病理检验技术ppt课件

病理检验技术 组织制片技术,病理检验,病理检验属于形态学检验，主要通过肉眼观察有关组织或器官的形态改变，借助显微镜观察组织结构和细胞形态的细微变化，对疾病做出病理学诊断。,病理组织制片技术,病理组织制片技术一般包括以下基本技术流程：取材、固定、洗涤、脱水、透明、浸蜡（透蜡）、包埋、切片、贴片、烤片、染色、封片等。这些技术流程相互联系、互为影响，每一项技术处理是否得当都直接影响切片质量。,基本步骤,收集标本（活检、尸检、动物实验） 取材固定切块1*1*0.3 自来水冲洗(1-2h) 组织脱水（75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇I、95%乙醇II 、100%乙醇I 、100%乙醇II ，低浓度乙醇2-4h，高浓度乙醇1h） 组织透明（二甲苯30） 浸蜡（软、硬蜡、大组织4-16h）组织2-4h 包埋 冷却修蜡块 焊蜡块 切片 贴片 烤片 切片脱蜡 切片染色（常规HF和瑞特）,一、取材,按照病理检查的目的和要求，切去适当大小和数量的组织块，用于制作组织切片的过程，称为取材 注意事项：1.避免组织结构变形 2.组织块大小适当 3.及时取材 4.标明包埋方向 5.染色包裹小标本 6.充分暴露病灶 7.确定取材部位 8.清除多余组织 9.重复取材（补材） 10.认真核对,二、固定,将组织浸入某些化学试剂，使组织细胞内所含物质尽量保持在生活状态时的形态结构和位置的过程，称为固定 固定方法： 1浸泡固定法 2.注射、灌注固定法 3.微波固定法 4.蒸汽固定法 常用固定液有：甲醛（10%） 乙醇（80%） 乙酸（0.3%5%）,三、洗涤,用水或乙醇等将组织经过固定处理后,未与组织结合的固定液及沉淀物清洗掉的过程，称为洗涤 洗涤的方法：1含水固定液的洗涤方法；2含乙醇固定液的洗涤方法；3特殊固定液的洗涤方法,四、脱水,将组织内的水分用某些化学试剂置换出来的过程称为脱水。所使用的化学试剂称为脱水剂 脱水的目的 组织块经固定和水洗后，含有大量水分，而水与苯、二甲苯等透明剂不混溶，所以透明前需用乙醇吧组织中的水分置换出来，为透明做好准备 常用脱水剂：乙醇、丙酮、丁醇、异丁醇、叔丁醇、正丁醇、环己酮 脱水方法；一般吧脱水剂配成各种浓度，自低到高浓度依次进行，使组织中所含水分逐渐减少直至被脱水剂取代,五、透明,使用某些化学剂（如二甲苯等）将组织中的脱水剂置换出来，以利于浸蜡和包埋，因组织块浸入这些试剂后常呈半透明状，故称透明（或媒浸）。使用的化学药剂称为透明剂 透明剂：二甲苯：是最为常用的一种透明剂，它能与酒精，丙酮相混合，又是石蜡的溶剂。在透明过程中，组织继续发生硬化，由于二甲苯对组织的收缩性强，作用迅速，因此，组织在二甲苯中时间不宜过长，否则组织容易变脆变硬，一般是达到组织的透明为度，小块组织在半至一小时内透明。,六、浸蜡,组织经媒剂的透明作用之后，移入熔化的石蜡内浸渍，石蜡逐渐浸入组织间隙，取代透明剂，这一程序就叫浸蜡。根据所用石蜡的熔点，浸蜡需要能够保持于5460.C温箱内进行。 为了尽可能排除透明剂，浸蜡可以分两级或三级进行。以熔点较低的软石蜡作为第一步，然后再换为熔点较高的石蜡作为第二步，第三步。浸蜡时间14小时，或更长，并使之过夜则较易切割,七、包埋,就是将已经经过固定，脱水，透明，浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出置入充满熔融石蜡的包埋框内，包埋成块，使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却，这个程序称为包埋。包埋剂凝固后，进一步加强了组织的硬度和韧度而便于进行切片。,1. 组织取材2毫米厚度，固定于福尔马林数小时后再换以新鲜福尔马林固定数小时。 2. 组织流水冲洗612小时。 3. 70酒精24小时。 4. 85酒精24小时。 5. 95酒精（）24小时。 6. 95酒精（）24小时。 7. 100酒精（）24小时。 8. 100酒精（）2小时。 9. 二甲苯（）0.51小时。 10. 二甲苯（）0.5小时。 11. 浸蜡（）2小时。 12. 浸蜡（）2小时。 13. 组织包埋。,八、切片,切片的步骤： 1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内，调整到稍离开切片能够切到的位置上，注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。 2、再调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋紧刀架，固定好机头。 3、根据需要调整切片厚度。 4、摇动切片机手轮先进行修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再进行切制。 5、实践中可用右手转动切片机手轮，左手用毛笔托起蜡片，协调地进行切片操作。 6、切下的切片带，一端用镊子轻轻拉起，应尽可能将切片带拉直展开，用毛笔将切片带从刀口向上挑起，拉下切片带，然后轻拖铺于恒温水面上。,九、贴片,将单张或数张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，铺于恒温水中，立即用毛笔轻轻拉展以切片无皱褶为最好。如有皱褶时用镊子细心地逐个轻轻拨开，注意不可拨破组织。然后分开每张切片，选取其中最完整的，没有皱褶的切片。,十、烤片,在制片时,需要将组织切片放在烤片机上,使组织与载玻片牢牢的粘合在一起 烤片是病理组织制片中的一个重要环节。烤片的好坏，会影响到染色的质量和成败。,十一、染色,染色就是利用染料在组织切片上给与颜