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文档简介
专题一 基因工程,1.1DNA重组技术的基本工具,学习目标,1、基因工程的基本概念 2、DNA重组技术的三种基本工具 重点:DNA重组技术的三种基本工具 难点:载体具备的特点,定向基因改造设想,设想一,能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮?,能否让细菌“吐出”蚕丝?,设想二,能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物?,设想三,经过多年的努力,科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术基因工程。,基因工程概念,又叫做DNA重组技术。是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性,从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。,特点: 与诱变育种相比,其特点是_。 在_水平上进行操作。 是否属于可遗传的变异?,定向改造生物性状,分子,基因工程培育抗虫棉的简要过程:,普通棉花(无抗虫特性),苏云金芽孢杆菌,提取,抗虫基因,与运载体DNA拼接 导入,棉花细胞(含抗虫基因),棉花植株(有抗虫特性),上述培育抗虫棉的关键步骤是什么?,基因工程培育抗虫棉的关键步骤:,关键步骤一:,抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来,关键步骤二:,抗虫基因与运载体DNA连接,关键步骤三:,抗虫基因导入受体(棉花)细胞,解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具?,关键步骤一的工具: 关键步骤二的工具: 关键步骤三的工具:,基因的剪刀限制酶 基因的针线DNA连接酶 基因的运载工具运载体,DNA 重组技术的基本工具,“分子手术刀” 限制酶,“分子缝合针” DNA连接酶,“分子运输车” 基因进入受体细胞的载体,识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。,主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断,由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的,故名限制性核酸内切酶。,4000种。,形成两种末端,一、 “分子手术刀” 限制性核酸内切酶,T,磷酸二酯键,A,大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列,并在G和A之间切开。,限制酶,什么叫黏性末端?,限制酶,什么叫黏性末端?,什么叫黏性末端?,被限制酶切开的DNA两条单链的切口,带有几个伸出的核苷酸,他们之间正好互补配对,这样的切口叫黏性末端。,什么叫平末端?,当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时,切开的DNA两条单链的切口,是平整的,这样的切口叫平末端。,EcoliDNA 连接酶,T4DNA连接酶,来源,功能,大肠杆菌,T4噬菌体,恢复 磷酸 二酯键,只能连接黏性末端,能连接黏性末端和平末端(效率较低),相同点,差别,二“分子缝合针”DNA连接酶,二、 “分子缝合针” DNA连接酶,1、种类: 2、作用部位:,两类,磷酸二酯键,DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来,即把梯子两边扶手的断口连接起来,这样一个重组的DNA分子就形成了。,DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?,1、通常以质粒作为载体 质粒细菌细胞中一种很小的环状DNA分子。 裸露的、结构简单、独立于细菌之外,并且有自我复制能力,氨苄青霉素抗性基因,质粒,拟核,大肠杆菌细胞,目的基因插入位点,复制原点,三、 “分子运输车” 基因进入受体细胞的载体:,质粒,载体应具备的四个条件,(1)能在宿主细胞内稳定保存并自我复制。,(2)有一个至多个限制酶切点,以便与外源基因连接,(3)具有某些标记基因,以便进行筛选,小结,1.以下说法正确的是 ( ) A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是:具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接 D、DNA
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