课件：金色葡萄球菌的测定.ppt

食品中金黄色葡萄球菌检验 GB4789.10-2010,炊慧霞 河南省疾病预防控制中心,金黄色葡萄球菌是造成人类食物中毒的重要致病菌之一,在历年的食物中毒调查中, 该菌占整个细菌性食物中毒的第1位或第2 位。本菌广泛分布于自然界, 如空气、土壤、水及其他环境中。在人类和动物的皮肤与外界相通的腔道中, 也经常有本菌存在。据报道, 在正常人群中的带菌率可达到30%80%, 因此, 其可以通过各种途径和方式, 尤其是经工作人员的手和上呼吸道而污染食品, 并在合适的温度环境下, 细菌可以大量繁殖并产生肠毒素, 从而引起消费者食物中毒。,食品中金黄色葡萄球菌检验,第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验； 第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数； 第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。,定 性 方 法,划线Baird-Parker平板： 菌落直径为2mm3mm ； 颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈； 用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明圈； 长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。,划线血平板： 菌落较大，圆形，光滑凸起 ，湿润； 颜色呈金黄色，有时呈白色； 菌落周围有透明溶血圈。,血 浆 凝 固 酶 试 验,新鲜配置的兔血浆0.5ml,BHI培养物0.2ml0.3ml,振荡摇匀， 置36+1温箱或水浴箱； 间隔30min观察，共6h；,结 果 判 定 如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果； 同时以已知血浆凝固酶试验阳性(金黄色葡萄球菌ATCC 6538 )和阴性葡萄球菌菌株(表皮葡萄球菌CMCC(B) 26069)的肉汤培养物作为对照。 结果如可疑： 挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mLBHI，361培养18h48h，重复前面的凝固酶试验。 考虑采用其它方法进行鉴定（生化试剂条、PCR）。,葡萄球菌肠毒素的检测,目的： 食品原料或成品污染的金黄色葡萄球菌及某些芽胞菌后会产生危害身体健康的肠毒素，经热杀菌或货架期长时间放置后微生物死亡，但由于肠毒素可耐受100的高温30min而仍然不被破坏，故很容易引起食源性中毒，是一种重要的危害人类健康的细菌毒素。人食用后会出现严重的腹泻、肠炎甚至死亡。许多欧美国家对我国进口的一些食品强制要求检测肠毒素。,葡萄球菌肠毒素的检验,葡萄球菌致病因子 1 肠毒素：耐热的细菌外毒素，致病主要原因； 根据血清分型：A、B、C1-C3、D、 E、G、 H、I和J （肠毒素可耐受100的高温30min而仍然不被破坏，故很容易引起食源性中毒，是一种重要的危害人类健康的细菌毒素。人食用后会出现严重的腹泻、肠炎甚至死亡。许多欧美国家对我国进口的一些食品强制要求检测肠毒素。） 2 表皮剥脱毒素：eta etb etd 3 中毒休克综合征毒素： TSST-1 葡萄球菌肠毒素检测方法：附表B,检 测 方 法,动物试验：幼猫或猴作为研究对象，观察结果 放射免疫测定法：建立在标记抗原和非标记抗原对特异性抗体的竞争性抑制反应；例如I125标记抗体，用于检测未知食品中的SE。 酶联免疫吸附试验：目前应用较广；试剂盒或全自动酶联荧光免疫分析法(VIDAS法) 的使用；但是目前只能检测传统的A-E五种血清型。 聚合酶链反应技术：在体内模拟自然DNA的复制过程，对特定的DNA或DNA片段进行快速扩增的方法，研究报道此法可对致病因子进行快速准确的检测；,酶联免疫吸附法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA） 是一种基于抗原抗体免疫反应的快速检测方法，其基本原理是把抗体预先包被在固体微孔表面，然后依次加入样本和酶标抗体，使其与结合在固相载体上的抗体进行特异性反应，形成“三明治”的抗原抗体复合物结构，最后加入酶反应底物后，底物能被酶催化变成有色产物，颜色反应的深浅与样品中相应的抗原量呈正相关。利用肉眼就可以根据颜色的深浅进行定性分析，或者也可以使用酶标仪进行定量测定。由于酶的高效性催化，能放大免疫反应的结果，故其灵敏度很高，是一种经典的免疫学检测方法。 AOAC官方标准：OMA 993.0,VIDAS 葡萄球菌肠毒素(SET2) Ref 30705,名字 : VIDAS Staph enterotoxin II葡萄球菌肠毒素 代码 : SET2 货号 : 30705 包装 : 30 检测 说明 : 检测食品中的葡萄球菌肠毒素 实验时间: 80分钟 出结果时间: 1 天 认证 : AOAC,PCR法测定金葡中致病因子,食品中分离的金黄色葡萄球菌中致病因子的分布情况,结 果 报 告,报告在25g（mL）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。,金黄色葡萄球菌 Baird-Parker平板计数,金黄色葡萄球菌BairdParker平板法检验程序,方法的注意事项,使用前，如BairdParker平板表面有水珠，可放在2550的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。 如样液不易吸收，可将平板放在361孵育 1 h；等样液吸收后反转平皿， 再培养。,选择菌落数在20 200 cfu之间平板上的典型菌落计数 .如果,A.最低稀释度平板的菌落小于20 cfu，计数该稀释度平板上的典型菌落； B.某一倍稀释度平板的菌落大于200 cfu且有典型菌落，但上一倍稀释度平板上没有典型菌落，计数该级稀释度平板上的典型菌落； C.某一倍稀释度平板的菌落大于200 cfu且有典型菌落，且上一倍稀释度平板上有典型菌落，其平板上的菌落数不在20 cfu200 cfu之间，计数该级稀释度平板上的典型菌落； 以上按公式一计算。 D. 平板菌落数均在20 cfu200 cfu之间，按公式二计算。,Baird-Parker法 计 算,统一了样品的处理程序 计数要求 选择20200cfu菌数的平板 计算公式 两个 公式一： T=AB/Cd T:样品中金黄色葡萄球菌菌落数 A:某一稀释度典型菌落的总数 B:某一稀释度血浆凝固酶阳性的菌落数 C:某一稀释度用于血浆凝固酶试验的菌落数 d:稀释因子,Baird-Parker法 计算,公式二： N=T/1.1d T：两个稀释度确认的金葡菌 d：第一级稀释度 公式引用ISO 6888-1:1999(E),T 样品中金黄色葡萄球菌菌落数A1 第一稀释度（低稀释倍数）典型菌落的总数 A2 第二稀释度（高稀释倍数）典型菌落的总数 B1 第一稀释度（低稀释倍数）血浆凝固酶阳性的菌落数 B2 第二稀释度（高稀释倍数）血浆凝固酶阳性的菌落数 C1 第一稀释度（低稀释倍数）用于血浆凝固酶试验的菌落数 C2 第二稀释度（高稀释倍数）用于血浆凝固酶试验的菌落数 1.1 计算系数 d 稀释因子（第一稀释度）,结 果 报 告,单位：cfu/g或者cfu/mL； 若T或者N为0，报告1d-1 cfu/mL(g).,MPN法 依 据,AOAC 987.09 FDA BAM 2001 德国 DIN EN ISO 6888-3:2003 SN0172-92标准 台湾检验方法 欧美国的一些产品的卫生标准要求,金黄色葡萄球菌MPN法检验程序,MPN 法 要点,金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品 最高的稀释度应在九管内 如何理解 检验流程 注意事项 结果报告（MPN/g或MPN /mL） 、阳性管观察和确认、培养基,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用,主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！,致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、