FISH技术临床应用.ppt

fish技术的临床应用,中南大学湘雅医院血研室,荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，fish）,基本原理：应用荧光染料标记探针dna，变性成单链后与变性后的染色体或细胞核靶dna杂交，在荧光显微镜下观察并记录结果。,生命科学中的“钓鱼” 技术,操作流程简图,制片,预处理,fish,结果分析,破坏细胞膜利于探针 杂交。 蛋白酶消化、hcl处理,变性 杂交 洗涤 复染,制备的质量 新鲜程度,操作流程简图,标本为新鲜细胞制片： 阈值建立 采集20例正常人细胞。 阈值测定：每例分析至少100个细胞，统计出现2个以上阳性信号细胞数目的百分比。 阈值= 平均数（m）+ 3x标准差（sd） 结果判断 每例样本随机计数细胞（至少100个） 如果检测值阈值，判定为阳性结果； 如果检测值阈值，判定为阴性结果； 如果检测值=阈值，加大观测样本细胞数目。,结 果 判 断,fish在血液及淋巴肿瘤中的应用 fish技术在产前诊断中的应用 fish在泌尿系肿瘤中的应用 fish技术在宫颈癌检测中的应用 其它,fish技术的临床应用,fish在血液及淋巴肿瘤中的应用,赵荣 骨髓象(cml),赵荣 血象 （cml）,覃长江血象(md/mpd),覃长江骨髓象 (md/mpd),bcr/abl阴性 (图片来自覃长江) md/mpd,bcr/abl阳性 (图片来自赵荣) cml,陆晓逸骨髓象（cll）,d13s25/p53基因阴性 （来自陆晓逸）,csp12基因阴性 （来自陆晓逸）,pml/rara阳性 (图片来自卜丽敏),pml/rara阴性 (图片来自彭志新),卜丽敏骨髓象,fish技术在产前诊断中的应用,染色体异常的发生机率,出生婴儿 0.6% 先天性智力障碍（mr）患者 23% 先天性心脏病 13% sab 夫妇 5% 死胎和 围产期死亡胎儿 6.0% 自然流产 (前三个月) 60%,唐氏综合症,21号染色体三体, 95-97% 多余的染色体来自母亲, 唐氏综合症与母亲的年龄有关系, 确切的病因不是很了解. 活产新生儿发病率为1 /800 to 1 /1,100 , 唐氏综合症与文化、种族、社会阶层以及地理区域都没有必然的联系。 智能较正常儿童低，认知困难，发育迟缓。他们也有很特殊的面貌，通常双眼距离较远、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齿及耳朵均细小。肌张力低。,turner 综合症,1个x染色体的全部或者部分丢失 ，只发生在女性。 是最常见的染色体异常导致的疾病 ( 活产女性新生儿发病率大约为 1 / 2500 ) 身材矮小、卵巢不发育、性幼稚、 蹼颈、 肾脏和甲状腺有问题, 骨骼畸形等 生长激素治疗, 雌激素替代治疗等,21+,13+,glp13/glp21阴性,fish在泌尿系肿瘤中的应用,常用诊断及监测膀胱癌 膀胱镜检查：病人痛苦，难以接受 细胞形态学检测：敏感性低 尿液中抗原检测：虽灵敏性高于细胞形态学检测，但特异性较低，不能成为可靠的诊断指标。,概 述,fish检测： 9号染色体部分（如p16位点）或全部丢失。 3号、7号及17号染色体的非整倍性。 膀胱癌的灵敏度大约 80%, 特异性大约 96% 非创伤性及非痛苦性,概 述,膀胱癌fish 探针组(一),膀胱癌fish 探针组(二),csp 7/csp3阴性 csp7/csp3阳性,fish技术在宫颈癌检测中的应用,传统巴氏细胞学涂片&液基薄层细胞检测(tct） hpv病毒检测 荧光原位杂交（fish）检测,临床检测方法,三种检测方法比较,terc（人类染色体末端酶 ）基因定位在3q26.3 ，该基因的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生 宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌转变的过程中几乎都伴有3号染色体长臂扩增。其中，涉及到的最重要的基因可能是terc基因。该基因扩增能准确区分宫颈细胞高度癌前病变与低度癌前发育异常，鉴别诊断的敏感性及特异性均在90%以上；同时，这一扩增也能预测52%96%的癌前病变有恶变的可能 hterc基因扩增