命期限,可以考虑更换新灯. 紫外可见光检测器 5、检测器 b. 流动池 流动池内有气泡：用脱气甲醇，不同流 量冲洗。 池堵塞（入口、出口、池内）： 用可溶堵塞物的溶剂冲洗 （缓冲盐用 水冲洗） 池污染：异丙醇、二氯甲烷、 6mol/l hno3 冲洗. 紫外可见光检测器 5、检测器 b. 流动池 测量池和参比池失配 uv以空气为参比，一般不扣流动 相本底，若用有紫外吸收的流动相， 参比信号不为零，会出现倒峰和伪 峰。此时，选择合适的流动相。 紫外可见光检测器 5、检测器 c. 时间常数选择：（过滤噪声） 有的仪器有固定的时间常数，有的需设置 时间常数。时间常数太小, 噪声增大;时间常 数 太大,出现宽峰、拖尾或矮峰。 时间常数的设置一般根据经验估计，小颗 粒 柱常数小，可选最窄峰宽的1/10作为时间常数 , 对4.6(150-250)mm，5um柱，可选0.5s or1s 紫外可见光检测器 5 检测器 非线性响应 超出线性范围:样品量太大; 检测器的衰减超出了其线性动 力学范围; 流动相的紫外吸收比较强. 5 检测器 温度影响 环境温度变化引起基线漂移。 流动相温度变化引起折射率改 变，紫外光传导变化。 柱温变化引起基线漂移。 5 检测器 信号线故障 记录仪和数据处理系统信号线插接不 紧,接触不良，信号很弱，出现不需要 的噪音,此时按说明书检查线路连接。 地线对仪器很重要, 仪器外壳和信号 线的接地很严格，接地不良会出现较 大的基线噪声，接错线会造成短路， 烧毁