酶型-课件 法医学.ppt

酶型 （Isoenzyme),李建金 中山大学中山医学院法医物证教研室,,LOGO,第一节 概述,酶型的定义 又称同工酶：分子结构不同，但催化同一生化反应的一组酶。 或酶的多态性定义： 同DNA。,,LOGO,第一节 概述,酶型的分类 多位点基因控制的同工酶：如 LDH,PGM。 单位点复等位基因控制的同工酶：如 EAP，EsD。 遗传变异体同工酶：点突变所致。如G6PD。 次级同工酶（修饰同工酶）：脱氨、乙酰化等所致。,,LOGO,第一节 概述,酶的一些特点 酶的本质是蛋白质 酶促反应的高度专一性：催化特定的底物。 酶反应的最适PH 酶反应的最适温度 酶多为水溶性 酶多不耐热,,LOGO,第一节 概述,电泳检测酶型的基本原理 传统电泳：等电点、分子大小。 等电聚焦电泳：等电点。 影响电泳的因素：电场强度、缓冲液（PH值、离子强度）、胶浓度、电泳时间、产热等。,红细胞酸性磷酸酶 （Erythrocyte Acid Phosphatase.EAP),概况 EAP（ACP1）、PAP、ACP2 EAP是第一个被报道具有多态的酶。 单亚基结构，基因定位于2P25， 等电点为5-7，酶反应的最适PH为5.5。,分型 1963年（Hopkinson), Nature杂志上 报导EAP可分为A、BA、B、CA、CB 五种型。进行了家系调查，有三个共显 性等位基因：P(A）、P（B）、P（C）。 在东方人群中，常见的基因为： P（A）、P（B）；常见的表型为： A、BA、B。 另有多个稀有基因的报导。,EAP表型的检测 1、1%琼脂糖凝胶电泳 2、聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳 显色：,4-甲基伞形酮磷酸盐（EAP）,4-甲基伞形酮,兰色荧光,磷酸葡萄糖变位酶 （Phosphoglucomutase,PGM),PGM1（其基因在1号染色体）：等电点为 5-7，最适pH8 PGM2（其基因在4号染色体） PGM3（其基因在6号染色体）：胎盘 PGM4（其基因未详）：乳汁中 红细胞中只有PGM1与PGM2，活性各半,分型,淀粉凝胶电泳，PGM可分出a,b,c,d,e,f,g七条带。 e,f,g几乎每人都一样。分为三型：PGM1（a,c)、PGM2（b,d)，PGM2-1(a,b,c,d)。 1965年（Hopkinson),发现e,f,g带亦存在变异。前者称为 PGM1，由PGM1（1）、PGM2（2）二个共显性等位基因控制，三种常见表型。后者称为PGM2。,1976年（Bark)，用等电聚焦电泳，将PGM1分出十种常见的表型。 分别由PGM1（1+）、PGM1（1-）、PGM1（2+）、PGM1（2-）四个共显性等位基因控制。,PGM1表型的检测,1、淀粉凝胶电泳 2、聚丙稀酰胺凝胶 等电聚焦电泳,G1P（PGM、G16P）,NADP2+MTT（PMS）,6PG+NADP2,G6P（G6PD、NADP）,脂酶D（EsteraseD,EsD）,脂酶共有二十余种，可分为特异性脂酶和非 特异性脂酶。 红细胞中的脂酶有A、B、C、D四种， 只有EsD具有多态性。 等电点为4-6，酶反应的最适PH5.5。,分型： 1973年（Hopkinson），分为三种常见表型， 由ESD1、ESD2二个共显性等位基因控制。,ESD表型的检测,1、1%琼脂糖凝胶电泳 2、等电聚焦电泳,4-甲基伞形酮醋酸盐,兰色荧光,4-甲基伞形酮,乙二醛酶I （GlyoxalaseI,GLOI),双亚基结构，分布广泛，红细胞中活性最高。,等电点为4.3左右；反应 最适PH为6.5。,基因位点与HLA基因毗邻（6P213），,1975年（Kompf）报导，三种常见表型。由GLOI（1）、GLOI（2）二个共显性等位基因控制。,分型,GLOI表型的检测,琼脂糖/可溶性淀粉混和凝胶电泳 显色： 甲基乙二醛（GLOI、还原型GSH）-氧化型GHS。 淀粉+碘-兰色（还原型GSH可使兰色褪掉）。,谷丙转氨酶 Glutamic Pyruvic Transaminase GPT,催化谷氨酸与丙氨酸互换。 酶反应的最适PH约为8 双亚基结构。三种常见表型，由GPT（1）、GPT（2）二个共显性等位基因控制。,混合淀粉凝胶电泳显色： 1、丙氨酸（GPT）-谷氨酸（GLD、NADP）-NADPH2（MTT、PMS）-兰色。 2、丙氨酸（GPT）-谷氨酸+丙酮酸（LDH、NADH）-乳酸+NAD（无荧光）。,1、酶活性丧失（不可逆）。 2、潮湿环境下，脱氨，蛋白负电荷增加， 无法正确分型（仍有活性）。 3、-SH被氧化，形成二