药物分析维生素课件

,维生素类药物的分析,概 述,维生素A,维生素D,维生素E,维生素B1,维生素C,练习与思考,返回主目录,基本要求,基 本 要 求,一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。 二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。 三、掌握三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法。 四、掌握维生素D的HPLC含量测定法和维生素E的GC含量测定法。 五、掌握维生素B1非水溶液滴定法与维生素C碘量法的测定原理、方法与注意事项。 六、熟悉本类药物其他的含量测定方法。 七、熟悉本类药物杂质检查方法。 八、了解维生素A三点校正法的推导过程。,返 回,概 述,维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。 人体不能合成维生素。,VitA、D2、D3、 E、K1 等,脂溶性,水溶性,VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。,分类,按溶解度分,返 回,-H 维生素A醇 -COCH3 维生素A醋酸酯 -COC15H31 维生素A棕榈酸酯,R :,第一节 维生素A,为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯,（一）,具有UV吸收,存在多种立体异构化合物,VitA2,VitA3,易发生脱氢、脱水、聚合反应,鲸醇,或有金属离子存在时氧化,环氧化物,VitA醛,VitA酸,条件 无水无醇,CHCl3,蓝色,紫红,（BP（2000）,max为326nm 一个吸收峰,max为350390nm 三个吸收峰,去水VitA（VitA3）,VitA,USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值,BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑,立体异构体 氧化降解产物 合成中间体,UV法,（一）,维生素A2 维生素A3 环氧化物 维生素A醛 维生素A酸,三点校正法（法定方法） 1. 原理： （1）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。,2. 波长的选择： （1） 1 VitA的max（328nm） （2） 2 3 分别在1的两侧各选一点,测定对象 VitA醋酸酯,= 12nm,测定对象 VitA醇,1=325nm, 2=310nm, 3=334nm,测定法 （1）基本步骤: 第一步 A的选择 选择依据： 所选A值中杂质的干扰已基本消除,注意： C 为混合样品的浓度,第二步 求,第三步 求效价,换算因数由纯品计算而得：,第四步：求标示量,方法：,（2）,第一法,维生素A醋酸酯,判断 是否在326329nm之间,在326329nm之间,改用第二法,是,否,求算 并与规定值比较,规定值 差值,判断差值是否超过规定值的,有一个以上超过,无超过,计算 A328（校正）,用A328计算,第二法,第二法,讨 论,VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导而来；VA醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或称6/7定位法）推导而来。 在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。在测定前务必要校正波长。测定的样品应不得少于两份。,VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.07985g/丸）的内容物 0.1287g 至10ml烧杯中，加环己烷溶解并定量转移至50ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一50 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为,A300 ：0.374 A316 ：0.592 A328 ：0.663 A340 ：0.553 A360 ：0.228,A300 /A328 ：0.564 A316/A328 ：0.893 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.834 A360/A328 ：0.344,求本品中维生素A占标示量的百分含量？,A300 /A328 ：0.564 A316/A328 ：0.893 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.834 A360/A328 ：0.344,0.555 0.907 1.000 0.811 0.299,+ 0.01 0.01 0 + 0.02 + 0.04, ,= = = = =,A328(校正) = 3.52 ( 2A328 - A316 - A340 ) =3.52 ( 20.663 0.592 0.553 ) =0.637,适用于维生素A醇,（等吸收比法）,第一法无法消除杂质干扰时用此法, 皂化法、6/7A法 ,（3）第二法,水溶性,脂溶性,判断max是否在323327nm之间,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,是,否,判断 A300 /A325 是否大于0.73,是,否,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算A325(校正),0,3%,3%,三氯化锑比色法,（二）,优点 简便 快速,max 618nm620nm,标准曲线法,（二）,返 回,第二节 维生素D,维生素D2,一、结构与性质,维生素D3,开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。,手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。,多烯：可进行紫外检测。,二、鉴别试验,1. 显色反应,三氯化锑反应 橙红色渐变粉红,三氯化铁反应 橙黄色,二氯丙醇和乙酰氯反应 绿色,2. 比旋度鉴别,维生素D2,维生素D3,溶 剂,浓 度,比旋度值,无水乙醇,无水乙醇,40mg/ml,5mg/ml,+102.5+107.5,+105+112,注意事项：应于容器开启30分钟内取样， 在溶液配制后30分钟内测定。,3.区别反应： 以96%乙醇为溶剂，加乙醇和85%硫酸，D2 显红色，在570nm处有最大吸收，D3显黄色， 在495nm处有最大吸收。,4.其他方法： TLC、HPLC、制备衍生物测熔点,三、杂质检查,维生素D2中麦角甾醇的检查：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置18h不得发生浑浊或沉淀。,前维生素D的光照产物,四、含量测定方法,中国药典（2000年版）采用正相高效液相色谱法测定维生素D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为三个方法。 固定相：硅胶 流动相：正己烷-正戊醇（997：3）,第一法：用于无维生素A醇及其它杂质的干扰的情况，步骤如下： 1系统适用性试验：测定重复性和分离度。,2测定校正因子： A S /m S f1 = - A r /m r f2 =（A S m r- f1 m S A r1）/（A r1 m S）,3含量测定： mi=（f1 Ai1+ f 2 A i2）m S /A S,第二法：用于有杂质的干扰的情况，步骤如下： 1皂化处理：皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙 醚、制备供试液A。 2净化：供试液A经液相色谱分离，准确收集含有维 生素D及前维生素D混合物的全部流出液，制 备成供试液B。 固定相：ODS 流动相：甲醇-乙腈-水（50：50：2） 3含量测定：取供试液B按第一法测定。,第三法：用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如下： 1制备供试液：取供试液A，净化，水浴加热，得供 试液C。 制备对照液：对照品储备液：稀释、加热。 2含量测定：在第一法的色谱条件下，交替精密进样 对照液和供试液，按外标法定量。,返 回,苯并二氢吡喃醇,第三节 维生素E,*,*,*,dl生育酚醋酸酯,苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链,1、UV,2、乙酰化的酚羟基 易水解,緘,緘,緘,瑌,醌型化合物,杂质，需检查,緘,生育红,（一）,硝酸反应,橙红色,（橙红色）,生育红,生育酚,HNO3,强氧化剂,生育酚,对-生育醌,弱氧化剂,血红色,= 41.045.5,max = 284nm,min = 254nm,0.01%无水乙醇中,UV法,（三）,薄层板 硅胶G,展开剂 环己烷 -乙醚（4 ：1）,显色剂 硫酸（105 5）,VitE Rf = 0.7 -生育酚 Rf = 0.5 -生育醌 Rf = 0.9,TLC法,（四）,2. 游离生育酚,杂质检查,三、,原理,酸度 以NaOH滴定液（0.1mol/L）体积控制。,（M生育酚= 430.8）,例,取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。,2.15,限量,GC法（法定方法）,（一）,GC特点,1、,选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制,载气N2 固定液硅酮（OV-17） 担体硅藻土或高分子多孔小球 柱温265 检测器氢火焰离子化检测器(FID) 内标正三十二烷 n 500 R2,内标法加校正因子,内标法,供试液（样品+内标）,内标物,对照液（对照+内标）,是样品中不存在的物质 与被测组分峰靠近 能与各组分完全分离 与被测组分的量接近,校正因子：,W,W,K,K,%,VitE,1,2,=,稀释倍数,稀释倍数,样,对,实际工作中的计算方法,（二）HPLC法 外标法 此外，还有铈量法、比色法和荧光法,返 回,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),第四节 维生素B1,HCl,Cl-,（一）,溶解性,1、易溶于水,2、水溶液呈酸性,（二）,UV,共轭双键,max = 246nm,与生物碱,（三）,硫色素反应,（四）,（五）盐酸根 呈氯化物的反应，用于鉴别。,ChP,硫色素,2H,VitB1,H+,H+,H+,H+,S元素反应,Cl-反应,喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）,反应摩尔比为1：2,UV法,（二）,片剂、注射剂,= 421,（每片）相当于标示量的%=,A = ECL,规格 g/片,g/100ml,g,ChP,（每ml）相当于标示量的%=,规格 g/ml,ml,畗,（1）灵敏度高，线性范围宽 （2）代谢产物不干扰，适用于 体液分析,第五节 维生素C,L抗坏血酸,二烯醇结构,二酮基结构,二烯醇结构,有活性,有活性,无活性,糖类的显色反应,50,结构与糖类相似,C3OH的 pKa = 4.17,C2OH的 pKa = 11.57,一元酸,L(+)抗坏血酸 活性最强,手性C（C4、C5）,*,*,与碱反应,1、与AgNO3反应,2、与2，6 - 二氯靛酚反应,(ChP2000),氧化型,玫瑰红色,(ChP2000),（玫瑰色）,（无色）,3.其他氧化剂的反应： 亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色 碱性酒石酸铜 砖红色沉淀 磷钼酸 钼蓝,或盐酸,50,吡咯,USP,（蓝色）,(糠醛),（戊糖）,BP,0.01mol/L HCl,三、杂质检查,1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质 分光光度法 2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法,指示剂 淀粉指示液,H+,取本品约0.2g，精密称定，加新 沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶 解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴 定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝 色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液 (0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6,（1）酸性环境 d . HCl,（2）新沸冷H2O,减慢VitC被O2氧化速度,（3）立即滴定,赶走水中O2,减少O2的干扰,（4）附加剂干扰的排除,片剂 滑石粉 过滤,USP,JP,（2）快速滴定 2min内,（1）酸性环境 HPO3-HAc,稳定VitC,防止其他还原性物质干扰,（3）剩余比色测定,（定量过量）,（测剩余染料）,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,干扰多 氧化力较强,公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来 的维A。 1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。 1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。 1831年-胡萝卜素被发现。 1905年-甲状腺肿大被碘治愈。 1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。 1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的 1916年-维生素B被分离出来。 1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是 缺乏维D引起的。,1920年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素A。 1922年-维E被发现。 1928年-科学家发现维B至少有两种类型。 1933年-维E首次用于治疗。 1948年-大剂量维C用于治疗炎症。 1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症。 1954年-自由基与人体老化的关系被揭开。 1957年-Q10多酶被发现。 1969年-体内超级抗氧化酶被发现。 1970年-维C被用于治疗感冒。 1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的研究结果。,返 回,练习与思考,A型题,1. 维生素B1的鉴别方法是 A.三氯化铁反应 B. 硫色素反应 C. 柯柏反应 D.与碱性酒石酸铜试液反应 E. 双缩脲反应,2. 维生素E中国药典