一种新的膀胱癌原位移植瘤动物模型的建立ppt课件.ppt

2013年9月,一种新的膀胱癌原位移植瘤动物模型的建立 A new method of establishing orthotopic bladder tumor in mice for experimental therapies,一、研究目的和意义,膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，术后高复发率是临床治疗失败的主要原因。 根据膀胱癌易复发的特点，行术后药物膀胱灌注可以达到清除残余瘤体，预防复发的目的。,因此寻找一种能有效清除膀胱癌术后残余瘤体的药物具有重要意义。 研究药物在动物体内对膀胱癌术后复发的预防效果，首先必须建立一种简便、稳定、可靠的膀胱癌原位移植瘤动物模型。,原位膀胱癌动物模型的制备方法,目前常用的制备膀胱癌原位移植瘤动物模型的方法按接种方法不同可分为四种： 1. 将致癌剂注入膀胱腔内引发肿瘤。 缺点：肿瘤多发，且定位不确定。 2. 将化学物质（酸、碱或酶）注入膀胱腔内造成膀胱粘膜损伤后再注入肿瘤细胞。 缺点：成瘤率低、操作繁杂，损伤面积大，可能造成严重并发症，对动物损伤非常大。 3. 经腹部膀胱壁内注射肿瘤细胞。 缺点：需要手术，操作复杂，对动物损伤严重，且肿瘤细胞易漏入盆腔和腹腔。,原位膀胱癌动物模型的制备方法,4. 用机械方法造成膀胱粘膜损伤后再灌注肿瘤细胞 该方法对动物损伤小；肿瘤细胞可以定植在损伤部位，因此成瘤部位确定；且该模型与临床膀胱肿瘤病理过程相似，能准确反应出肿瘤的生长、浸润。,原位膀胱癌动物模型的制备方法,（1）杨慎敏等采取腹正中切口，暴露膀胱，自尿道插入动脉穿刺套管针套管，插入针芯，在直视下用小镊子提起膀胱并轻轻移动，使针芯划伤膀胱左侧壁23 次，退出针芯，注入肿瘤细胞。 缺点：需要进行手术，操作复杂，对动物损伤严重。 （2）Bisson J F等将自制的摩擦装置通过套管经尿道置入膀胱，感觉针头抵达膀胱壁后用针芯旋转损伤膀胱粘膜，然后注入肿瘤细胞。 缺点：未对针芯旋转的程度给予限制，造成的膀胱粘膜损伤无可控性。,我们采用偏角针膀胱粘膜损伤方法，成功建立了膀胱癌原位移植瘤动物模型，为膀胱癌防治研究提供了一种有实用价值的膀胱癌动物模型的制备方法。 应用该造模方法成功验证了我们研制的一种膀胱灌注液（苏复宁洗液）预防膀胱癌术后复发的作用效果。,材料与方法,1. 偏角针的制备,24#静脉留置针，取出针芯，在距针尖15mm处将针芯折约5-7度的偏角，旋转针芯时针尖处可形成 = 2.613.66 mm的圆。,24#静脉留置针,2.细胞株及实验动物的选择,小鼠膀胱癌细胞株BTT，由山西医科大学第一临床医院泌尿外科杨晓峰教授惠赠。 T739近交系小鼠，雌性，46周龄，SPF级，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证号：SCXK(京)2009-0004。 人膀胱癌细胞株T24，购自中科院上海生命科学研究院。 BALB/c-nu-nu裸鼠，雌性，46周龄，SPF级，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2009-0017。,3. 肿瘤细胞原位接种方法,实验动物,下腹部常规消毒,经尿道口缓慢 插入膀胱腔内,一手固定套管，另 一手转动针芯5周,偏角针缓慢插入套管中,麻醉,戊巴比妥钠60mg/kg,24#静脉留置针套管外涂以液体石蜡,抽出尿液,拔出针芯,注入肿瘤细胞悬液0.1ml（含有1107个细胞）,待动物自然苏醒,拔出套管,实验组,对照组,图1 膀胱粘膜未损伤与损伤后的小鼠膀胱（充盈） （左：膀胱粘膜未损伤； 右：膀胱粘膜损伤）,4. 观察方法,接种后动物常规饲养，观察动物的活动、体重变化，记录动物生存时间，动物自然死亡后解剖，观察两种方法造模后膀胱腔内有无肿瘤形成、肿瘤转移及血尿形成，剖取膀胱，并对膀胱及有肿瘤转移的脏器以10%甲醛溶液固定后作病理检查。,表1 偏角针损伤与不损伤膀胱粘膜的膀胱原位移植瘤成瘤率比较,结果,1. 肿瘤形成情况,图2 膀胱早期与晚期肿瘤 (左：早期膀胱肿瘤；右：晚期膀胱肿瘤),早期肿瘤较为表浅，晚期肿瘤充满整个膀胱。,图3 原位膀胱癌肝转移与肾转移 (左：肝脏转移；右：肾脏转移),2. 肿瘤转移情况,T739小鼠接种后有23%的动物肉眼可见肝脏、肾脏、肠系膜、腹膜等处有转移，转移灶可为多处或单处，同时伴有血性腹水，腹腔内有粘连现象。BALB/c-nu-nu裸鼠只有一只可见肾脏转移。,图4 T739 小鼠 与 Balb/C-nu-nu裸鼠生存时间图 (左：T739 小鼠；右：Balb/C-nu-nu裸鼠),3. 动物生存时间,表3 膀胱原位移植瘤模型动物平均生存时间,图5 膀胱肿瘤及肝肾转移病理学形态,A 正常膀胱 (100),C 晚期原位膀胱肿瘤 (100),B 早期原位膀胱肿瘤 (100),D 肾脏转移 (200),4. 病理学检查结果,讨论,偏角针旋转可以在膀胱粘膜上形成一个均衡的损伤。 接种早期即可有大量的肿瘤细胞定植，在较短时间内就可形成肿瘤并发生脏器转移。 制备偏角针所采用的24#静脉留置针为标准的医用器械，易于获得且标准统一 偏角针的制备方法简单，实验操作简单，对膀胱粘膜的损伤程度容易控制 用该方法建立膀胱癌原位移植瘤模型具有接种成瘤率高、对动物损伤小等优点。,