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实验二 植物根尖细胞有丝分裂及染色体制片技术,一 实验目的,1 学习并掌握植物根尖有丝分裂玻片标本的制作方法。 2 观察并了解植物根尖细胞有丝分裂各个时期染色体的行为变化。,二 实验原理,植物生长旺盛的分生组织如根尖、茎尖、幼叶等都在进行着有丝分裂。取这些组织为材料，经过固定后迅速杀死细胞，并使细胞内的物质和生活状态得以保持，再经过解离、染色、压片等过程，可以迅速地将细胞分散附着于载玻片和盖玻片之间，在显微镜下就可以看到大量处于有丝分裂各个时期的细胞，并进行染色体行为的观察。,间期：一般持续时间比较长，是核内染色体DNA合成的过程，能够看到核的变化，如核仁体积增大、核内存在染色质，一般情况下看不到染色体。 前期：细胞核内染色体呈细丝状，在核内互相缠绕成团。核仁开始消失，核膜随之破裂。此时，染色体已经有两条染色单体所组成，只在着丝粒处连结。 中期：各染色体的着丝粒排列在赤道面上，两臂伸向赤道面的两旁。纺锤体完全形成，其一端与染色体的着丝粒相连接，另一端集中于细胞的极处。中期染色体高度浓缩，具有各物种染色体的典型形态，是染色体计数的最好时期。,后期：每一条染色体的着丝粒分裂，两条染色单体彼此分开形成两条子染色体，子染色体在纺锤丝的牵引下，分别移向两极。 末期：移向两极的染色体逐渐松散成染色质，纺锤丝逐渐消失，在赤道面上开始出现细胞板，把一个细胞分隔成两个子细胞，核膜重新形成，核仁出现，逐渐进入间期状态。,三 实验材料,洋葱(2n=16)的鳞茎,四 实验器具及药品,药品：蒸馏水、卡诺氏固定液(无水乙醇：冰醋酸=3:1)、45%醋酸、 1N盐酸、秋水仙素、改良苯酚品红染色液或1%醋酸洋红染色液等。 用具：显微镜、刀片、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、酒精灯、吸水纸等。,1 根尖培养 将洋葱鳞茎下部浸入水中，当根长出1-2cm时，切下根尖。 2 预处理 将剪取的洋葱根尖(0.5-1cm)放入0.1%秋水仙素溶液中室温下处理3-4小时，然后用水冲洗几次。 3 固定 将经过预处理的根尖放入卡诺氏固定液中固定3-24小时。,五 实验步骤,4 解离 将固定液中的洋葱根尖取出，在蒸馏水中洗净，然后放入1N的盐酸中，室温下处理10-15min。目的是使胞间层的果胶物质解体，使细胞易于分散，便于压片。 5 软化 将解离好的根尖冲洗后，放入45%的醋酸中软化10min左右。 6 染色 将洋葱根尖置于载玻片上，用小刀片将根冠和伸长区切除，只留下1-2mm左右的生长区，然后滴一滴1%醋酸洋红染色液或改良苯酚品红染色液，染色5-10min。,7 压片 加盖玻片，用手指垂直瞬间用力压片(切勿移动盖玻片)，这样得到的染色体才能在一个水平面上。为了使细胞质透明增加染色效果，将载玻片在酒精灯上微微加热，吸去多余的染液。最后用吸水纸将周围染色液吸干。 8 镜检 先在低倍镜下找到细胞，找到分裂相后再换成高倍镜，仔细观察有丝分裂各个时期染色体的行为。,六
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