生物学与免疫学检验系列实验Ⅰ.ppt

伤寒杆菌感染模型的 微生物学与免疫学检验系列实验 ,主讲教师：王立新、张莹、潘宁 辅带教师：林陵、马素霞、廖静宜 东南大学基础医学院病原生物学与免疫系,志贺菌属与沙门菌属,志贺菌属(Shigella)： 人类细菌性痢疾最为常见的病原菌 通称痢疾杆菌（dysentery bacteria） 沙门菌属(Salmonella)： 引起 肠热症-伤寒、副伤寒 食物中毒 败血症,志 贺 菌 有菌毛 不分解乳糖 无鞭毛（动力） 分解葡萄糖 产酸不产气 不产生H2S,沙 门 菌 有菌毛 不分解乳糖 周身鞭毛（动力+） 分解葡萄糖 产酸产气（伤寒杆菌不产气） 大多产生H2S,生物学性状,O-Ag： LPS成分； 耐热：100数小时不破坏 0.1%石碳酸不破坏 TI-Ag IgM H-Ag： 鞭毛蛋白质； 不耐热； 0.1%石碳酸不破坏 TD-Ag IgG Vi-Ag： 毒力抗原（Virulence） 位于菌体表面 抵抗吞噬 阻止O-Ag与相应Ab的体内外结合 Vi-Ag抗原性弱，可作为带菌者的检测,伤寒杆菌的抗原构造,致病部位： 大肠 不侵入血流 致病物质： 侵袭力： 菌毛 粘附上皮细胞 侵袭 侵入结肠粘膜上 皮细胞，繁殖、扩散， 形态感染病灶 内毒素 外毒素,致病部位； 小肠 侵入血流，引起 菌血症 致病物质： 侵袭力 鞭毛 穿越小肠粘膜， 达皮下组织 Vi抗原 抵抗吞噬细胞 的杀伤 内毒素,致 病 性,志 贺 菌 沙 门 菌,致病过程：志贺菌痢疾,粪口传播（传染源：病人/ 带菌者） 潜伏期 10-200个细菌即使人感染 1-3天 突破人体防御能力 胃酸 正常菌群拮抗作用 局部免疫作用（SIgA） 大肠部位 侵入 侵袭力（菌毛） 粘膜上皮细胞（其中生长繁殖，形成感染灶）,释放 内毒素、外毒素 坏死、脱落粘膜组织 局部刺激 进入血流 粘液、 1、肠功能紊乱 发热、WBC 细菌、 痉挛、腹痛 脱水、酸中毒 炎性细胞、 大便次数增多 微循环衰竭 血液 里急后重 中毒性脑炎 2、肠壁通透性增 DIC 促进毒素吸收 死亡率高 脓血便 腹泻 中毒性菌痢,致病过程：志贺菌痢疾,伤寒杆菌（随食物） 未被胃酸杀灭 潜伏期 小肠上部（以菌毛吸附在粘膜表面） 穿过 组织间隙（鞭毛） 肠壁固有层淋巴组织，由M吞噬 Vi抗原 抵抗杀伤，继续生长繁殖 淋巴液、肠系膜淋巴组织 血液 第一期菌血症,致病过程：伤寒杆菌伤寒,初期 血液 第一期菌血症 （病程 出现乏力、 头痛 血液、骨髓 第1W） 全身酸痛等 前期症状 细菌培养 骨髓、肝、脾、胆、肾等脏器 阳性率高 被其中吞噬 细菌在其昂 IgM 抗OAb 细胞吞噬 中大量繁殖 出现 释放 极期 （病程 肝 肾 各脏器 第2、3W） 胆囊 再 胆汁 次 肠道 尿液 血液 第二期菌血症,肠道 尿液 血液 第二期菌血症 刺激已致敏的 释放大量 血液、粪便、 肠壁淋巴组织 内毒素化 尿液，细菌培养 可呈阳性 发生变态反应 加重全身 中毒症状 血清中： 导致坏死、溃疡 IgG IgM 粪便排出细菌 尿液排出细菌 血液有细菌 持续高热、肝脾肿大、全身中毒症状显著，,恢复期 （第3W 1、特异性抗体升高，作用于细胞外细菌 以后） 2、特异性细胞免疫加强，TD细胞释放淋巴因子， 激活M，使其活性增强，有效杀灭M内的伤寒杆菌。 （ TC细胞杀伤细菌感染的靶细胞？） 3、抗伤寒杆菌O-Ag的抗体（IgM）： 抗伤寒杆菌H-Ag的抗体（IgG）： 带菌者 恢复期带菌者：恢复后3周-3月 长期带菌者：3月 伤寒的痊愈指针： 胆囊、胆汁， 细菌（L型细菌）培养阴性,细菌性痢疾 肠道症状：有 不侵入血流 全身中毒症状： 中毒性痢疾 血象 WBC 脓血粘液便， 粪便是唯一的标本 以局部体液免疫 - SIgA为主,所致疾病临床症状的差异,伤寒 肠道症状：有 侵入血流引起菌血症 全身中毒症状：有 尚影响肝、肾、脾、胆等器官。 血象 WBC ？ 嗜酸性粒细胞 除粪便外，血液、骨髓、尿液、胆汁均可分离到细菌。 以细胞免疫为主，病后获牢固免疫力,微生物学检查法：伤寒杆菌,沙门菌的分离与鉴定 标本 因病程不同采取不同标本： 静脉血 骨髓 粪便和尿液 第1周 第13周 第2周以后 分离培养 增菌 增菌 离心沉淀 SS平板 挑取可疑菌落 鉴定 KIA； MIU； 血清学试验,因病程不同采取不同标本,原理： 已知伤寒杆菌O-Ag 伤 寒 杆 菌 H-Ag + 病人血清 甲型副伤寒杆菌H-Ag 乙型副伤寒杆菌H-Ag 定量凝集 相应Ab的含量,血清学试验Widal test,血清学试验Widal test,结果判定： 正常抗体水平 O凝集价 180；H凝集价1160 O-Ab H-Ab 伤寒早期皮 O-Ab H-Ab 伤寒急性期 O-Ab H-Ab 伤寒恢复期 O-Ab H-Ab A：伤寒愈后期 B：曾患伤寒杆菌 C： 预防接种疫苗 D： L型细菌感染 辅助诊断 ： A： O凝集价 180；H凝集价1160 B： 2次检测凝集价递增 4倍或以上,实验内容及其安排,本此实验内容及其安排,实验动物：昆明种小白鼠 实验细菌：伤寒杆菌液体培养液（5109CFU/L ） 实验分组： 2人/组 1只