HIV检测质量保证杭州.ppt

HIV检测的质量控制 中国CDC性艾中心 肖 瑶 ,规范化的实验室检测,全国艾滋病检测技术规范， 2009修订版 艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准 实验室安全通用要求 临床基因扩增实验室管理暂行办法 检测和校准实验室能力认可准则 CD4+T 淋巴细胞检测质量保证指南 HIV1病毒载量检测及质量保证指南 HCV检测指南？ 婴幼儿HIV检测指南？,02年 03年 04年 05年 06年 07年 抗体 CD4 病毒载量 亚型 BED 耐药,2009,2006,2006,全国艾滋病检测实验室质控体系发展,2006,2008,质量控制,质量控制：是指为确保实验工作正常进行而在每一次实验过程中必须采取的各种措施。以保证检验结果达到允许的准确度。,实验前质量控制 正确的标本采集和处理 正确及时的运送样品 实验前正确地处理和保存样品 实验中质量控制 选择正确的检测方法 质控品的准备 开展质控图质控Levey-Jennings （或“即刻法”质控）。 实验后质量控制 实验后准确填写检验结果； 及时发出报告； 正确地解释检验结果的临床意义。,质量控制,实验前质量控制,正确的标本采集和处理 检测目的（ 抗体（BED）， VL， CD4 ， DBS等） 抗凝和不抗凝 数量 正确及时的运送样品 运输包装 检测目的 检测方法,实验前质量控制,运输采用WHO提出的三级包装系统 第一层容器：装样品，要求防渗漏 第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。 第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒,观察窗,温度计,实验前质量控制,正确地保存样品 长期 （ 血清， 血浆， 全血），短期，不保存 问题： 抗体： 短期（ ？ ）保存28C 。 长期（？）度保存 CD4： 全血最长时间（ ？ ） 处理好样品怎样保存？ VL： （？） 分离血浆 长期 （？） 中期（？） 短期（？） 保存时间 冻溶不能超过（？） 次,实验前质量控制,选择正确的检测方法 不同检测方法对样品有不同要求 检测方法提高准确性 质控品的准备 商用和自制 开展质控图质控（Levey-Jennings ，或“即刻法”质 控）。,中部三省27个VCT点10310名咨询者样本检测结果,第四代EIA试剂的使用 现场调研时发现，在CDC实验室工作中存在着HIV漏检的潜在危险因素，应引起高度重视。 许多血站开始开始使用第四代EIA，CDC仍然用第三代EIA复检，因此，有导致窗口期漏检的可能。 建议：确证实验室对来自血站的筛查阳性的样品使用第四代试剂进行复检。,HIV 发病率研究的方法,实验中质量控制 质控图 1、抗体检测 2、抗原检测 3、病毒载量检测 4、免疫表型（CD4T淋巴细胞）的检测,EIA检测质控,室内质控 内部对照： 试剂盒提供 外部对照： 自己制备或购买 用质控图监测变化趋势,试剂盒内部对照 试剂盒内部对照质控品阳性和阴性对照血清用于判断每次实验的有效性，但不能作为室内质控品使用。每一次检测临床样品时，必须有试剂盒内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。内部对照结果无效，必须重新试验。 室内质控品 为非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。也可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（Cut-off）的23倍为宜。外部质控品的是判断该批临床样品检测的有效性，因此，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。室内质控品可以是商品或实验室自行制备。,EIA质控图,算术平均值X：至少20天测得的外部对照血清S/CO 值结果的平均值 标准差S ：是描述样品于均值之间离散程度的指标， 是与对照血清S/CO值有关的预测范围。 变异系数CV：是反映各次 S/CO值相对于均值离散程 度 的。可以用来衡量检测的重复性和 精密 性。,实验中质量控制质控图,Westgard 标准 多标准质控,13S标准,均值,+1s,+2s,+3s,-3s,-2s,-1s,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,22S 标准,均值,+1s,+2s,+3s,-3s,-2s,-1s,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,41S标准,均值,+1s,+2s,+3s,-3s,-2s,-1s,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,R4S标准,均值,+1s,+2s,+3s,-3s,-2s,-1s,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,CD4T淋巴细胞检测质控,室内质控： 内部对照： 厂家提供 外部对照： 购买 用质控图监测变化 趋势,流式细胞仪检测质控图,质控图,质控图,VL 质控,室内质控：每次实验需同时使用试剂盒内的质控品以及一个HIV-1 RNA为5000-15000拷贝/毫升的外部质控品 内部对照： 厂家提供 外部对照： 自制， 个别实验室使用,实验后质量控制,实验后准确填写检验结果； 及时发出报告； 正确地解释检验结果的临床意义。,抗体检测中的问题,初筛实验中的假阳性 血液恶性病变 自身免疫性疾病 多发性胆汁型肝硬化 酒精性肝炎 疫苗接种（流感，乙肝） 多发性骨髓瘤 肾移植或慢性肾衰竭 疟疾或丝虫病 其他,抗体检测中的问题,初筛实验中的假阴性 窗口期 免疫移植 换血输血 恶性肿瘤 免疫功能丧失（B细胞功能缺损） 其他（试剂或操作原因）,影响CD4细胞数的因素,1. 季节性和昼夜差异：如每日最低水平在中午12点30分，峰值在下午8点30分（JAIDS，1990，3：144）。 2. 肾上腺皮质激素对CD4细胞数有较大的影响，短期服用可能使CD4从900 /ul下降到300 /ul.Clin immunopath,1983,28:101). 3. 合并感染HTLV-1的病人可能造成CD4的假性升高（Ann Intern Med,1993,119:55). 4. 急性改变可能由于淋巴细胞在外周循环和骨髓、脾及淋巴结中的再分布(Clin Exp immunol,1990,80:460)。,影响CD4细胞数的因素,免疫缺陷状况也可以有辅助性T-淋巴细胞数量减少的结果: - 丙球蛋白缺乏症 - 胸腺发育不全 (DiGeorge氏综合症) - 严重的联合免疫缺陷,影响CD4细胞数的因素,检测的仪器,PT与室内质控,室内质控是对检验结果的即时性