植物生理学实验--植物组织中硝态氮含量的定量测定.ppt

植物体内硝态氮含量的测定,教师提前烧水，讲解完内容后打开分光光度计开关 2 学生进教室先做硝态氮提取，后讲解实验内容。,一 测定意义：,1、作为施肥指标： 植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供应情况。包括：硝态氮、亚硝态氮。,2、鉴定蔬菜及其加工品质： 蔬菜类作物特别是叶菜和根菜中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害健康。因此，硝酸盐含量又成为蔬菜及其加工品的重要品质指标。,人体摄入的硝态氮81.2来自蔬菜，当人摄取得硝酸盐量较大时，体内的NO3还原成NO2进入血液，将血液中的血红素变成高铁蛋白，引起肌体中毒。NO2还可以间接与次级胺结合形成强制癌物质亚硝胺。 咸菜的腌制初期咸菜内会大量积累硝酸盐，硝酸盐含量升高数倍或数十倍，当咸菜腌制成熟后硝酸盐含量减少（很低），所以，咸菜没有腌制完成之前，不要食用。 青菜放置时间延长一天，体内的硝酸盐含量会不断增加，购买蔬菜后及时食用，不要放置时间过长，减少硝酸盐的积累。,二 测定原理：水杨酸法,在浓酸条件下，NO3与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。,硝基水杨酸在碱性条件下（pH12）呈黄色，最大吸收峰的波长为410nm，在一定范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。,小白菜：绿叶片、叶柄 两个小组合作，一个小组测叶片，另一个小组测定叶柄。 二者必须是同几株上的材料。,三、实验材料,所用仪器、试剂已备好在实验台上,四、 操作步骤：,C(g/ml)=110.99D410+6.30 (S22P型分光光度计),2样品中硝酸盐的提取和测定,1标准曲线的制作（学生不做）,冲洗残渣，定容,材料剪碎、混匀，精确称取材料2g,3次重复,加无离子水10 ml,沸水浴中提取30min （最好2次，受实验时间的限制，本次实验提取1次）,塞子封口，橡皮筋捆扎在一起,自来水冷却，过滤到25ml容量瓶,同几株小白菜（叶片或叶柄）,硝酸盐的提取,样品液的测定 比色,4支试管,空白试管,3样品试管,加5%水杨酸-硫酸 0.4ml（室温放置20min）,冷却比色（410nm）,加 9.5ml 8% NaOH,加 0.1ml蒸水,各加0.1ml样品液,硝酸盐的测定,式中：C标准方程计算得NO3-N浓度 V提取样品液总量 W样品鲜重,3 结果计算：,NO3-N含量(g/g)=,CV,W,1、实验中使用强酸、强碱，一定要注意安全，防止倒在实验台、地面、仪器内，防止撒到衣物上，如果发生意外及时用水冲洗和擦洗。 2、各个小组使用的试管自己洗刷一遍，防止前一个班使用后洗刷不干净，重复间误差较大。 3、吸取0.1ml的样品液一定要准确，溶液加到底部，否则影响到结果的重复性。 4、两组合作进行不同部位的测定，比色测定时必须用同一台分光光度计。,注意事项,5、分光光度计：倒液不超过比色杯2/3；推拉杆要轻避免液体溅出；比色杯用擦镜纸擦净；用完后及时洗净。 6、加水杨酸浓硫酸时，在瓷盘中加，不要滴到外面。若滴出，尽快用水冲洗擦净。加完浓硫酸的移液管立即冲洗，放回试管架。 7、废液（因含浓酸、碱）倒在专门收集容器内，切勿倒入水池内！,8、测定结束后，将试管彻底洗刷干净（因含强碱），倒置在试管架上。 9、值日生负责注意清理分光光度计、比色皿、台面的清洗。,光照能促进硝酸盐还原过程 光下植物通过光合作用合成的糖流出叶绿体后，经糖酵解产生NADH而用于NO3- 还原。 光能促进底物对NR的诱导，在一定范围内，NR活力随光强的增加而升高，光下生长的植物体内NR水平要比暗中生长的高得多。 光合作用光反应中形成的