血清胆固醇的测定.ppt

血清胆固醇的测定 余留海 2013.11.26,血清胆固醇的测定（氧化酶法）Assays for Serum Cholesterol,一、原理 二、测定方法 三、参考值 四、临床意义 五、方法学评价 六、注意事项 七、小结,一、原理,血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物。,胆固醇酯+H2O 胆固醇+脂肪酸 （CE胆固醇酯酶） 胆固醇+O2 4-胆甾+3-烯酮+H2O2 （COD：胆固醇氧化酶） H2O2+4-AAP+酚 H2O+醌亚胺（红色醌类化合物 ） （4-AAP： 4-氨基氨替比林） （POD：过氧化物酶） 红色醌类化合物生成量与样品中胆固醇含量成正比，与经过同样处理的胆固醇校准液进行比较，即可计算出样品中胆固醇的含量。,二、测定方法,1、试剂 R1：胆固醇酯酶（CE） 0.4KU/L 胆固醇氧化酶（COD） 0.2KU/L 过氧化物酶（POD） 5.0KU/L 4-氨基安替比林（4-APP） 0.5mmol/L R2: 酚 20.0mmol/L 胆酸钠 2.0mmol/L,二、测定方法 2. 加样,各管充分混匀置37水浴10分钟后，室温冷却测定,3. 分光光度计测定方法：波长505nm，以空白管调零，测定标准管和样品管吸光度值，按公式计算测定结果。 计算公式：Glu含量（mmol/L）= Cs 其中：Cs=5.22 mmol/L,三、参考值： 正常：5.17mmol/L 轻度增高：5.176.47mmol/L,四、临床意义：,1. 血清胆固醇升高：动脉粥样硬化、肾病综合征、肝细胞性黄疸、阻塞性黄疸及重症糖尿病等。 血清总胆固醇是是指血液中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。总胆固醇包括游离胆固醇和胆固醇酯，肝脏是合成和贮存的主要器官。胆固醇是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料，也是构成细胞膜的主要成分，其血清浓度可作为脂代谢的指标。指临床上将血总胆固醇增高称为高胆固醇血症。,血清总胆固醇水平分为三级：合适范围5.72mmol/L(220mg/dl)。边缘升高5.23-5.69mmol/L(201-219mg/dl)；过高值5.72mmol/L(220mg/dl)。 血清总胆固醇水平增高是导致冠心病的独立危险因素。血清总胆固醇越高，发生动脉粥样硬化的风险越大，时间也越早。血清总胆固醇每降低1%，发生冠心病的危险性可减少2%。但另一方面，血清总胆固醇降到多低合适？目前认为，将 血清总胆固醇保持在2.1-5.2mmol/L(90-200mg/dl)范围内较为合适。对已有动脉粥样硬化或冠心病者，应将胆固醇降至180mg/dl以下。,2.血清胆固醇降低：恶性贫血、溶血性贫血、甲状腺机能亢进、急性感染，营养不良等。 甲亢患者在发病期间其血清胆固醇水平往往明显低于正常值，或者属于临界值范围；当通过一段时间的有效治疗后，血清胆固醇又会逐渐回复至正常水平。其降低的机理是，甲亢导致甲状腺激素大量分泌，而甲状腺激素对脂肪的合成与分解有很强的促进作用，但是分解更明显。由此可知，当机体发生甲亢时，体内的胆固醇合成与分解排泄同时都有所增加，但分解排泄比合成更明显，而同时，甲状腺激素还通过增强腺苷环化酶cAMP系统的影响和致敏组织对儿茶酚胺、生长素等脂肪动员激素的作用而促进脂肪溶解。所以导致血清中的胆固醇会有所降低。,五、方法学评价,1. 线性范围： 0.0512.9mmol/L，r0.990 2. 精密度：CV 3.0%，批间差5.0%， 3. 准确度：相对偏差 10% 4. 试剂空白吸光度0.150（波长505nm，光径10mm） 5. 左旋多巴、尿酸、vitc、胆红素、谷胱甘肽等达一定浓度时可竞争过氧化氢使结果偏低 6. 半胱氨酸（促G生成）使结果偏高。,六、注意事项,1. 样品为空腹血清、血浆（肝素或EDT