实验二总糖和还原糖的测定(DNS).doc_第1页
实验二总糖和还原糖的测定(DNS).doc_第2页
实验二总糖和还原糖的测定(DNS).doc_第3页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

实验二 总糖和还原糖的测定 3,5二硝基水杨酸比色法一、目的要求: 掌握还原糖和总糖的测定原理,学习用比色法测定还原糖的方法。二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下,3,5二硝基水杨酸(DNS)与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色,在540nm波长处有最大吸收,在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值呈线性关系,利用比色法可测定样品中的含糖量。三、试剂和器材1、试剂 3,5二硝基水杨酸(DNS)试剂:称取5.0g DNS溶于200ml 2mol/L NaOH溶液中(不适宜用高温促溶),接着加入到酒石酸甲钠的热溶液中(192g就是酸甲钠溶于500ml水中),再加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠,摇匀溶解后,冷却定容至1000ml,暗处保存备用。葡萄糖标准溶液:准确称取在105的温度下烘干至恒重的葡萄糖0.5g,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至1000ml。 6mol/L HCl:取250ml浓HCl(35%38%)用蒸馏水稀释到500ml。 碘碘化钾溶液:称取5g碘,10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 6N NaOH:称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。0.1% 酚酞指示剂:0.1g酚酞溶于100ml无水乙醇中。1淀粉 2、材料淀粉。3、器材 WFJ UV2000型分光光度计,水浴锅,电炉,10ml比色管。四、操作方法 1、葡萄糖标准曲线制作取6支10ml比色管并编号,按下表顺序加入各种试剂。(表1)试 管 号0(空白)12345葡萄糖标准液/ml0.00.10.20.30.40.5蒸馏水/ml0.50.40.30.20.10.0DNS试剂/ml0.50.50.50.50.50.5葡萄糖含量/mg0.00.050.100.150.20.25A540混匀后置沸水浴上加热5min进行显色,取出后用流动水迅速冷却,各加入蒸馏水4.0ml,摇匀,在540nm波长下,用0号管调零,分别读取各管的吸光度值A540。以葡萄糖含量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。 2、淀粉水解及还原糖的提取取1淀粉25ml,放在100ml烧杯中,加入6mol/L HCl 10ml,然后加入蒸馏水15ml,混匀,于沸水浴中保温30min,取出12滴置于白瓷板上,加1滴I2-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全,则不呈现蓝色。水解毕,冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂,以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色,并定容到100ml,从中取10ml于100ml容量瓶中,定容至刻度,混匀,即为稀释1000倍的总糖水解液,用于还原糖测定。 4、样品中含糖量的测定取3支10ml比色管,分别按下表加入试剂:(表2)项 目空白淀粉水解液067样品溶液/ml00.50.5DNS试剂/ml0.50.50.5蒸馏水/ml0.500注:0号管同表1中0号管; 6号、7号为淀粉水解液平行实验。加完试剂后,于沸水浴中加热5min进行显色,取出后用流动水迅速冷却,各加入蒸馏水4.0ml,摇匀,在540nm波长处测定光吸收值。测定后,取样品的光吸收平均值在标准曲线上查出相应的糖量。5、结果处理 按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量: 式中:C还原糖或总糖提取液的浓度,mg/ml;V还原糖或总糖提取液的总体积,ml; m样品重量,g;1000mg换算成g的系数。五、注意事项标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行,一起显色和比

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

评论

0/150

提交评论