微生物实习肉香干的测定.doc

一.实验时间，地点，实习单位实验时间：2014年6月9日6月20日实验地点：3栋教学楼407,505,507室实习单位：邵阳学院生物与化学工程系2. 实习过程概述6.9：实习动员大会，基础实验操作教学6.10：根据本组分析对象，查找资料，制定方案并提交给老师审核6.11：实习方案的审核6.12：实习方案的修改6.13：统计实验所需器材及其数量并找出所需药品试剂6.14：卤香干中水分含量的测定6.15：卤香干中盐分含量的测定6.16：卤香干中蛋白质含量的测定6.17：卤香干中铅含量的测定6.17：卤香干感官检验6.18-19：实验数据的处理6.20课程实习报告并进行分析总结3 实习内容1.卤香干中水分含量的测定（GBT234942009直接干燥法）（1）.试剂和材料除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯。1.1盐酸：优级纯。1.2氢氧化钠（NaOH）：优级纯。1.3盐酸溶液（6 mol/L）：量取50 mL盐酸，加水稀释至100 mL。1.4 氢氧化钠溶液（6mol/L）：称取24 g氢氧化钠，加水溶解并稀释至100mL。（2).仪器和设备2.1 扁形铝制或玻璃制称量瓶。2.2 电热恒温干燥箱。2.3 干燥器：内附有效干燥剂。2.4 天平：感量为0.1 mg。(3） .分析步骤 取洁净铝制或玻璃制的扁形称量瓶，置于101 105 干燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，加热1.0 h，取出盖好，置干燥器内冷却0.5 h，称量，并重复干燥至前后两次质量差不超过2 mg，即为恒重。将混合均匀的试样迅速磨细至颗粒小于2 mm，不易研磨的样品应尽可能切碎，称取2 g10 g试样（精确至0.0001 g），放入此称量瓶中，试样厚度不超过5 mm，如为疏松试样，厚度不超过10 mm，加盖，精密称量后，置101 105 干燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，干燥2 h4 h后，盖好取出，放入干燥器内冷却0.5 h后称量。然后再放入101 105 干燥箱中干燥1 h左右，取出，放入干燥器内冷却0.5 h后再称量。并重复以上操作至前后两次质量差不超过2 mg，即为恒重。注：两次恒重值在最后计算中，取最后一次的称量值。（4)分析数据的处理试样中的水分的含量按式（1）进行计算。m1m2m3重量(g)22.528 18.88416.228 =(22.528-18.884)(22.528-16.228) =57.84%2.卤香干中盐分的测定(GB12457直接滴定法)（1）.试剂和溶液1.1 试剂所用试剂均为分析纯；水为蒸馏水或同等纯度的水（以下简称水）。1.2 0.1 mol/L硝酸银标准滴定溶液：称取 17 g 硝酸银（GB 670)溶于水中，转移到 1000 m L 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，置于暗处。 标定：称取0.05- 0.10 g 基准试剂氯化钠（GB 1253)，或于500-v600 灼烧至恒重的分析纯氯化钠（G B 1266)，精确至0.000 2 8，于250 mL 锥形瓶中。用约70 mL 水溶解，加入1 m L 15 的铬酸钾溶液（A 2.4)，边猛烈摇动边用0.1 mL/L 硝酸银标准滴定溶液（A2.3. 1)滴定至出现红黄色，保持1 min 不褪色。记录消耗0.1 mol/L 硝酸银标准滴定溶液的毫升数(V8),计算：式中：C5, 硝酸银标准滴定溶液的实际浓度，m ol/L;V8滴定时消耗硝酸银标准滴定溶液的体积，m L;m3-氯化钠的质量，g.1.3 5铬酸钾溶液：称取5 g 铬酸钾（HG 3- 918)，溶于95 m L水中。(2)仪器、设备研钵 ；水浴锅；分析天平：感量 0.000 1 g（3）.试样的制备1.1固体样品：取去除不可食部分并具有代表性的样品至少 200 g，在研钵中研细，置于 500 m L 烧杯中备用。 (4).试液的制备称取约10 g试样（2.4)，精确至0.001 g，于100 mL烧杯中，用 80 乙醇溶液(2.2.4)将其全部转移到 100 mL 容量瓶中，稀释至刻度充分振摇，抽提15 min。用滤纸过滤，弃去最初部分滤液。 (5).分析步骤取 2550mL 试液，于250 mL 锥形瓶中。加50 m L水及0.2 mL 1酚酞溶液，用0.l%氢氧化钠溶液滴定至微红色。再加1 mL 5铬酸钾溶液。：称取0. 05-0. 10 g基准试剂氯化钠，或于500-v600灼烧至恒重的分析纯氯化钠（GB 1266)，精确至0.00028，于250 mL锥形瓶中。用约70 mL水溶解，加入1mL15的铬酸钾溶液（1.3 )，边猛烈摇动边用0. 1 mL/L硝酸银标准滴定溶液（1.2)滴定至出现红黄色，保持1 min不褪色。记录消耗0.1 mol压硝酸银标准滴定溶液的毫升数（V9)。(6） 数据分析食品中氯化钠的含量以质量百分率表示，按式计算：式中：X3食品中氯化钠含量，质量百分率，；V9滴定试样时消耗0.1 m ol/L 硝酸银标准滴定溶液的体积，m L;V10空白试验时消耗0.1 m ol/L 硝酸银标准滴定溶液的体积,m L;K3 稀释倍数；m4 试样的质量，g；C5硝酸银标准滴定溶液的实际浓度，mol/L 。计算结果精确至小数点后第二位。A8允许差同一样品两次测定值之差，每100 g 样品不得超过0.2 gV9=15.67ml m4=10.010g C5=0.085/0.05844/14.78=0.0984mol/l =0.058440.098415.611010010.023 =9.0g/100g3.卤香干中蛋白质含量的测定(GB500952010分光光度法) （1）.试剂和材料1.1除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的三级水。1.2 硫酸铜（CuSO45H2O）。1.3 硫酸钾（K2SO4）。1.4 硫酸（H2SO4 密度为1.84 g/L）：优级纯。1.5 氢氧化钠（NaOH）。1.6 对硝基苯酚（C6H5NO3）。1.7 乙酸钠（CH3COONa3H2O）。1.8 无水乙酸钠（CH3COONa）。1.9 乙酸（CH3COOH）：优级纯。1.10 37%甲醛（HCHO）。1.11 乙酰丙酮（C5H8O2）。1.12 氢氧化钠溶液（300 g/L）：称取30 g 氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100 mL。1.13 对硝基苯酚指示剂溶液（1 g/L）：称取0.1 g 对硝基苯酚指示剂溶于20 mL 95%乙醇中，加水稀释至100 mL。1.14 乙酸溶液（1 mol/L）：量取5.8 mL 乙酸（1.9)，加水稀释至100 mL。1.15 乙酸钠溶液（1 mol/L）：称取41 g 无水乙酸钠（1.8）或68 g 乙酸钠（1.7），加水溶解后并稀释至500 mL。1.16 乙酸钠-乙酸缓冲溶液：量取60 mL 乙酸钠溶液（10.14）与40 mL 乙酸溶液（1.9）混合，该溶液pH 4.8。1.17 显色剂：15 mL 甲醛（1.10）与7.8 mL 乙酰丙酮（10.10）混合，加水稀释至100 mL，剧烈振摇混匀（室温下放置稳定3d）。1.18 氨氮标准储备溶液（以氮计）（1.0 g/L）：称取105 干燥2 h 的硫酸铵0.4720 g 加水溶解后移于100 mL 容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于1.0 mg 氮。1.19 氨氮标准使用溶液（0.1 g/L）：用移液管吸取10.00 mL 氨氮标准储备液（1.18）于100ml 容量瓶内，加水定容至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于0.1mg 氮。(2）.仪器和设备分光光度计。电热恒温水浴锅：100 0.5 。10 mL 具塞玻璃比色管。天平：感量为1mg。(3)分析步骤3.1 试样消解称取经粉碎混匀过40 目筛的固体试样0.1 g0.5 g（精确至0.001 g），移入干燥的250 mL 定氮瓶中，加入0.1 g硫酸铜、1 g 硫酸钾及5 mL 硫酸（1.4），摇匀后于瓶口放一小漏斗，将定氮瓶以45角斜支于有小孔的石棉网上。缓慢加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热半小时。取下放冷，慢慢加入20 mL 水，放冷后移入100 mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。按同一方法做试剂空白试验。3.2 试样溶液的制备吸取2.00 mL5.00 mL 试样或试剂空白消化液于100 mL 容量瓶内，加1 滴2 滴对硝基苯酚指示剂溶液（1.6），摇匀后滴加氢氧化钠溶液（1.5）中和至黄色，再滴加乙酸溶液（1.14）至溶液无色，用水稀释至刻度，混匀。3.3 标准曲线的绘制吸取0.00 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL 和1.00 mL 氨氮标准使用溶液（相当于0.00 g、5.00 g、10.0 g 、20.0 g、40.0 g、60.0 g、80.0 g 和100.0 g 氮），分别置于10 mL 比色管中。加4.0 mL 乙酸钠-乙酸缓冲溶液（10.15）及4.0 mL 显色剂（10.16），加水稀释至刻度，混匀。置于100 水浴中加热15 min。取出用水冷却至室温后，移入1 cm 比色杯内，以零管为参比，于波长400 nm 处测量吸光度值，根据标准各点吸光度值绘制标准曲线或计算线性回归方程。3.4 试样测定吸取0.50 mL2.00 mL（约相当于氮100 g）试样溶液和同量的试剂空白溶液，分别于10 mL 比色管中。以下按12.3 自“加4 mL 乙酸钠-乙酸缓酸溶液（pH 4.8）及4 mL 显色剂”起操作。试样吸光度值与标准曲线比较定量或代入线性回归方程求出含量。(4）.数据分析试样中蛋白质的含量按式（2）进行计算。 式中：X 试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g）；c 试样测定液中氮的含量，单位为微克（g）；c0试剂空白测定液中氮的含量，单位为微克（g）；V1 试样消化液定容体积，单位为毫升（mL）；V2 制备试样溶液的消化液体积，单位为毫升（mL）；V3 试样溶液总体积，单位为毫升（mL）；V4 测定用试样溶液体积，单位为毫升（mL）；m 试样质量，单位为克（g）；0.005.0010.0020.0040.0060.0080.00100.0试样空白00.2050.3050.2520.2890.3840.7220.8680.1930.065V1=100ml V2=3ml V3=50ml V4=1.00ml m=0.392g标准曲线方程式：y=0.0071x+0.098将A样y =0.193代入可得x=c=13.380ug =13.3801006.38100500.3923110001000 =15.29g/100g4. 卤香干中铅含量的测定(GB5009.122010石墨炉原子吸收光谱法) 1.试剂和材料 除非另有规定，本方法所使用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。1.1 硝酸：优级纯。1.2 过硫酸铵。1.3 硝酸（11）：取50 mL 硝酸慢慢加入50 mL 水中。1.4 硝酸（0.5 mol/L）：取3.2 mL 硝酸加入50 mL 水中，稀释至100 mL。1.5硝酸（l mo1/L）：取6.4 mL 硝酸加入50 mL 水中，稀释至100 mL。1.6 铅标准储备液：准确称取1.000 g 金属铅（99.99%），分次加少量硝酸（1.5），加热溶解，总量不超过37 mL，移入1000 mL 容量瓶，加水至刻度。混匀。此溶液每毫升含1.0 mg 铅。1.7 铅标准使用液：每次吸取铅标准储备液1.0 mL 于100 mL 容量瓶中，加硝酸（2.6）至刻度。如此经多次稀释成每毫升含10.0 ng，20.0 ng，40.0 ng，60.0 ng，80.0 ng 铅的标准使用液。 2.仪器和设备2.1 原子吸收光谱仪，附石墨炉及铅空心阴极灯。2.2 马弗炉。2.3 天平：感量为 1 mg。2.4 干燥恒温箱。2.5 瓷坩埚。2.6可调式电热板、可调式电炉。 3分析步骤（1） 试样预处理1.1磨碎，过 20 目筛，储于塑料瓶中，保存备用。（2）试样消解 过硫酸铵灰化法：称取1 g5 g 试样（精确到0.001 g）于瓷坩埚中，加2 mL4 mL 硝酸（1.1）浸泡1 h 以上，先小火炭化，冷却后加2.00 g3.00 g 过硫酸铵（1.2）盖于上面，继续炭化至不冒烟，转入马弗炉，500 25 恒温2 h, 再升至800 ，保持20 min，冷却，加2 mL3 mL 硝酸（1.5），用滴管将试样消化液洗入或过滤入（视消化后试样的盐分而定）10 mL25 mL 容量瓶中，用水少量多次洗涤瓷坩埚，洗液合并于容量瓶中并定容至刻度，混匀备用；同时作试剂空白。（3） 测定3.1 仪器条件：根据各自仪器性能调至最佳状态。参考条件为波长283.3 nm，狭缝0.2 nm1.0 nm，灯电流5 mA7 mA，干燥温度120 ，20 s；灰化温度450 ，持续15 s20 s，原子化温度：1700 2300 ，持续4 s5 s，背景校正为氘灯或塞曼效应。3.2 标准曲线绘制：吸取上面配制的铅标准使用液10.0 ng/mL（或g/L），20.0 ng/mL（或g/L），40.0 ng/mL（或g/L），60.0 ng/mL（或g/L），80.0 ng/mL（或g/L）各10 L，注入石墨炉，测得其吸光值并求得吸光值与浓度关系的一元线性回归方程。3.3 试样测定：分别吸取样液和试剂空白液各10 L，注入石墨炉，测得其吸光值，代入标准系列的一元线性回归方程中求得样液中铅含量。1. 3.4 基体改进剂的使用：对有干扰试样，则注入适量的基体改进剂磷酸二氢铵溶液（4.8）（一般为5 L 或与试样同量）消除干扰。绘制铅标准曲线时也要加入与试样测定时等量的基体改进剂磷酸二氢铵溶液。 4.分析结果的表述试样中铅含量按式（1）进行计算。式中：X试样中铅含量, 单位为毫克每千克或毫克每升（mg/kg 或mg/L）；c1测定样液中铅含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）；c0空白液中铅含量，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V试样消化液定量总体积，单位为毫升（mL）；m试样质量或体积，单位为克或毫升（g 或mL）。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。结果及分析：所有吸光度为0，未检出分析（1）由于铅的标准溶液配制时未找到铅，所以使用了乙酸铅来代替，而使得得不出离子铅，从而使仪器检测不出数据。 （2）样品中也测不出数据，可能是在灰化过程中出现了问题。 (3)仪器可能出现问题。5.卤香干的感观分析某品牌卤制豆腐干感官评价结果：项 目外观形态色 泽风 味杂 质卤香干形状完整，厚薄均匀，无焦糊酱板色