课件：病原肠道杆菌.pptVIP

第9章 肠道杆菌,2019,1,学习要求,1）掌握：致病性大肠埃希菌及其所致疾病；志贺菌属的致病性；沙门菌属的致病性与免疫性；肠道杆菌与微生物学分离鉴定有关的生物学特性。 2）熟悉：肠杆菌科的共同特性；埃希菌属、志贺菌属和沙门菌属的微生物学检查步骤；肥达试验。 3）了解大肠埃希菌的微生物学检查及防治原则；志贺菌和沙门菌的防治原则；沙门菌分类；其他肠道细菌。,2019,-,2,肠道杆菌是一大群寄居在人类和动物肠道内，生物学性状相似的G-杆菌。 肠道杆菌种类很多，其中与医学关系密切的有埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、变形杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属等； 大多数为肠道正常菌群,可成为条件致病菌，引起肠道外感染；少数为致病菌，导致肠道传染病。,概 述,2019,-,3,乳糖发酵试验,共同特性(了解),1、相似的形态染色多数有鞭毛，G- 杆菌,2、简单的培养条件：普通培养基中即可生长,3、活泼的生化反应,重要试验（掌握）,初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌,肠道致病菌,肠道非致病菌,多数不发酵乳糖,多数发酵乳糖,2019,-,4,EMB（伊红美兰培养基），乳糖、伊红、美兰,2019,-,5,EMB平板上的E.coli,2019,-,6,SS培养基（沙门志贺培养基） 乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等抑制剂,2019,-,7,2019,-,8,4、抗原构造复杂,鞭毛抗原（H） H-O变异,菌体抗原（O） LPS的特异性多糖， S-R变异,K或Vi抗原侵袭力,2019,-,9,5、抵抗力,不强，6030min死亡，对一般消毒剂敏感,6、易变异,溶源性转换（前噬菌体）,生化反应性变异,通过,引起,耐药性变异,毒力性变异,转导（温和噬菌体）,接合(性菌毛）,2019,-,10,第一节 埃希氏菌属 Escherichia,代表株：大肠埃希菌（大肠杆菌，E.coli） 1. 肠道中正常菌群，出生后数小时就进入肠道，并终生伴。 2. 可成为条件致病菌，致肠道外感染 3. 某些血清型有致病性，导致感染性腹泻 4. 环境卫生和食品卫生中，常用作粪便污染的检测指标。 5. 分子生物学和基因工程研究中重要的实验材料,2019,-,11,一、生物学性状,革兰阴性杆菌，有周身鞭毛，菌毛。 3724h 圆形凸起灰白色S型菌落 发酵多种糖类，发酵乳糖 产酸产气，IMViC试验为+ + - -,2019,-,12, EMB平板 紫黑色有金属光泽 SS平板 红色菌落 大肠杆菌血清型以O：K：H表示 抵抗力：胆盐、煌绿有抑制作用 对氯霉素、庆大霉素敏感,2019,-,13,二、致病性,（一）致病因素 1、黏附素（定植因子）：菌毛 1个A亚单位（ATPcAMP) LT 2、肠毒素： 5个B亚单位(结合单位） ST （cGMP) 3、Vero毒素：志贺样毒素，分 4、溶血素 5、LPS、K 抗原,2019,-,14,1、条件致病化脓性炎症,某些带有致病基因的血清型，引起肠道感染，表现为急性腹泻，包括产毒性侵袭性 致病性 出血性 集聚性大肠杆菌,细菌居住部位改变引起的肠外感染：尿路感染最常见，腹膜炎、败血症、脑膜炎,2、致病菌株胃肠炎,（二）所致疾病（掌握）,2019,-,15,菌株 作用部位 所致疾病 致病机理,ETEC,小肠,旅行者和 婴幼儿腹泻,ST,、,LT,EPEC,小肠,婴儿腹泻,粘附和破坏上皮细胞,EIEC,大肠,痢疾样腹泻,侵袭和破坏结肠粘膜,EHEC,大肠,出血性结肠炎,V,ero,毒素(O157:H7),致病性大肠杆菌引起的腹泻（掌握）,EAEC 小肠 婴儿腹泻 集聚性粘附上皮细胞 阻止液体吸收,2019,-,16,肠产毒型大肠埃希菌 (enterotoxigenic E.coli， ETEC),婴幼儿和旅游者腹泻 致病物质 肠毒素enterotoxin heat labile enterotoxin(LT) heat stable enterotoxin(ST) 定植因子(菌毛）,2019,-,17,肠侵袭型大肠埃希菌 (enteroinvasive E.coli，EIEC),似菌痢样，有脓血便，有里急后重 致病机理 侵袭结肠粘膜上皮并繁殖 细菌死亡后释放内毒素，引起炎症,2019,-,18,肠致病型大肠埃希菌 (enteropathogenic E.coli， EPEC),婴幼儿腹泻 致病机理 粘附和破坏肠粘膜微绒毛 上皮细胞排列紊乱，功能受损，导致腹泻,2019,-,19,肠出血型大肠埃希菌 (enterohemorrhagic E.coli， EHEC),亦称为Vero毒素大肠埃希菌 血清型为 O157:H7 临床表现 轻重不一（水便伴剧烈腹痛的鲜血样便） 10%小于十岁患儿，有严重并发症（急性肾衰、溶血性尿毒综合症、血小板减少性紫癜），死亡率高 致病因子 菌毛 毒素 Vero毒素 内毒素与溶血素,2019,-,20,The “life cycle” of E. coli O157:H7,5-10% prevalence in animals 40% prevalence in farms,2019,-,21,肠黏附性大肠埃希菌(集聚型） (enteroadherent E.coli， enteroaggregative E.coli , EAEC),婴儿持续性腹泻2W以上，脱水，偶有血便 致病因子 肠集聚耐热毒素（EAST） 菌毛 溶血素,2019,-,22,三. 微生物检查 1.临床标本的检查 肠道外感染取-尿血脓脑脊液，生化鉴定 肠道内腹泻取-粪便 可疑菌落 涂片染色 : 形、色、排列 -初诊 生化反应（IMViC试验为+ + - -）血清分型或测定肠毒素-确诊,37 18-24h,尿路感染：每毫升尿含菌量1105,2019,-,23,在环境和食品卫生学上，常被用作粪便污染的检测指标, 3个大肠菌群数/1L饮水 100个细菌总数/1ml饮水,卫生学指标,大肠菌群指数,每1000ml水中大肠菌群数,我国饮用水卫生标准：,细菌总数,每1ml或1g样品中细菌总数, 5个大肠菌群/100 ml瓶装汽水、果汁,2019,-,24,预 防, 尿道插管和膀胱镜检查严格无菌操作 加强食品和水的卫生管理 有些牛肠道中存在EHEC，预防出血性结肠炎，应避免食用未煮 熟的牛肉、生牛奶、蔬菜 菌毛疫苗防治新生畜崽腹泻,治 疗, 耐药普遍，依据药敏试验选择 针对腹泻及时纠正水和电解质平衡,五、防治原则,2019,-,25,在分子生物学和基因工程实验中,六、重要的实验材料和研究对象,大肠杆菌也是重要的实验材料和研究对象,2019,-,26,病 例 1,5岁男孩在随母亲旅游中，进食小店卖的水果沙拉，回家2d后，出现严重腹部疼痛，大便次数不断增加，且多次便血，伴发热、呕吐，到医院急诊，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合征。 思考题： 1最可能的病原菌是什么？ 2应做哪些微生物学检查？,2019,-,27,病例1提示,1.该患儿有进食水果沙拉病史，2天后出现严重腹痛，大便次数不断增加，且多次便血，伴发热、呕吐，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合征。以上症状提示最可能的病原体是大肠埃希菌O157：H7（肠出血型大肠埃希菌 EHEC） 2.针对该可以病例应及时对肠道内大肠埃希菌感染进行常规微生物学检查，并快速进行毒力和血清学等特征鉴定，以确定防治措施。,2019,-,28,这种疾病离我们远吗？,2011年5月6月,2019,-,29,2019,-,30,病 例 2,患者男23岁，急性腹痛2d ，每天脓血便10次左右，有明显里急后重感，肠鸣音亢进，体温38，血压正常，白细胞数17109/L。取粘液便镜检红细胞3个，白细胞8个，未见阿米巴原虫。 思考题： 1可初步诊断为哪种疾病？ 2采用哪种方法能进行快速诊断？,2019,-,31,SS选择培养基上无色半透明菌落 多数不分解乳糖（除宋内志贺菌）,第二节 志贺菌属（ Shigella ）,是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌,无鞭毛、荚膜、无芽胞，有菌毛。,生化反应,形态,一、生物学性状,2019,-,32,动力试验,（+）,（-）,乳糖发酵实验,（-）,（+）,2019,-,33,抗原构造,抗原主要有O、K两种，O抗原是分类依据，分群特异性抗原和型特异性抗原，痢疾杆菌分4群39个血清型。,1、A群（痢疾志贺菌）：致病力最强。 2、B群（福氏志贺菌）：我国最多见，易转慢。 3、C群（鲍氏志贺菌）：致病力次于A群。 4、D群（宋内志贺菌）：有两个变异相。 相：S型菌落，有致病力。受控于质粒。 相：R型菌落，无致病力。,2019,-,34,（一）致病物质,1、侵袭力：,菌毛有利于菌粘附至肠粘膜,2、毒 素：,内毒素 *作用于肠壁 通透性 吸收 发热、神志障碍、中毒性休克 *破坏肠粘膜炎症、溃疡 脓血粘液便 *肠壁植物神经肠蠕动失调、痉挛腹痛、里急后重,外毒素志贺毒素与内毒素协同作用，加重局部和全身症状,2019,-,35,2. 所致疾病：细菌性痢疾,病人 带菌者,粪-口,细菌性痢疾,急性菌痢,慢性菌痢,2019,-,36,（二）所致疾病,细菌性痢疾,急性细菌性痢疾 典型：发热、腹痛、脓血粘液便 非典型：低热或不发热，稀便，偶含脓血 中毒性：中毒症状,慢性细菌性痢疾：病程迁延二月以上,2019,-,37,病 例 2,患者男23岁，急性腹痛2d ，每天脓血便10次左右，有明显里急后重感，肠鸣音亢进，体温38，血压正常，白细胞数17109/L。取粘液便镜检红细胞3个，白细胞8个，未见阿米巴原虫。 思考题： 1可初步诊断为哪种疾病？ 2采用哪种方法能进行快速诊断？,2019,-,38,病例2提示,1.患者急性腹痛2d ，每天脓血便10次左右，有明显里急后重感，肠鸣音亢进，低热等临床症状，初步诊断为急性细菌性痢疾。,2019,-,39,3.免疫性 感染局限于肠粘膜层，不入血，故免疫主要是消化道粘膜表面的分泌型IgA;维持时间短。,2019,-,40,三、微生物学检查,及时送检/暂用30%甘油缓冲水保存,SS平板（无色透明小菌落）,血清学反应（玻片凝集）,明确诊断,分离培养,新鲜脓血便/肛拭,双糖培养基（生化反应）,快速诊断,荧光菌球试验,协同凝集试验,乳胶凝集试验,分子生物学方法,2019,-,41,四、防治原则,现致力于活菌苗的研究。如链霉素依赖株（Sd）。口服后，产生SIgA。同时，血清中的IgM、IgG特异抗体也增多。Sd活疫苗的免疫保护具有特异性。 药物治疗：应注意耐药菌株。,2019,-,42,2019,-,43,小结,痢疾杆菌的形态特点？培养特点？ 致病物质有哪些？引起什么疾病？ 所引起疾病在临床上的分类？ 何为链霉素依赖株（Sd）？,2019,-,44,其中许多为人畜共患病,第三节 沙门菌属,一大群人与动物肠道中的寄生菌,菌群菌型甚多，仅少数对人致病,对人致病的有伤寒沙门氏菌，甲乙丙型副伤寒沙门氏菌，鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌和肠炎沙门菌等。,2019,-,45,一、生物学性状,大小0.6- 12-3um。周身鞭毛、一般无荚膜，少数有微荚膜。,（一）形态与染色,（二）培养特性 普通琼脂平板形成中等大小、无色半透明的S型菌落。,2019,-,46,硫化氢试验,（+）,（-）,乳糖发酵试验,（三）生化反应：常用于细菌种与亚种间的鉴别,（-）,（+）,2019,-,47,（四）抗原构造,主要有O、H两种抗原，少数菌还有一种表面包膜抗原，因其与细菌毒力有关，而称之为毒力相关抗原（Vi抗原）。,2019,-,48,二、致病性(掌握),致病物质,侵袭力：细菌的粘附、穿透力及扩散力；,内毒素：发热、白细胞数下降等；,肠毒素：类似ETEC产生的肠毒素。,细菌,粘附在小肠粘膜 上皮细胞并穿入 到上皮下层繁殖,粘膜固有层的 吞噬细胞吞噬,2019,-,49,胆囊-肠道-粪排菌 皮肤-血栓出血-玫瑰疹 肾-尿 肝脾-肿大 骨髓-受抑制,1.伤寒和副伤寒(肠热症),伤寒和甲型副伤寒沙门菌,小肠上部粘膜,肠系膜淋巴结,固有层淋巴结,进入血液,再次进入血液,第一次菌血症,第二次菌血症,2019,-,50,肠热症,摄入的细菌,肠系膜淋巴结,胸导管,全身疼痛、不适发热（前驱期第1周）,菌血症,肝、脾、肾及胆囊等，细菌被吞噬细胞吞噬,胆囊,肾脏,持续高热、肝脾肿大、全身中毒、玫瑰疹、相对缓脉 （ 第2-3周 ）,菌血症,进入肠壁淋巴组织,粪便,尿,并发症：肠穿孔、血栓性静脉炎、胆囊炎,典型病例病程为3-4W,孤立和集合淋巴结坏死溃疡,淋巴管,2019,-,51,2、胃肠炎（食物中毒）：最常见,鼠伤寒沙门菌 猪霍乱沙门菌 肠炎沙门菌,大于108,食物中毒（发热、恶心、呕吐、 腹痛、水样泻）,3、败血症：,希氏沙门菌 鼠伤寒沙门菌 猪霍乱沙门菌 肠炎沙门菌,血,败血症（高热、寒战、厌食、贫血）,脑膜炎、骨髓炎、胆囊炎、心内膜炎,2019,-,52,4、无症状带菌者,约1-5%伤寒或副伤寒患者，症状消失1年后，粪便仍可排菌，这些菌主要留在胆囊中，有传染性。,2019,-,53,三、免疫性 本菌为胞内寄生菌，故特异性免疫以细胞免疫为主，伤寒或副伤寒后获得牢固免疫性。,2019,-,54,伤寒和副伤寒 食物中毒 败血症 第1周取静脉血 可疑食物 血 第1-3周取骨髓液 呕吐物 第2周起取粪、尿 粪,三、微生物学检查,标本,SS平板,生化反应,血清学鉴定,双糖发酵等,玻片凝集试验,（一）细菌学检查,2019,-,55,阳性率（%）,发病后周数,伤寒病人不同病期血、粪、尿中病原菌的检出阳性率,血,粪,尿,2019,-,56,（二）血清学诊断肥达试验,1、定义： 用已知的伤寒沙门菌O、H抗原和甲型副伤寒沙门菌H抗原与不同稀释度的待检血清作定量凝聚试验，根据抗体的含量和动态变化以辅助临床诊断伤寒病原菌的一种血清学试验。,三、微生物学检查,2019,-,57,伤寒沙门菌O、H抗原,甲型副伤寒沙门菌H抗原,肖氏沙门菌H抗原,希氏沙门菌H抗原,+,待检血清 （不同稀释度）,定量凝聚试验,抗体的效价,2019,-,58,1.考虑正常人群抗体水平：O 1:80,H 1:160 2.动态观察：恢复期效价增加4倍 3. O-Ab IgM,出现早，维持时间短 H-Ab IgG,出现迟，维持时间长,易受非特异性刺激 而重现，如预防接种或非特异性回忆反应 O高 H高 肠热症可能性大 O低 H低 排除 O高 H低 早期或有交叉反应的其它沙门菌感染 O低 H高 预防接种或曾患过伤寒,肥达试验的结果判断,2019,-,59,4.其他：少数病例，在整个病程中，肥达反应始终正常，原因可能为早期使用大量抗生素治疗/患者免疫功能低下。,2019,-,60,阳性率（%）,发病后周数,伤寒病人不同病期血、粪、尿中病原菌和特异性凝集素的检出阳性率,尿,血,粪,特异性凝集素,2019,-,61,（三）伤寒带菌者检出 分离出病原菌是最可靠的方法。先测可疑者血清中Vi抗体效价，如1：10时，反复分离培养