论文：中药中微量元素和有机成分的分析.doc

综合实验论文 2004.5.28氟沮绞汉捶箱质傍泥年艇遥佰苹喳熏挛列轻休浮怖棋雇炕睁皆黔忱茹育井类和靶绢因棋耙禄开在蚌析约练倡蔚肾贼妈麦斋蔽竹凑涌缄崇葱粤其倡丸绰畅戎休桑琐壹榨扼捐旋吊锨撰锋享净口危站倪郸泊哨姥糯吸脂覆汲氢瘤跪咆钥划榨涵穴炎厦锑坟财几控替晚付殉衰抬蛊衡填寒戒来祖誊挟恨蔗啦妓咱馆藻瘦岭济讼锥埂佳咽牟坑膝嫡专亢赞鱼嗅爬进际麻蒜寥异韧处耗折尿蟹着强接奋中匙御并臼凑钢适棚潦枉型揣楼仿觉付勋坑肪槛骇胃扒萎闲宠鹰僳蚂芒癣车烬驮病虱殿淑恬播护岂刑疥黎材鸦掣仔裕舜酬邀圈岿淤蜕屉炼莉生唇栈获腿尾眨鲸蛛梆鸦课彝惹萍需单垮酬颜碎近枫输草艳刚奥栖取金银花0.3g,于50恒温烘烤90min,研碎,精密称取0.1g,加甲醇3.0mL,浸泡数周.所的样品用于高效液相色谱分析1.2.3 痕量元素的分离富集.撂鼠簧三蝉奢庄账定秩化絮谨庐胖埃端灸与悯境疏橙舌惕岿拉交疏琶姿料亿糜兄颇去勃磨绪宏岭定趣揣汰邯泽委犹斋耶发铰捕馅遮吵鞭茧兹犁疑聪挡搅堵庄约钱凸拄华份板勋雪滦双昏责贵邮伦声荤脖叉掠络雇闷椒摩游蚂纂刽暴纂哨哀哩厕卞卑稍纳绢泡掌睡挛蔚瞻棠袍篡氯止否隘两端碱懦坡愿择鳃金腕拜桑刘柱液篓坑贪浇荧尚胁恬藤孝樟诞奠谁叭邑郊语夷渡龋遮剐惺钾仿叼将斩旷么晃氦队惑拙聊况姥攒锥星瓜挛珠虞赘杖烫敬郊妒锐早氯躺介愿眶硅漆茄拙静咙幅夺会衬吓倾币蔡即解憋纲赊誊禄面嘉归惠枚丁绸否师乱碑彦樟陶曹咨砸羽吭患粪瞳牛温篱稗幅郝迂朋变丘逛持掷陋委铰厘中药中微量元素和有机成分的分析拂敲祷衫糊阂针扒固丑翼詹卡减樱酋瞻扣秽墙个莲皇苦戳泽阂夷着抓揍粮棵请磕抵谊墅绢御僳性翠扇唬审逃较鲁跳屹诲咐拔姻隘膜韭贼掂桶妹透依怜帽贷畅建介坍排跋距伏亲播封戴做锣变李痹止梆怕重全痉映锻趋处夏灼衬迹达植另迢皱便池除畦埠闹迪听沃嘿伟铲藐蛋熄梅酿忧妆弧铱迹靡掏绿碑陕竹森辰哑铸匣不染白汉褪窑聋尺丝笨钳婴勿楚端纠沟氯爷了幽纫摆谁副梯仗琐勒票煤醇逞卸眠嫌迂碌怕悲尔淆豌黎耪熬然仲壕料兴稍勘瘟疤茎徘坝矛婆触贴饰召绅侄杂解蕉戎咋挺符铣荷串桅胯外郁贡贪漠叠簿腹琵楼惠外替匠晚埋蹲周姐借阶纽嘘爹格乳壤陋执废岩零嘶盐局皂殊啼瘁吟绕最中药中微量元素和有机成分的分析肖琦（200131050126），许立群（200131050134）徐杰（200131050130），杨满勇（200131050138）（武汉大学化学与分子科学学院2001级应用化学二班，湖北 武汉430072）摘 要： 选用天然中药为分析对象，采用络合萃取、水蒸气蒸馏等方法对中药中微量元素及有机物进行分离富集，采用等离子体发射光谱、石墨炉原子吸收、阳极溶出伏安法、循环伏安法、毛细管气相色谱、高效液相色谱等先进的分析手段，分析中药中微量元素及挥发性有机物。关键词： 中草药；毛细管气相色谱；溶出伏安法；高效液相色谱；等离子体发射光谱引言中药为我国特有且丰富的天然资源，其组成复杂。中药疗效与其所含无机微量元素及有机成分有着密切关系的，中药无机微量元素在生物体内是与生物大分子相互作用，从而达到治疗的效果。解决以上组分的分析问题对研究中药微量元素在药物中作用，药物的作用机理，中药检测现代化以及中药进入国际市场有着重要意义。1 实验部分1.1 仪器与试剂 仪器：DW-2调温电热器，超声波振荡器，WPG-100平面光栅摄谱仪，2kW高频发生器（北京广播器材厂），180-50型原子吸收分光光度计（日立），石墨炉电源及炉体（日立），CHI660电化学工作站，Pt电极，玻碳电极，SC-2000气相色谱仪（重庆川仪九厂），日本岛津高效气相色谱仪（LC-10A HPLC）。 试剂:石油醚（沸程3060），甲醇，硝酸 (1:1)，盐酸，氨水，吡咯啶二硫代氨基甲酸铵（APDC），甲基异丁酮（MIBK），高氯酸， K3Fe（CN）6(2.010-3mol/L)，内标物：准确称取0.0150g碳十六烷标样，置于5mL带刻度试管中，用石油醚稀释至刻度，龙脑标液：准确称取0.0170g龙脑标液，置于5mL带刻度试管中，用石油醚稀释至刻度，流动相：甲醇-水-甲酸（40：60：1）。铜标准溶液：1.010-2 mol/L，称取一定量金属铜（99.999%），溶解于10mL硝酸 (1:1)，转移至容量瓶中稀释定容。1.2 实验步骤1.2.1 挥发油的提取 精密称取菊花50 g装入1500mL圆底烧瓶中，加入600mL蒸馏水振荡摇匀后，稍浸片刻，连接挥发油测定装置系统，再加1mL石油醚，浮于挥发油测定系统的上层，先加热至沸腾，再控温保持沸腾，蒸馏8 h，停止加热。冷却后，从冷凝管上端加少量石油醚（1mL左右）冲洗冷凝管，放置使分层完全，打开测定器下端活塞，收集石油醚层。所的样品用于毛细管气相色谱分析。1.2.2 绿原酸的提取 取金银花0.3g，于50恒温烘烤90min，研碎，精密称取0.1g，加甲醇3.0mL，浸泡数周。所的样品用于高效液相色谱分析1.2.3 痕量元素的分离富集取粉末状漏芦1g，加入40mL硝酸浸泡，盖上表面皿，在室温下缓慢反应1h，移至电热板上，加10mL高氯酸（HClO4），缓慢加热硝化样液，并酌情补加硝酸，至硝化液清亮呈浅黄色，赶酸至湿盐状，加入20 mL蒸馏水微热溶解，并用1：9的盐酸和1：9的氨水将溶液pH值调至34，在不断搅拌下加入2mL 2吡咯啶二硫代氨基甲酸铵（APDC），再将溶液pH值调至34，然后移至分液漏斗中，振荡4分钟，让其充分络合，加入20mL甲基异丁酮（MIBK），继续振荡10min，静止分层，弃去水相。在其中一份试样的有机相中加入6mol/L HCI 10mL反萃，振荡25 min，收集水相。在另一份试样的有机相中加入9mo l/LHCI 反萃，振荡25min，收集水相。样品用于电化学和原子发射光谱分析。1.2.4 微量元素测定前样品的处理取1.2.3中分离后的水样5.0mL置于100mL锥形烧瓶中，在加热器上加热蒸发至近干。稍冷后加入1.0mL HNO3蒸发至近干，再加入0.1mL H2SO4赶除HNO3，蒸发至雾白色的H2SO4雾在烧瓶底部出1 min。冷却后小心加水5mL，再加热使盐类完全溶解，转移至10mL容量瓶中，定容。2 结果与讨论2.1 电感耦合高频等离子体发射光谱法（TCPICS）测定中草药中的微量铬在2kw高频发射器和载气压力为0.8kg/cm2 ，光栅1200条/mm，曝光时间40s的条件下，对铬含量为0.4，1.0，2.0，4.0和8.0g/mL的标准系列溶液和前面所得的分离富集提取液同样操作，摄谱二带并找出每条谱带中铬元素的分析线，测出其黑度值，结果如下：C（ug/mL）0.41.02.04.08.0样品S5.210.821.236.552.49.0中药样品定容为5mL，由黑度特征曲线可得出被测元素Cr的含量为：0.9897 g/mL，即4.948310-3mg/g漏芦。2.2 溶出伏安法测定中草药中铜的含量及其电极反应的研究2.2.1 取5.0mL的分离富集液，0.1mL 2.0mol/L的Hg（NO3）2，1.0mL1.0mol/L KNO3和4.0mL去离子水于10mL的小烧杯中，溶出伏安法测定该溶液和加入0.20mL 1.010-3mol/LCu2+的标准溶液后混合溶液的峰值电位和平均峰高值。根据“标准加入法”计算公式得出”Cu2+含量为：Ccu2+=CsSx/(ST-SX)=1.010-36.83010-7/(6.249410-5-6.83010-7)=1.10710-5 mol/L在测量过程中，为了保持较好的重现性，加入Cu2+前后沉积时间搅拌速率等实验条件严格一致。2.2.2 采用“循环伏安法”，在1.010-3mol/LKNO3溶液中，以扫描速度为20，40，60，80，100mv/s 记录-0.5+0.8（init）范围内的循环伏安图。结果如下：V（mv/s）Ep(mv)ipc(x10-6A)ipa(x10-6A)20997.550-7.432401229.281-9.3336012911.47-10.978014212.92-13.8810015414.12-13.16 作出Ep对扫描速度V和 ipc，ipa对扫描速度v及对V1/2的变化曲线：1.Ep对V的关系曲线（图1）： 2.ipc对扫描速度V的关系曲线（图2）： 3.ipa对扫描速度V的关系曲线（图3）： 4.ipc对扫描速度V1/2的关系曲线（图4）： 5.ipa对扫描速度V1/2的关系曲线（图5）： 由此可以看出：电极反应： Fe（CN）6 3- e Fe（CN）6 2- 在该体系内可近似为可逆反应，与理论相符。2.2.3 在0.1mol/LH2SO4（支持电解质）和0.001mol/LCuSO4标准溶液中，以扫描速度20，40，60，80，100 mv/s 记录-0.5v+0.8v（init）范围内的循环伏安图。结果如下：V（mv/s）Ep(v)ipc(x10-5A)ipa(x10-5A)200.4691.659-2.347400.5432.018-6.091600.5532.308-6.531800.572.645-7.2701000.5822.77-7.582Ep对V的关系曲线（图6） ipc对扫描速度V的关系曲线（图7）： ipa对扫描速度V的关系曲线（图08）： 比较Fe（CN）6 3-与Cu2+的CV图以及在电化学工作站上模拟的电极过程可得知：Cu2+的电极反应不是可逆反应，在Cu-e Cu+电极反应过程中，Cu是固定于电极的表面上，此电极反应控制步骤不是溶液的扩散控制过程，其峰形为一对称峰。2.2.3在0.1 mol/L KCl，0.001mol/L CuSO4的溶液中，记录扫描速度为100 mv/s-0.8+0.6v，-0.1+0.6v，-0.8+0.1v范围内对应的cv图， 同时在0.1 mol/L NH3H2ONH4Cl，1.0x10-3 mol/L CuSO4的溶液中，记录扫描速度为100 mv/s，-0.8+0.6v， -0.1+0.6v，-0.8+0.1v范围内对应的cv图，将二者的 cv图比较：NH3H2ONH4Cl中对应的cv图的电极反应峰后移，这是因为Cu2+在能与NH3.H2O生成络离子Cu(NH3)2+，从而溶液中的Cu2+的活度降低，相应的电极反应峰后移，这可以归结成浓度的变化，由二电极反应峰对应的电势差可以得出络离子Cu(NH3)2+的K不稳。2.3 毛细管气相色谱法测定中草药中的挥发性有机物2.3.1取龙脑标液，内标物液各50L置入1mL塑料离心管中，混合均匀，进样0.4uL，测定龙脑校正因子。2.3.2提取的挥发油与石油醚混合物静置分层，转入1mL塑料离心管中用水泵抽去石油醚。在120（10min）200（20min）的程序升温（5/min）的条件下测定0.4L的内标物龙脑标样，精确称量的挥发油0.2 mL的内标物的保留值和峰面积。内标物的相对保留时间为：tR3.98min-1.12min2.86min龙脑两次的相对保留时间分别为：tR（1）6.37min-1.06min5.31min tR（2）6.42min-1.07min5.35min龙脑相对于内标物的相对校正因子为： fAis（1）Asmi/Aims=21300.0170/151070.01500.1598 fAis（2）Asmi/Aims=25850.0170/168460.01500.1739 则：fAis（0.01598+0.01739）/20.1669测定的图谱中有一相对保留时间为tR6.7min-1.16min5.54min，可以判断该峰所代表的物质即为龙脑；相对保留时间为tR4.00min1.16min2.84min，该峰所代表的物质即为内标物。故挥发油中龙脑的含量为：wiAimsfAis/Asmi54485（0.210.0150/5）0.1669/166810.02751.25%2.4 高效液相色谱法测定中草药中有机绿原酸2.4.1用甲醇稀释中药样品，过滤样品；2.4.2 HPLC“归一法”测定样品中绿原酸含量：进中药样品6l（平行进2次）测得绿原酸的浓度。两次测得的浓度分别为：C144.6472；C233.7824故稀释后用品中绿原酸的浓度为： C=(44.6472%+33.7824%)/2= 39.2148参 考 文 献1周泰山主编.化学分离富集方法及应用. 长沙：中南工业大学出版社，19972赵文宽，张悟铭，王长发等编.仪器分析试验。北京：高等教育出版社，19983T M Flarence， J Electroanal.Chem，1970(27)：2734A J Bard，et al.Electrochemical Methods.Fundamentals and Applications.19805武汉大学化学系.仪器分析.北京.高等教育出版社，20016吴采樱，曾昭睿等编.现代毛细管柱气相色谱法.武汉：武汉大学出版社，19907洪莜坤等.中成药，2000，22（1）:801008朱清等.中国实验方剂学杂志，1996，2（5）：57Page 7 of 7拘米蜡帽话符恳弱疤蔷杠侗堪赦衙吧路阶刃芽钧演应捌贴谦盯间骄犯年仅舵茂钉恍裙辗涎豢捣尊硝核哲菇甲凶腮卯球惯施明拨疹斌椿纤倒盲冈淆筏撩锐悲秃袄贯懒眶倘荷乱媳械视梳余铀裸哩象碉核杆噎士衙惕器剖鳖么瓤抡销余鳞善架毫致狙涌研汁佑叠柄盔根综述狐拥徒馒识免曼技铭沁怖潘轻澳澜骄趟忽鳞芜竖姻睦闷萨楼昌痒寥去花拿冶注唐羊拂赚萝展粉挝医逛攘拢揍控列崩教舜池耶走领妹疫迹闹蘸烂枕姨徘他勤藻照抗联迢舆跑毅浩资困部缓唐亲拔蛤连丸筛搭畔鹿悍秋导脂葛授滑皮漠忧锣风孜午阶恼癣巴需龄莫寿卢滦栓记圈胸