《选修一考点清单》doc版.doc

人教选修一 知识清单专题一 传统发酵技术一、制作果酒1.原理：酵母菌在 无氧 的条件下能进行酒精发酵。+能量3发酵条件(1)温度控制在1825 ，最适为 20 。(2)pH呈 酸性（4.05.8） 。(3)时间：1012天4制作流程图：挑选水果冲洗 榨汁 酒精发酵果酒。二、制作果醋1原理：醋酸菌在 有氧 的条件下进行醋酸发酵。糖源充足时，将糖分解成醋酸，当缺少糖源时，将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。+能量3发酵条件(1)最适温度为 3035 。(2)适时通气。(3)控制 糖源 供应。(4)pH呈 酸性（5.46.3） (5)时间：78天4制作流程：挑选水果冲洗榨汁酒精发酵 醋酸发酵果醋。5.果酒和果醋制作的注意事项1）材料的选择与处理选择新鲜的葡萄，榨汁前先冲洗后去枝梗，以防葡萄汁流失及污染。2）防止发酵液被污染(1)榨汁机要清洗干净并晾干。(2)发酵瓶要洗净并用70%酒精消毒。(3)装入葡萄汁后要封闭充气口3）发酵条件的控制(1)葡萄汁装入发酵瓶时，要留约1/3空间，目的是先让酵母菌进行有氧呼吸快速繁殖，耗尽O2后再进行酒精发酵；防止发酵过程中产生的CO2造成发酵液的溢出。(2)严格控制温度：18 25 利于酵母菌的繁殖和酒精发酵；30 35 利于醋酸菌的繁殖和醋酸发酵。(3)充气：酒精发酵为无氧发酵，需封闭充气口；醋酸发酵为有氧发酵，需适时通过充气口充气。三、制作腐乳1原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的 肽和氨基酸 ；脂肪酶可将脂肪水解为 甘油和脂肪酸 。2制作流程图：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加 卤汤 装瓶密封。3影响品质的因素：豆腐含水量、盐的用量、卤汤中酒的含量。4制作腐乳注意事项(1)注意盐用量。以豆腐块与盐的质量比为51最合适。豆腐块分层放置，分层加盐，瓶口表层的盐要铺厚一些。盐浓度低，不足以抑制微生物生长，浓度过高，影响口味及品质，表层铺盐厚些是为防止杂菌从瓶口进入。(2)豆腐含水量以70%为宜。毛霉为异养需氧型真菌，若含水量过高，影响毛霉的有氧呼吸；若含水量过低，则不利于毛霉的生长，毛霉的代谢也离不开水。(3)配制卤汤时酒量的控制 加酒的目的之一是杀死微生物。如果过少，达不到杀死微生物的目的，导致豆腐腐败；若过多，不但杀死了微生物，而且会因酒精度过高抑制了酶的活性，从而影响腐乳的成熟，同时还会因酒精含量过高而影响腐乳的风味。一般应控制在12%左右。(4)防止杂菌污染。所用器械要沸水消毒或高压灭菌，加入卤汤和辅料后，将瓶口酒精灯加热灭菌后再密封。(5)控制适宜温度。毛霉的最适生长温度为15 18 ，保持其适宜温度，可缩短发酵时间。四、制作泡菜1原理：利用 乳酸菌 在无氧条件下将葡萄糖分解成 乳酸 。+能量3制作流程图 4影响品质的因素：泡菜坛的选择，腌制的条件如 腌制时间 、温度、 食盐用量 。 5泡菜制作的注意事项 (1)泡菜坛要选择透气性差的容器，以创造无氧环境，有利于乳酸菌发酵，防止蔬菜腐烂。(2)盐水按水盐质量比4 1配制，煮沸冷却后待用。煮沸有两大作用，一是除去水中氧气，二是杀灭盐水中的其他细菌。(3)材料装坛时预留1/4空间，不宜过满。(4)封坛时要注满水，控制严格密封，以保证乳酸菌所需的无氧环境，并注意在发酵过程中经常补水。(5)注意控制温度、食盐水浓度和发酵时间。温度过高，食盐水浓度低于10%，腌制时间过短，会造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量升高，亚硝酸盐含量在10天后开始下降。食盐水浓度过高，则会使泡菜口味不佳，甚至影响乳酸菌的发酵。五、测定亚硝酸盐含量 1原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与 对氨基苯磺酸 发生重氮化反应后，与N1萘基乙二胺盐酸盐 结合形成 玫瑰红 色染料，将显色样品与已知浓度的 标准液 进行目测比较，大致估算出食品中亚硝酸盐的含量。 2测定方法：配制溶液制备标准显色液制备样品处理液比色。3测定亚硝酸盐含量的注意事项(1)标准显色液、样品处理液的制备中计量要精确。(2)制备样品处理液时，氢氧化铝乳液的作用是吸附样品滤液中的杂质，使滤液变得无色透明，便于观察颜色变化。专题二：微生物的培养与应用一、培养基1概念：人们按照微生物对 营养物质 的不同需求，配制出的供其 生长繁殖 的营养基质。2营养构成一般都含有 水 、 碳源 、氮源、 无机盐 、生长因子，还需满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及O2的要求。3.【易误警示】(1)微生物最常利用的碳源是糖类(特别是葡萄糖)，常利用的氮源是氨盐、硝酸盐。(2)在微生物所需要的化合物中需要量最大的是碳源。(3)微生物之所以需要补充生长因子，是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。3.培养基的营养构成营养物质定义作用主要来源碳源能提供碳元素的物质构成生物体的物质，异养生物的能源物质无机物：CO2、NaHCO3有机物：糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等氮源能提供氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物无机物：N2、NH3、氨盐、硝酸盐有机物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长不可少的微量有机物酶和核酸的成分维生素、氨基酸、碱基等4培养基的类型、用途划分标准种类特点应用物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂观察微生物的运动、分类鉴定固体培养基微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏化学成分天然培养基含化学成分不明的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确或用一定化学物质配制分类、鉴定用途选择培养基添加某物质，抑制杂菌生长，促进所需微生物生长培养分离出特定微生物（培养酵母菌和霉菌，加入青霉素。培养金黄色葡萄球菌加入高浓度食盐。）鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂鉴别微生物（用伊红-美蓝培养基鉴别大肠杆菌，菌落呈深紫色，并带有金属光泽）二、无菌技术1消毒 (1)特点：使用较为 温和 的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物 (不包括芽孢和 孢子 )。 (2)常用方法：煮沸消毒法、巴氏消毒法 、化学药剂消毒法。2灭菌(1)特点：指使用强烈的理化因素杀死物体内外 所有的微生物 包括芽孢和孢子。(2)常用方法： 灼烧 灭菌、干热灭菌、 高压蒸汽 灭菌。3.(1)消毒与灭菌的区别灭菌方法条件结果常用方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法，还有化学药剂(如酒精、氯气、石炭酸等)消毒、紫外线消毒灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌4.【易误警示】(1)芽孢是细菌发育后期形成的休眠体，耐高温，故消毒仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物而不包括其芽孢和孢子。(2)灭菌和消毒的实质大都是使微生物的蛋白质或核酸发生变性。5.实验室常用灭菌方法的比较灭菌方法适用对象所需条件灭菌时间灼烧灭菌接种的金属工具(如接种针、接种环)在酒精灯的火焰外焰灼烧直至烧红干热灭菌耐高温需干燥的物品(如玻璃器皿、金属用具)干热灭菌箱内160170 12 h高压蒸汽灭菌培养基100 kPa；121 1530 min三、微生物培养的基本技术1配制培养基：称量混合溶化调pH分装包扎。2灭菌：加水加培养基密封排冷气维持压力取出倒平板(或搁置斜面)。3.接种(1)接种过程：洗净双手点燃酒精灯接种贴标签。(2)接种工具：包括 接种环 、涂布器。(3)接种方法：平板划线法、稀释涂布平板 法。(4)注意事项：整个操作过程都要在酒精灯火焰旁完成。4培养：接种后的培养皿放入恒温箱内培养。四、菌种保藏1临时保藏(1)操作：采用 固体斜面 培养基，菌落长成后，放入4 冰箱中保藏，以后每36个月，转移一次新的培养基。(2)缺点：保存时间 不长 ，菌种易被 污染 或产生变异。 2长期保存法： 甘油管藏 法，放在20 下保存。五、微生物的纯化培养方法：平板划线法、稀释涂布平板法。方法平板划线法稀释涂布平板法注意事项(1)接种环灼烧目的：第一次划线前：接种环上的微生物，避免污染培养物每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者(2)灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连(4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破(1)稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1 cm2 cm处(2)涂布平板时涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体目的在培养基上形成单个菌种繁殖而来的子细胞群体菌落。培养平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好的挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染。六、土壤中分解尿素细菌的分离与计数1分离的原理 (1)土壤中的细菌之所以能够分解尿素，是因为它们体内能合成脲酶。这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。 (2)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。（3）土壤中分解尿素的细菌含有尿素分解酶，能将尿素琼脂培养基中的尿素分解生成氨，氨溶于水变成氢氧化铵，导致培养基变成碱性，使 酚红指示剂 呈现红色。2统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法 原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。 方法：用计数板计数。 缺点：不能区分死菌与活菌（也可以用亚甲基蓝染色，活菌无色，死菌呈蓝色）(2)间接计数法(活菌计数法) 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 操作a设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。3细菌分离与计数的实验流程土壤取样样品稀释取样涂布微生物培养观察并记录结果细菌计数。4.【易错警示】（1）.菌种筛选a.培养基： 选择培养基 。b.特点： 尿素 是唯一氮源。（2）统计菌落数目a.计算方法 稀释涂布平板法 。 显微镜直接计数 。 （3）设置对照A.对照实验：是指除了 被测试的条件 外，其他条件都相同的实验。B.主要目的：排除实验组中 非测试因素 对实验结果的影响。七、分解纤维素的微生物的分离纤维素分解菌的筛选1土壤取样：选择富含 纤维素 的环境。2将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上(1)制备鉴别培养基：主要碳源水溶性的 CMCNa （羧甲基纤维素钠）；不溶于水的微晶纤维素（Avicel）。(2)刚果红染色法先培养 微生物，再加入刚果红进行颜色反应。 倒平板 时加入刚果红(CR)。3进一步鉴定(1)为确定得到的菌是否是纤维素分解菌，还需进行 发酵产纤维素酶 的实验。(2)测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的 葡萄糖 进行定量测定。4.纤维素酶是一种复合酶，它包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，具有催化分解纤维素的作用，其作用过程如下：5纤维素分解菌的筛选原理(1)刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。(2)纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素，从而使菌落周围形成透明圈。6土壤中纤维素分解菌的筛选(1)方案土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落。(2)选择培养的目的：增加纤维素分解菌的浓度，确保能够从样品中分离到所需要的微生物。(3)涉及到的微生物技术主要有：培养基的制作、无菌操作技术、稀释涂布平板法、选择培养基的作用、土壤取样等。专题三 植物的组织培养技术一、菊花的组织培养1理论基础：植物细胞的 全能性 。2基本过程：3影响因素(1)材料： 种类 、年龄、保存时间长短等(2)营养无机营养a大量元素。b 微量元素 。有机营养： 维生素 、甘氨酸、 烟酸 、肌醇以及蔗糖等。(3)激素： 生长素 和细胞分裂素。(4)pH： 5.8 左右。(5)温度：1822 。(6)光照：每日光照12 h。4实验操作步骤：制备MS培养基外植体消毒 接种 培养 移栽 栽培二、月季的花药培养1理论基础：花粉具有 全能性 。2花粉发育过程： 四分体时期 、单核期、双核期 等阶段。3产生花粉植株的两种途径：4操作关键 (1)选材 要选择 初花期 、 完全未开放 的花蕾。 花粉最好处于 单核期细胞核由中央移向细胞一侧的时期 ，花药培养的成功率最高。 确定花粉发育时期最常用的方法是 醋酸洋红法 和 焙花青铬矾法 ，可以将细胞核分别染成 红色 和 蓝黑 色。(2)接种 剥离花药尽量不损伤花药，否则接种后容易 从受伤部位产生愈伤组织。 要 彻底去除花丝 ，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或 胚状体 的形成。 (3)培养：花药培养一段时间后开裂， 长出愈伤组织 或释放出胚状体。要将前者及时转移到分化培养基上，如释放出胚状体，要尽快在花药开裂后，将 幼小植株分开 ，分别移植到新的培养基上。三影响植物组织培养的因素(1)内因：植物的种类，同一植物材料的年龄、保存时间的长短等。(2)外因营养a矿质元素。b有机物。调节剂(生长素、细胞分裂素)a使用顺序不同结果不同。b两者用量比例不同发育方向不同。环境条件：温度、pH、光照等。【易误警示】一旦发现培养物被污染，特别是真菌性污染，一定不要打开培养瓶。应先将被污染的培养瓶统一放在高压蒸汽锅内进行高压蒸汽灭菌，然后再打开培养瓶进行清理。四实验操作中应注意的几个问题(1)材料的选取：菊花的组织培养实验中，应选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝；月季花药的培养实验中，应选择花粉发育过程中的单核靠边期的花粉进行培养。 (2)外植体消毒：所用消毒剂为体积分数为70%的酒精和质量分数为0.1%的氯化汞溶液，所使用的清洗液是无菌水。 (3)培养过程：在初期，菊花的组织培养需光照，月季花药的培养不需光照；而在后期均需光照。五、植物激素在组织培养过程中的重要作用生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，其作用及特点为：激素使用实验结果使用顺序先生长素后细胞分裂素有利于细胞分裂，但细胞不分化先细胞分裂素后生长素细胞既分裂也分化生长素与细胞分裂素同时使用分化频率提高生长素用量与细胞分裂素用量的比例该比值高时利于根的分化，抑制芽的形成该比值低时利于芽的分化，抑制根的形成该比值适中时促进愈伤组织的生长专题四 酶的研究与应用一、酶的制备1对于细胞内酶：用 捣碎机、研磨器 等机械将生物组织细胞破碎，使酶从活细胞中释放出来，进入细胞外的溶液中，经 过滤 、离心制备成 粗酶液 。2对于分泌到细胞外的酶：直接从分泌物或细胞外的组织间隙中提取，提取过程中注意温度、 pH 等多种环境因素对酶活性的影响。3.酶活力测定的原理：通常以单位时间内，单位体积中反应物的 减少量 或产物的增加量来表示。二、酶的应用果胶酶1作用：能够分解果胶为 可溶性的半乳糖醛酸 ，使浑浊的果汁变得澄清。2组成：并不特指某一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、 果胶分解酶 和果胶酯酶。三、加酶洗衣粉1常用种类： 蛋白酶、脂肪酶、 淀粉酶 和纤维素酶，其中应用最广泛，效果最明显的是碱性蛋白酶和碱性 脂肪酶 。2去污机制(1)碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有的大分子蛋白质 水解成可溶性的 氨基酸 或小分子肽，使污物从衣物上脱落。(2)脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶也能将大分子 脂肪 、淀粉和 纤维素 水解为小分子物质。3酶制剂特点：能够耐酸、耐碱、忍受 表面活性剂 和较高温度，并且通过特殊的化学物质将酶层层包裹，与洗衣粉其他成分隔离。四、酶的应用1固定化酶(1)应用原理：将酶固定在不溶于水的载体上，使酶既易催化反应，又易于回收，可以重复使用。异构固定化酶反应柱：酶固定在一种 颗粒状 载体上，再将这些酶颗粒装到柱内，柱子底端装上分布着许多小孔的 筛板 ，酶颗粒无法通过小孔，而反应溶液却能自由出入。生产过程：将葡萄糖溶液从反应柱的上端 注入，使葡萄糖溶液流过反应柱，与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成果糖，从反应柱 下端 流出。反应柱优点：能连续使用半年，大大降低了 生产成本 ，提高了果糖的产量和 质量 。2固定化细胞技术(1)概念：固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学的方法将酶或细胞固定在 一定空间内 的技术。(2)方法包埋法：将酶或细胞包埋在 多孔载体 的细微网格里。化学结合法：将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到 载体 上。物理吸附法：将酶吸附到 载体表面 。(3)固定化细胞优点：与固定化酶相比，制备成本 更低 ，操作更容易，酶的活性高且稳定。(4)应用：固定化酵母细胞发酵、固定化乳糖酶制备乳糖等。五.对温度、pH影响酶活性及酶用量的探究实验流程1探究温度对酶活性的影响设计实验方案：动手实验：【易误警示】(1)制取苹果泥时，可先将苹果切小块放入榨汁机，再加适量水搅拌。(2)不同温度下的苹果泥和果胶酶共同水浴时应在试管内温度稳定后再混合。(3)要探究较准确的最适温度需再设更小的温度梯度差。2.探究pH对酶活性的影响将上述反应条件中温度变化对比实验改为pH变化就可以成为研究pH对酶活性的影响实验了。例如，温度不变，设计pH分别为5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0的几组对照实验。【易误警示】(1)最好用上述实验测试出的最适温度。(2)溶液的pH可用NaOH溶液和HCl进行调节。3探究果胶酶的用量将上述研究温度影响实验的变量改为酶的用量不同，使温度和pH都控制在最适宜的条件下，反应控制在一定时间内，果泥用量一致。【易误警示】(1)在用果胶酶处理果泥时，为了使果胶酶能充分地催化反应，应用玻璃棒不时地搅拌反应混合物。(2)实验时自变量可以是不同浓度的果胶酶溶液也可是同一浓度的不同体积。4实验结果(1)温度与酶活性的关系(2)pH与酶活性的关系(3)榨出的果汁与果胶酶用量的关系(或反应速率与酶用量的关系)六、探究不同种类的加酶洗衣粉的洗涤效果1实验原理：酶的催化作用具有专一性，复合酶洗衣粉加入的酶制剂种类较多，与单一加酶洗衣粉相比，对各种污渍都有较好的洗涤效果。2实验变量(1)自变量：不同种类的加酶洗衣粉(2)无关变量：其他条件相同且适宜(如温度、pH等)(3)实验步骤步骤烧杯编号注入自来水500 mL500 mL500 mL加入物质(相同、等量)奶渍布奶渍布奶渍布控制水温37 37 37 加入洗衣粉(等量)蛋白酶洗衣粉复合酶洗衣粉脂肪酶洗衣粉用玻璃棒搅拌5 min5 min5 min观察实验现象七、固定化实验中的有关问题1物质(1)蒸馏水目的：溶解、定容；作用：防止离子影响，不用自来水。目的：冲洗；作用：除去凝胶珠表面多余CaCl2溶液。(2)CaCl2：使电荷相互吸引，形成更大胶体颗粒，用于海藻酸钠的聚沉。2溶解海藻酸钠(1)小火间断加热，防焦糊；冷却后加入酵母菌。(2)浓度适中过高，很难形成凝胶珠；过低，凝胶珠包埋酵母菌少，影响实验效果。(3) 对照组：利用海藻酸钠制成不含酵母菌的凝胶珠作为对照组。3直接使用酶、固定化酶、固定化细胞三者的异同直接使用酶固定化酶固定化细胞酶的种类一种或几种一种一系列酶常用载体无高岭土、皂土、硅胶、凝胶明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺制作方法无化学结合固定化、物理吸附固定化包埋法固定化是否需要营养物质否否是催化反应单一或多种单一一系列反应底物各种物质(大分子、小分子)各种物质(大分子、小分子)小分子物质缺点(1)对环境条件非常敏感，易失活(2)难回收，成本高，影响产品质量不利于催化一系列的酶促反应反应物不易与酶接近，尤其是大分子物质，反应效率下降专题五 DNA和蛋白质技术一、血红蛋白的提取和分离1凝胶色谱法：也称 分配色谱法 ，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。2电泳(1)概念：电泳是指 带电粒子 在电场的作用下发生迁移的过程。(2)特点：电泳利用待分离样品中各种分子 带电性质 的差异以及分子本身的大小、 形状 的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。比较如下：方法原理凝胶色谱法根据相对分子质量的大小分离蛋白质电泳法各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同来分离蛋白质。3实验操作 (1)样品处理：通过红细胞的洗涤、 拌搅 、离心等操作收集到血红蛋白溶液。 红细胞的洗涤：除去杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化；血红蛋白的释放：使红细胞破裂，血红蛋白释放出来；分离血红蛋白溶液：经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来，便于下一步对血红蛋白的纯化。(2)粗分离：通过透析去除血红蛋白溶液中的 相对分子质量 较小的杂质。(3)纯化：通过 凝胶色谱法 分离相对分子质量不同的蛋白质进行纯化。 (4)纯度鉴定：一般用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。【易误警示】相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，而相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动，迁移速度快，先分离出来。因此蛋白质分子彼此分离。二、PCR技术扩增DNA片段1PCR技术(1)PCR： 多聚酶链式反应 的简称，是一种体外迅速扩增 DNA片段 的技术。(2)扩增方向：从子链的5端向 3端延伸。(3)引物特点：是一小段 RNA 或DNA，能与DNA母链的一段碱基序列互补配对，用于PCR的引物长度通常为 2030 个核苷酸。(4)原理： DNA复制 原理。(5)条件：DNA模板、分别与两条模板链相结合的两种 引物 ，四种脱氧核苷酸、耐热的 DNA聚合酶 ，同时控制温度。2过程(1)变性：当温度上升到 90 以上时，双链DNA解旋为单链。(2)复性：温度下降为50 左右时，两种 引物 通过碱基互补配对与 两条单链DNA 结合。(3)延伸：当温度上升到72 左右时，四种脱氧核苷酸在 DNA聚合酶 的作用下，根据 碱基互补配对 原则合成新的DNA链。3结果：PCR一般要经历三十多次循环，DNA聚合酶只能特异性地复制处于 两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈 指数即2n扩增。4细胞内DNA复制与PCR反应的比较（见右表）比较项目体内复制PCR反应解旋在解旋酶作用下，细胞提供能量，部分解开加热至90 ，双链全部解开，不需解旋酶引物一小段RNA可以是RNA或单链DNA分子片段合成子链在引物基础上，一条链连续合成，另一条链分段合成分别从两条链的引物端开始，都是连续合成，控制温度72 特点边解旋边复制，半保留复制体外迅速扩增Taq DNA聚合酶不需要需要循环次数受生物体自身控制30多次产物完整DNADNA片段相同点生物体内的DNA复制和PCR体外DNA扩增都需要模板、四种脱氧核苷酸，且都需要在一定的缓冲溶液中进行【易误警示】(1)DNA聚合酶的特性，只从DNA的3端开始延伸DNA链，而不能从头合成，故DNA复制需引物。(2)子链的延伸从引物3端开始，所以DNA的合成方向是子链的5端3端。三、DNA的粗提取与鉴定1基本原理(1)血细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和核膜的破裂，据此可得含核DNA的溶液。(2)DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最低。(3)DNA不溶于酒精溶液；不被蛋白酶所水解；可被二苯胺染成蓝色。2方法目的方法目 的溶于NaCl溶液中并稀释(1)NaCl溶液物质的量浓度为2 mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质(2)当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白质和其他杂质加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质加入冷却酒精(95%)DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质加入二苯胺，并沸水浴鉴定DNA(1)实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA，第二次目的是稀释NaCl溶液，使DNA从溶液中析出。(2)预冷的酒精溶液具有以下优点抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解。降低分子运动易于形成沉淀析出。低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。【易误警示】本实验用鸡血细胞作实验材料，不能用哺乳动物的成熟红细胞，原因是哺乳动物的成熟红细胞内无细胞核，但它可以作为血红蛋白提取和制备细胞膜的理想材料。专题六 植物有效成分的提取一、植物芳香油的提取方法1水蒸气蒸馏法(1)原理：利用 水蒸气 将 挥发性 较强的植物芳香油携带出来，形成混合物，冷却后，混合物又重新分出 油层 和 水层 。水蒸气蒸馏除水分离油层2萃取法：植物芳香油易溶于 有机溶剂 ，可采取 萃取法 提取。将粉碎、干燥的植物原料浸泡于 有机溶剂 中，使 芳香油 溶解在有机溶剂中，再蒸发掉有机溶剂。这种方法必须事先除去有机溶液中的 杂质 ，否则会影响 芳香油 的质量。3压榨法(1)原理：利用 压榨法 榨出芳香油等。(2)实验：橘皮精油的提取。(3)实验流程：石灰水浸泡 漂洗压榨过滤静置 再次过滤 橘皮油。4植物芳香油的提取方法的比较（见右表）提取方法水蒸气蒸馏法压榨法有机溶剂萃取法实验原理利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂获得芳香油方法步骤(1)水蒸气蒸馏(2)分离油层(3)除水过滤(1)石灰水浸泡、漂洗(2)压榨、过滤、静置(3)再次过滤(1)粉碎、干燥(2)萃取、过滤(3)浓缩适用范围适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡在有机溶液中优点简单易行，便于分离生产成本低，易保持原料原有的结构和功能出油率高，易分离局限性水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题分离较为困难，出油率相对较低使用的有机溶剂处理不当会影响芳香油的质量【易误警示】水蒸气蒸馏三种常用方法比较，基本原理相同，但原料位置不同。(1)水中蒸馏：原料放于蒸馏容器的水中，水完全浸没原料。(2)水上蒸馏：容器中水的上方有筛板，原料置于筛板上，水量以沸腾时不浸湿原料为宜。(3)水气蒸馏：蒸馏容器下方有一排气孔，连接外源水蒸气，上方有筛板，上面放原料。二、植物芳香油成分、特点及应用(1)成分：主要包括萜类化合物及其衍生物。(2)特点：具很强的挥发性、易溶于有机溶剂。(3)应用玫瑰精油：是制作高级香水的主要成分，可