水质方案及修改建议.doc

枯草芽孢杆菌对水质净化作用效果的研究1材料与方法1.1 菌种与来源 根据RAPD技术的分型结果，从每个类群中随机选取1株枯草芽孢杆菌用作水质分析试验（图1）：图1 46株枯草芽孢杆菌构建的聚类图1.2 菌种活化、菌种扩培养 将实验菌株分别接种于普通海水培养基 37 恒温培2436 h , 活化后 , 分别接种于LB液体培养基, 于 37 恒温摇床培养 24小时以上，通过平板计数，此时枯草芽孢杆菌的浓度为0.9108 cfu/ml。1.3模拟污染水体的处理：（方法有二）方法一：水样：实验室养鱼废水，通过测定亚硝酸盐含量高，但氨氮含量过低，通过加一定量的硫酸氨提高其的含量，即每1L加入0.16克硫酸氨（用于初筛菌株）水样：？ 牛肉膏 5. 00 g、蛋白胨 10. 00 g、NaCl 5. 00 g、水 1 000 mL ,稀释 6. 5倍后灭菌备用。（用于比较菌株对COD的去除情况）水样： ？水体中加入0.16 g硫酸氨后灭菌备用（用于比较菌株去氨氮的能力）水样： ？水体中加入硫化钠0.145 g以上，使其中的硫化物达到其的灵敏度0.02mg /L（这里我觉得也可以取一般的污染水，只要达到测定的灵敏度就可以了）（光达到敏感度就够了吗？如何体现出其降解能力？）不同水样的区分标准和目的是什么？方法二：水样：将养鱼污水进行加工，使其各个指标达到测定的要求，灭菌备用（为何需要灭菌？灭菌对各个指标是否会有影响？）1.4接种量 取扩大培养后的菌株液50mL (离心后取菌体) 使投菌量达到每毫升水2. 5 107 个菌。1.5 水质测定方法 氨氮采用纳氏比色法测定、亚硝酸盐氮含量采用奈氏比色法测定、溶解氧采用水质分析仪直接测定、硫化氢采用N，N对氨基二乙基苯胺法、COD采用碱性高锰酸甲法、pH用pH计法。（每种方法的具体测定过程如何？）1.6菌株净水能力的初筛将随机选取的菌株（量和浓度分别是多少？）投入水体中，另外设一个空白对照组（空白对照如何设置？）。每隔24小时测定并记录各实验组的氨氨亚硝酸盐（它们的量都分别稀了5倍）浓度，连续测量记录7天。从低到高挑选出效果好的菌株。淘汰部分菌株。试验容器为36cm 20cm 15 cm的塑料桶。仅测量氨氨亚硝酸盐（？）就能代表净水能力吗？1.7 筛选菌株净水能力的比较将水样、分成3个大组（每个大组的设置目的是什么？），每一大组又分为11个平行小组（每个小组如何设置？目的是什么？），同时每一大组都设一个空白对照（空白对照如何设置？）， 将初筛过11个菌株，分别以2. 5 107cfu/ml（终浓度还是投放浓度？）的浓度投入水样、的各个平行小组中。每隔24小时测定并记录水样的COD、溶解氧、pH，水样的氨氮值,水样的硫化氢值，连续测量7天。试验容器为1000 mL的锥形瓶。2结果21菌株筛选的结果：将根据RAPD分型结果选取的15株枯草芽孢杆菌以2. 5 107 cfu/ml的浓度投入水体后，连续7的观察它们对氨氮的影响情况表明，有2株枯草芽孢杆菌的效果很明显，其它的区别不是很大（相互之间的区别不大还是与对照组的区别不大？）。（同时也测了亚硝酸盐的情况，因为取的水是实验室养鱼的废水，该水在养鱼之前经过高锰酸钾的处理，但没有清洗干净，以致使测的结果作废）22筛选菌株净水能力的比较结果：3讨论周老师：您好，我觉得做这个实验会遇到很多实际问题，这几天我都在做初筛实验，通过做实验我学到一些东西。我个人觉得陈老师在水质试验的问题上考虑最多的是能否准确测出来，但我想我的实验测定的时候可以有一些误差，（实验最基本的要求就是要准确，即使有误差，也必须在规定允许的范围内，否则实验就没有意义）但最主要的是反应出它们的变化情况是关健，我做氨氮值测定时，一般水样根本测不出来，但我在水体中加了一些硫化氨，就很容易测出来了，并且从测定结果很明显看出它们的变化情况。所以我想我的这个实验完全可以使用污水（既然添加了成分就不是原有的污水，更说明只使用污水是不行的！），先做一个预实验，看一下各个指标能否测出，如果一些指标不能测出，可以为人地加入使其达到测定的标准（既然可以在污水中加入，为何不能通过在干净水中加入而测定单个指标，这样既可避免相互的干扰，实验可控性也强，实验结果也好讨论），然后投入菌体，连续7天（最后的实验建议缩短时间增加每天检测的次数）测定记录其各个指标的值。在做实验的同时我也看了一些文献，绝大多数是在养殖基地池中做的，另处一些文献是在同一个污水中投入益生菌然后测各个指标，只看到一文献是分开来做的，但想想分开来做我会遇到以下问题：首先是分组所需的缸，我现在只做了一个指标初筛得到2个效果好的菌株（在没有灭菌的桶中进行的）（需要灭菌吗？），但是我觉得这两个菌株别的指标未必好，要综合考虑（所以在使用的菌种筛选中就需要多用几个指标来筛选，只用一个指标是绝对不行的！），所以下一步做的时候我还是打算选12个菌株去做，4个指标就需要48个缸。其次别的菌会污染应是一个关健性的问题（对照组的目的是什么？有必要灭菌吗？）。但要灭菌，无论用缸还是用桶都无法做到这一步，所以我打算都用锥形瓶，可以灭菌，测定一些指标时有时会取很多样，但用锥形瓶会导致连续测定7天后测定的水样不够用，我想可以将水体中的该测定物质的量人为地加多一些，然后通过稀释来尽量减少水样的获得。虽然