第六章_体液葡萄糖检验.ppt

2009.02,第六章 体液葡萄糖检验,第一节 糖代谢及调节,血糖的概念,血糖是指血液中的糖,正常人血液中的糖主要是葡萄糖, 且测定血糖的方法也主要是检测葡萄糖,血糖是指血液中 的葡萄糖。 参考值:3.9 - 6.1mmol/l,（一）、血糖的来源与去路,胃 肠,肝脏,血 糖 3.9-6.1 mmol/l,肾,消化,吸收,肝糖元分解,糖异生,其他单糖转化,组织摄取,有氧氧化,无氧酵解,合成糖元,转化成脂类,氨基酸和其他 糖类或衍生物,供能,合成,转化,糖尿,超过肾糖阀8.9mmol/l,来 源,去 路,（二）、血糖浓度的调节,神经系统的调节作用 激素的调节作用 肝脏在糖代谢调节中的作用,神经系统,激 素,肝 脏 肌 肉 脂肪等 组织,酶活性改变,神经调节,部位 1、下丘脑 2、自主神经（交感和副交感神经） 方式： 1、直接作用于肝脏； 2、调节激素的分泌而影响血糖。,激素调节胰岛素,是一种胰岛细胞分泌的蛋白质激素 降低血糖浓度的激素 胰岛素 胰岛素样生长因子 升高血糖浓度的激素 胰高血糖素 肾上腺素 生长激素 皮质醇 甲状腺激素,肝脏调节,转运调控：肝细胞膜g 载体可允许g 快速转运，达到平衡时，肝内外g 浓度几乎相等。 酶的双向调控功能途径：从器官水平通过神经-激素的作用，使肝细胞内各种糖代谢的酶活性改变。 升糖调节1：具有活性很高的葡萄糖-6-磷酸酶，可促进肝糖原水解， 补充和升高血糖。 升糖调节2：肝脏具有活性高且易诱导的糖异生酶类，禁食或饥饿时能将非糖物质转化为糖（占55-90%）。 降糖调节：促进组织摄取葡萄糖，促进肝糖原合成、抑制肝糖原分解、抑制糖异生。,（三）糖代谢紊乱,糖尿病是一组由于胰岛素分泌不足或/和胰岛素作用低下而引起的代谢性疾病，其特征是高血糖症。 糖尿病的长期高血糖将导致多种器官的损害、功能紊乱和衰竭，尤其是眼、肾、神经、心脏和血管系统。,尿糖：若血糖浓度高于肾糖阈值9.0mmol/l，即超过了肾小球滤过率，出现尿糖。,代谢紊乱症候群,典型症状： “三多一少” 疲乏无力,多尿 多饮 多食 体重减轻,临 床 表 现,多 食,多 尿,皮肤干燥,饥 饿,视力下降,疲 倦,临 床 表 现,糖尿病的分型,（根据2001年who“糖尿病专家委员会”关于糖尿病分类的规定）,1 型糖尿病,2 型糖尿病,其他特殊类型的糖尿病,妊娠期糖尿病,糖尿病的病因学分类（2001年）,1型糖尿病 细胞破坏，导致胰岛素绝对不足 - 自身免疫性（占80%以上） - 特发性 2型糖尿病 - 胰岛素抵抗伴胰岛素分泌不足 - 胰岛素分泌不足伴/不伴胰岛素抵抗 - 特殊类型的糖尿病,1型和2型糖尿病的特点的比较,糖尿病的病因学分类（2001年）,特殊型糖尿病 细胞功能基因异常 胰岛素作用基因异常 胰腺外分泌疾病 内分泌疾病 药物或化学制剂所致 感染 免疫介导的罕见类型 可能伴有糖尿病的其他遗传综合征,妊娠期糖尿病(gdm)是指在妊娠期间任何程度的糖耐量减退或糖尿病发作，不论是否使用胰岛素治疗，也不论分娩后这一情况是否持续。 但糖尿病伴妊娠者不属此组。 在分娩6周后，均应按复查的血糖水平和糖尿病诊断 标准重新确定为： 糖尿病； 空腹血糖损伤（ifg）； 糖耐量减退（igt）； 正常血糖。 其中多数gdm妇女在分娩后血糖可恢复正常。,妊娠期糖尿病,糖尿病的诊断标准（2001年）,二、血糖的测定方法及评价,标本的采集及处理 1.标本类型： 全血glu血浆glu浓度10-15% 静脉glu动脉glu7% 毛细血管glu=静脉glu（空腹），进食后则不一致 建议：测定静脉血浆葡萄糖较为方便可靠,标本的采集及处理,2.采集时间、部位 可取空腹血，餐后2小时血，或随机血， 但意义不同。 对于住院病人尤其要注意采集部位,标本的采集及处理,3.标本处理 静脉血+2mg/ml草酸钾（edta或肝素）（抗凝） +2-5mg氟化钠/ml血（阻止糖酵解） 新鲜采集的全血室温下最初酵解7%，以后的酵解则减慢，有白细胞增多或细菌时酵解增加。 分离出的血清，25下稳定8小时，4下稳定72小时。 建议：无防腐剂的全血必须在1小时内分离出血清或血浆，并及时测定。,使用不同的标本应采用不同的参考值,测定方法,1.氧化还原法(化学法) 原理：葡萄糖的还原性而建立 例如：铜还原法 缺点：灵敏度差、特异性性差，易被干扰，现已被淘汰。 2.缩合法 原理：在热酸性溶液中，葡萄糖的醛基与芳香伯胺的氨基反应生成糖基 胺，后者脱水生成蓝绿色希夫氏碱的衍生物，在630nm有最大吸收峰，其 吸光度大小与葡萄糖含量成正比，故可用于葡萄糖的定性分析。 例如：邻甲苯胺法、联苯胺法、氨基联苯法等 缺点：强酸溶液具有腐蚀性，芳香伯胺具有致癌性，故已少用。 3.酶法 原理：利用酶促反应专一性高、反应速度快等特点建立的血糖定性分析方法。 例如：己糖激酶法（昂贵，少用）、葡萄糖氧化酶法 优点: 操作简单、试剂价廉，现被临检中心推荐。,酶法,1.己糖激酶法（法） 原理： 葡萄糖atp 葡萄糖-磷酸adp 葡萄糖-6-磷酸nadp g-6-pd -磷酸葡萄糖内酯+nadph +h+ nadph在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比。 2.葡萄糖氧化酶法(god) 原理： 葡萄糖o2 god 葡萄糖酸内酯2o2 （1）氧速率法 （2）葡萄糖氧化酶偶联比色法 22o2 + 4-氨基安替比林+酚 pod 红色醌类化合物 + 2o +o2 评价：操作简单，特异性较高，是血糖测定的首选方法但溶血、 gsh、vc、胆红 素，gsh可引起测定结果负偏差。,第二节 血清葡萄糖测定,【原理】,葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， god) 利用氧和水 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶 (pod) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧， 并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌 类化合物，即 trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与 葡萄糖含量成正比。,葡萄糖氧化酶法,葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖,试剂组成: 10.1mol/l磷酸盐缓冲液(ph7.0) 2酶试剂 3酚溶液 4. 酶酚混合试剂 512mmol/l苯甲酸溶液 65mmol/l葡萄糖标准液 7. 100mmol/l 葡萄糖标准贮存液,操作步骤 1 自动分析法 按仪器说明书的要求进行测定。 2 手工操作法取试管 3 支，按下表操作。,混匀，置37水浴中，保温15min，在波长505nm处比色， 以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。,【计算】,【参考范围】 空腹血清葡萄糖为 3.89 6.11mmol/l 。,【临床意义】,1 生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 病理性高血糖 (1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。 (2) 内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进。引 起的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。注意升高血糖的激素 增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。 (3) 颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等。 (4) 脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3 生理性低血糖 见于饥饿和剧烈运动。 4 病理性低血糖 ( 特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性、肝源性、 胰岛素瘤等 ) (1) 胰岛 细胞增生或胰岛 细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。 (2) 对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退、肾上腺皮质功能减退和 甲状腺功能减退而使生长素、肾上腺皮质激素分泌减少。 (3) 严重肝病患者，由于肝脏储存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调 节血糖。,葡萄糖氧化酶法,注意事项 溶血标本血红蛋白的浓度达10g/l，黄疽标本胆红素浓度达342mol /l，维生素c小于30mg/l，均不影响测定结果。 氟化钠浓度达2g/l不干扰测定结果。 标本中含尿素浓度达46.7mmol/l，尿酸浓度达2.95mmol/l，肌酐浓度达4.42mmol/l。半胱氨酸浓度达3.30mmol/l，甘油三酯浓度达5.6mmol/l，胆固醇4.40 mmol/l，对测定结果均无显著影响。,葡萄糖氧化酶法,方法评价: 本法测定葡萄糖非常特异，从原理反应式中可知第一步是特异反应，第二步特异性较差。误差往往发生在反应的第二步。 一些还原性物质如尿酸、维生素c、胆红素和谷胱甘肽等，可与色原性物质竞争过氧化氢，从而消耗反应过程中所产生的过氧化氢，产生竞争性抑制，使测定结果偏低。,第三节 葡萄糖耐量试验,概念 适应证 操作方法 临床意义,糖耐量试验,概念 耐糖现象、糖耐量增加、糖耐量降低 糖耐量试验：口服或注射一定量葡萄糖后，每间隔一定时 间测定血糖水平，称为糖耐量试验。（gtt）,口服葡萄糖耐量试验（ogtt） 静脉葡萄糖耐量试（igtt）,适应症,（1）空腹血糖浓度在6.17.0mmol/l且疑为糖尿病患者 （2）诊断为妊娠性dm （3）诊断糖耐量减退 （4）临床上出现肾病、神经病变和视网膜病而又无法作出 合理解释者。,操作方法,（1）病人准备： a.正常饮食，正常活动，试验前3天，每日饮食含糖不低于150g。 b.试验前三天停服影响糖代谢的药物（咖啡因、速尿、氟哌啶）。 c.试验前应空腹1016h。 d.试验前和试验中，病人精神和身体都处于休息状态。 e.整个试验期间，不可吸烟、喝咖啡和进食等。,（2）葡萄糖负荷量,成人将75g葡萄糖溶于250ml的温开水中，于5min内饮入；妊娠妇女用量为100g；儿童按1.75g/kg体重给予，最大量不超过75g,同样于5min内服完。,（3）标本的收集,试者在服糖前静脉抽血测空腹血糖。服糖后，每隔30min抽血样一次，共4次。若疑为反应性低血糖症的病例，可酌情延长抽血时间（口服法延长至6h）。于抽血同时，每隔1h留取尿液作尿糖试验。,（4）参考值,空腹血糖6.1mmol；服糖后3060分钟血糖升高达峰值， 一般10mmol；服糖后小时内恢复至空腹血糖水平。 同时测定上述各时间的尿糖均为阴性。,临床意义,（1）糖尿病性糖耐量,a.空腹血浆葡萄糖浓度7.0mmol/l b.葡萄糖峰值超过11.1mmol/l；尿糖（） c.延迟（2h以后）回复到空腹水平。 此时重要的判断指标是服糖后2h血糖浓度仍然高于空腹水平。 dm患者糖耐量曲线的最大特征是耐糖曲线延迟恢复到空腹水平。,（2）耐量增高型,其特点:为空腹血糖浓度正常或低于正常。服糖后，血糖浓度在整个试验期间变化不大，不见血糖浓度以正常形式增高，呈平坦型耐量曲线。 可见于:粘液性水肿、肾上腺皮质功能减退、垂体功能减退、胃排空延迟以及小肠吸收不良等。,（3）肾性糖尿,由肾小管重吸收功能降低，肾糖阈下降，致肾小球滤过液中正常浓度的葡萄糖不能完全重吸收，由此出现糖尿称肾性糖尿,第四节 糖化血红蛋白测定,糖化蛋白的测定,测定糖化蛋白可为较长时间段的血糖浓度提供回顾性评估，而不受短期血糖浓度波动的影响。因此，糖化蛋白浓度主要用于评估血糖控制效果，并不用于糖尿病的诊断。,ghb的形成,糖化血红蛋白（glycated hemoglobin,ghb）：在红细胞生存期间，hba与血中已糖（主要是葡萄糖）缓慢、连续的非酶促反应产物，为hba合成后化学修饰的结果。 形成特征： 形成是不可逆的。 浓度与红细胞寿命(120天)和该时期内血糖 平均浓度有关。,糖化血红蛋白,（四）糖化蛋白测定,hba1a1 * hba(90%) hba1a hba1a2 * hb hba1(7%) hba1b hba2(2.5%) hba1c *为主 hbf,1、糖化血红蛋白a1,糖化血红蛋白a1为血红蛋白中2条链n端的缬氨酸与葡萄糖非酶化结合而成,其量与血糖浓度呈正相关,且为不可逆反应.,多种方法可用于ghb的测定： 根据电荷差异，可用离子交换层析，高效液相色谱，常规电泳和等电聚焦电泳等方法： 根据结构差异，可用亲和层析和免疫测定法； 基于化学分析技术，可用比色法和分光光度法。无管什么方法，结果都表示为ghb占总hb的百分比。 其中，化学分析技术已经使用很少。其他大多数方法都有良好的精密度，但存在测定组分上的差异。从简便实用出发，临床上常以hb a1反映总的ghb水平。,ghb测定方法,层析法 阳离子树脂交换层析法*：常规方法，精密度高、操作简便、受hbf正干扰；ghb 5-8% 亲和层析：常规方法，灵敏度高、操作简便、高度特异、干扰少；ghb 5-8%、ghba1 3-6% hplc：参考方法,ghb测定方法,电泳 琼脂糖凝胶电泳：快速、简便易行，受hbf正干扰 等电聚焦电泳 比色法 化学比色法 免疫透射比浊法*,ghb的参考范围,临床意义：,、hb反映测定前周内血糖的平均水平， 故可作为糖尿病长期控制的良好指标。 、可鉴别糖尿病性高血糖及应激性高血糖，前者 hb水平多增高，后者正常。,第五节 血清糖化清蛋白测定,糖化血清白蛋白(gsp),形成机制与糖化血红蛋白相似，蛋白质的糖化主要发生在赖氨酸的-氨基上，糖化的白蛋白和其他蛋白质即称为果糖胺。,gsp测定方法,层析法：柱层析、亲和层析 比色法：,临床意义： 血清白蛋白比血红蛋白半衰期短，约为19天，测定alb可有效反映患者过去23周内平均血糖水平，是糖尿病近期控制的一个指标。,第六节 其他体液葡萄糖测定,一、尿液葡萄糖 （1）