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第四章 真菌 前言,一、定义 真菌(fungi)是指有细胞壁,无叶绿素,以寄生或腐生方式生存,少数为单细胞,多数为多细胞,能进行无性或有性繁殖的一类真核细胞型微生物 二、分类(Ainsworth,1968) 1. 真菌界真菌门 黏菌门 2. 真菌门 营养阶段为典型的菌丝体,根据菌丝有无横隔和有性孢子类型可分为五个亚门(如下表),1,2019,-,真菌五个亚门,2,2019,-,3. 真菌按形态分类(图),上图:根霉 下图:根霉孢子囊,上图: Saccharomyces cerevisiae (Eukaryota) 下图:酵母菌菌落,上图:霉菌菌落 下图:青霉孢子梗,(1)酵母球状真菌 (2)霉菌丝状真菌,3,2019,-,水生真菌菌丝,4,2019,-,典型霉菌,黑曲霉,青霉,5,2019,-,三、真核生物与原核生物的细胞,1. 大小 2. 细胞壁成分,纤维素,几丁质肽聚糖 3. 细胞膜:真核生物膜外,壁内含流苏体 (lomesonmes) 4. 细胞质:核糖体80s70s 微管分流有无 5. 细胞核:真核原核 6. 繁殖:有性成分无性二分裂,6,2019,-,四、真菌的特点(低等的真核生物),1. 不能进行光合作用 2. 以生产大量孢子进行繁殖 3. 一般具有发达的菌丝体 4. 营养方式为异样吸收型 5. 陆生性较强,7,2019,-,第一节 酵母菌,8,2019,-,一、酵母菌的特点,1. 个体一般以单细胞状态存在 2. 多数营出芽繁殖,也有的是裂殖 3. 能发酵糖类产能 4. 细胞壁常含甘露聚糖 5. 在含糖,酸性环境下生长 啤酒酵母Saccharomyces cerevisiae 毕赤氏酵母Pichia guilliermondii,9,2019,-,酵母菌的细胞结构,10,2019,-,二、形态与结构 1. 形态、大小,(1)圆形,卵圆形,长形,椭圆形,柱状等 (2)假丝 当酵母菌进行一系列的芽殖后,如果长大的子细胞与母细胞不立即分离,其间以狭小的面积相连,这种藕节状细胞串称为假丝 eg:白色念珠菌白假丝酵母 (3) 长22 m x 110 m,在光学显微镜下可模糊的看到细胞内的结构分化(如子囊),11,2019,-,2. 细胞结构 (1)细胞壁,外层甘露聚糖(mannan) 甘露糖(mannose) 内层葡聚糖(glucan) 间层蛋白质(有些是酶,如葡聚糖酶,甘聚糖酶) CW上含有类脂和以环状形式分布在芽痕周围的几丁质 芽痕酵母菌细胞出芽繁殖的芽脱落后,在母细胞上留下的疤痕,12,2019,-,细胞细胞壁结构-1,13,2019,-,细胞细胞壁结构-2,14,2019,-,(2)细胞膜(组成),蛋白质其中含有可吸收糖和氨基酸的酶等 类脂甘油酯,甘油磷脂,甾醇 糖类主要含甘露聚糖 功能调节细胞外溶质运送到细胞内的渗透屏障,细胞壁等大分子成分的合成和装配基地,部分酶的合成和作用场所,15,2019,-,(3)细胞核,酵母菌细胞内的核只有一个,当细胞处于分裂间期时,是以染色质状态存在,核物质的主要成分是DNA、组蛋白及非组蛋白,由此构成染色质的基本单位核小体(nucleosomes),串珠状的丝状结构。 当细胞进行分裂时,染色质丝折叠、盘绕、浓缩形成光学显微镜下可见的染色体(chromosome)。 S. cerevisiae有17条染色体,线粒体中的DNA,类似于原核生物中的染色体。可作为外源DNA片段的载体,通过转化而组成“工程菌”,16,2019,-,(4)其他细胞器,线粒体 液泡 内质网 核糖体(40s+60s) 微粒体。 有些酵母菌有荚膜,主要成分为磷酸甘露聚糖。,17,2019,-,三、酵母菌的繁殖,1. 无性繁殖芽殖、裂殖 2. 有性繁殖 “+”“-”配囊配囊融合,18,2019,-,1、无性繁殖 (1)芽殖(budding)基本过程(动画演示),母细胞出芽部位的细胞壁变薄、突起并形成小的芽体; 大量新合成的细胞物质包括核酸、蛋白质及细胞质中的一些细胞器等涌入芽体并在芽体起始部位堆积,使芽体逐渐长大; 芽体成熟时,芽体与母体细胞的连接部位开始缢缩并出现横隔壁; 横隔壁处断裂,芽体脱离母细胞。,19,2019,-,(2)裂殖(fission),与细菌的二分分裂相似 仅有少数酵母菌种类能以裂殖方式繁殖,称为裂殖酵母(Schizosaccharomyces)。 基本过程:细胞伸长,核分裂为两份,然后细胞中间出现横隔将两个子细胞分开,新形成的两个子细胞长大成熟后又重复此过程。,20,2019,-,(3)无性孢子,假丝酵母菌属中的白假丝酵母(Candida albicans)假菌丝顶端及菌丝中间都能形成具有较厚壁的厚壁孢子(chlamydospore),又称厚膜孢子(图4-5) 厚壁孢子孢子对不良环境有一定的抗性,它既是一种无性孢子,又是一种休眠体。,21,2019,-,2、有性繁殖,(1)形成有性孢子 酵母菌形成的有性孢子为子囊孢子(ascospore) 产生子囊孢子的结构称为子囊(ascus) 子囊内产生子囊孢子,子囊孢子的数目4个、8个。 (2)子囊孢子的形成过程 两个不同遗传型的细胞相互接触、细胞壁融合,称为质配; 两个细胞的核进行融合,称为核配; 二倍体的核进行减数分裂,形成子囊孢子,与此同时,营养细胞外壁分化、加厚,形成特定结构的子囊。,22,2019,-,3、酵母菌生活史,无性繁殖芽殖无性世代单倍体世代(n) 有性繁殖子囊孢子有性世代二倍体世代(2n) 酵母菌生活周期无性世代和有性世代共同组成,称为世代交替现象。 不同种类酵母菌,其生活周期中,无性世代和有性世代的所占的比例差异较大。,23,2019,-,啤酒酵母,世代交替明显,24,2019,-,八孢裂殖酵母,单倍体世代占优势,25,2019,-,路德酵母,二倍体世代占优势,26,2019,-,4、培养特征,培养条件28、2448h 固体培养菌落比细菌菌落大、厚, 菌落表面湿润、光滑 液体培养均匀生长(氧浓度高) 沉淀生长(氧浓度低),27,2019,-,4、酵母菌与医药工业 (1) 病原性酵母菌-1,白假丝酵母(白色念珠菌) 形态:呈圆形、卵圆形 繁殖:芽殖,不进行有性繁殖,可形成假菌丝,假菌丝上长有芽生孢子,菌丝的顶端或侧枝上可形成厚壁孢子。 菌落:呈灰白或奶油色,表面湿润、光滑。 条件致病菌:在人体体表、口腔及粘膜部位有分布,一般不致病。 药物敏感性:如氟康唑(fluconazole)、酮康唑(ketoconazole)等。,28,2019,-,(1) 病原性酵母菌-2,新型隐球菌 形态:圆形,直径一般为46m,细胞壁外有一层很厚的荚膜。 一般是通过外源性感染引起机体病变,可引起支气管肺炎、肺组织大片浸润甚至死亡。 荚膜:荚膜多糖是重要的致病物质,可抵抗机体内吞噬细胞的吞噬、诱使动物免疫无反应性、导致机体的抵抗力下降。新型隐球菌经紫外线照射后失去荚膜,对小鼠的致病力也消失。,29,2019,-,(2)酵母菌与制药工业,含有丰富的蛋白质、核酸、氨基酸、维生素、酶和辅酶等,并含有细胞色素C、麦角固醇等药用生理活性物质。 药用酵母是一种经高温干燥的酵母粉 酵母细胞培养:提取核苷酸、辅酶A、细胞色素C、凝血质及维生素B2等生化药物。,30,2019,-,第二节 霉菌,(1) 青霉素、头孢菌素的产生菌 青霉素点青霉产黄青霉(penGAPA) 头孢菌素C顶头孢霉菌(Cephalosporin C7ACA) (2) 真菌多糖:香菇多糖,银耳多糖,灵芝多糖 (3) 致病真菌(动植物病毒害) (4)食品曲霉红曲,31,2019,-,霉菌-丝状真菌,菌丝体 营养菌丝 气升菌丝 生殖菌丝 孢子 无性孢子 有性孢子,32,2019,-,一、菌丝 1. 菌丝的形态,(1) 营养菌丝体升入培养基中吸收营养物质 气升菌丝体向空中生长 繁殖菌丝体可以产生孢子的气升菌丝体 (2) 菌丝 有隔菌丝多细胞,隔膜有孔,允许细胞质和核呈线状移动 无隔菌丝单细胞 ,多核,生长快,旺盛,在固体培养基上不易长成单一菌落(eg:毛霉,根霉),33,2019,-,2. 菌丝的类型,34,2019,-,3. 横隔的类型,隔膜上有许多微孔 穿孔隔膜 陷孔结构 桶状隔膜孔口,35,2019,-,4.菌丝的特化形态,真菌的菌丝聚集可形成类似高等植物“组织”的结构,菌丝体包括特化的营养菌、 特化的气生菌丝和真菌液体培养时的菌丝球。,36,2019,-,4-1 特化的营养菌丝,特化的营养菌 吸取养料:假根 吸器。 附着: 附着胞吸取养料 附着枝菌丝附着于宿主 休眠(或休眠以及蔓延)菌核 菌索(蔓延) 延伸匍匐枝 捕食线虫菌环 菌网,37,2019,-,4-2 特化的气升菌丝(子实体),特化的气生菌丝(子实体,fruiting body) 简单:无性分生孢子头、孢子囊 有性担子 复杂:无性分生孢子器 分生孢子座 有性(子囊果)闭囊壳 子囊壳 子囊盘 子实体指由霉菌的气升菌丝特化形成的,其里面或上面可以产生孢子的,有一定形状的任何构造 子囊果能产生有性的,结构复杂的子实体称为子囊果 真菌液体培养时的菌丝球,38,2019,-,二、霉菌菌丝细胞的结构-1,真菌(霉菌)的生长仅限于顶部 菌丝的顶端是细胞延长区,39,2019,-,霉菌菌丝细胞的结构-2,CW:几丁质N-乙酰葡萄糖胺以-1,4糖苷键连接 CM:在CW和CM间有颗粒状,液泡或管状物(流苏体) 细胞质(核糖体) 细胞器:线粒体,内质网,高尔基体 内含物:糖原(淀粉粒)脂肪粒 核:核膜、核仁/减数分裂,40,2019,-,酵母菌和霉菌细胞结构的比较,41,2019,-,三、霉菌的培养 1 培养条件,酸:pH46 甜:多种糖作为碳源 氧:需氧 温:2228 湿:潮湿 慢:比细菌生长慢,14周才能长出菌落,42,2019,-,2 菌落特征,大小;扩散生长,固定大小 外观:疏松,呈绒毛状,絮状,蜘蛛网状 色泽:黄,绿,青,橙,黑,可溶性色素等,43,2019,-,几类微生物菌落特征,酵母菌,青霉,细菌,44,2019,-,四、霉菌的繁殖,无性繁殖 裂殖、菌丝断裂 芽殖 无性孢子(主要方式) 有性繁殖 质配、核配、减数分裂 有性孢子,45,2019,-,芽殖,出芽生殖中的啤酒酵母,46,2019,-,常见真菌孢子,47,2019,-,青霉帚状孢子,48,2019,-,黑曲霉,49,2019,-,致病性真菌-1,浅部感染真菌 表面感染真菌:秕糠马拉癣菌-花斑癣(汗斑) 皮肤癣真菌:手足癣,体癣,股癣,头癣,须癣 皮下组织真菌感染:发生丘疹、疣、肉芽肿等 深部感染真菌 新生隐球菌(常见):经肺侵入,50,2019,-,致病性真菌-2,条件致病性真菌 假丝酵母菌 曲霉:烟曲霉-支气管哮喘或肺部感染 毛霉:可通过输液或污染绷带感染 卡氏肺孢菌(肺囊虫) 真菌毒素:黄曲霉素-肝癌,51,2019,-,致病真菌-白色念珠菌,52,2019,-,引起皮肤病的真菌(浅部感染),1998我国报
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