磁珠法总RNA提取试剂盒说明书.docVIP

磁珠法总RNA提取试剂盒磁珠法总RNA提取试剂盒MagBeads Total RNA Extraction Kit【目 录 号】TRE-5010；TRE-5030；TRE-5100；【运输条件】225；【保存条件】磁珠悬浮液28；其它组分室温；【试剂盒组成】Kit Component试剂盒组成Component Volume试剂量TRE-5010（100T）TRE-5030（300T）TRE-5100（1000T）ARE- Buffer ML裂解液100mL300mL1000mLARE-Magnetic Beads磁珠悬浮液2mL6mL20mLWash Buffer 1清洗液130mL（加入30mL异丙醇）90mL（加入90mL异丙醇）300mL（加入300mL异丙醇）Wash Buffer 2清洗液215mL（加入60mL乙醇）45mL（加入180mL乙醇）150mL（加入600mL乙醇）Elute Buffer洗脱液10mL30mL100mL【注意事项】1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；2. 清洗液1使用前请按照瓶身标签描述加入异丙醇，稀释备用；3. 清洗液2使用前请按照瓶身标签描述加入无水乙醇，稀释备用； 4. 建议使用新鲜或4存放少于3天样本进行提取，反复冻融导致核酸得量明显降低；5. 请仔细阅读本说明书，并严格按照操作步骤完成操作。【产品简介】本试剂盒适用于从植物材料、动物组织、各种微生物、培养细胞等样本中提取总RNA。试剂盒采用独特分离作用的纳米磁珠和缓冲液体系，磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定条件下对核酸具有极强的富集能力，当条件改变时可以可逆的释放所吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。试剂盒经过磁珠与核酸结合、清洗、洗脱等步骤，最大限度的去除了蛋白质及其它杂质，所得RNA产物纯度优良，可直接应用于酶切、PCR、qPCR、文库构建、测序等各种下游分子生物学实验。【试剂盒说明】样本类型样本量RNA得量范围植物材料100mg100400g动物组织100mg100800g培养细胞1107个80300g各种微生物1107个100800g【自备仪器、耗材和试剂】仪器自动版英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪、核酸提取仪配套用磁棒套、EP管离心机、涡旋振荡仪、96孔方孔圆底板、EP管、无水乙醇、异丙醇以及氯仿、PBS溶液（1）。手动版水浴锅或金属浴、EP管离心机、涡旋振荡仪、EP管、EP管配套用磁力架、无水乙醇、异丙醇、氯仿、PBS溶液（1）。【手动版操作步骤】1. 样本前处理及裂解1） 贴壁培养细胞倒弃培养液，用PBS溶液（1）冲洗一次，按照每10cm2生长细胞中加入1mL的比例加入裂解液，轻微晃动使裂解液均匀分布于细胞表面，将内含细胞的裂解液转移至EP管中，涡旋振荡至无明显颗粒物，室温静置5min。2） 悬浮培养细胞将悬浮培养细胞连同培养液一起转入EP管中，4、8,000g离心2min，吸弃上清液，注意勿破坏细胞沉淀。按照每510106个细胞中加入1mL的比例加入裂解液，涡旋振荡至无明显颗粒物，室温静置5min。3） 动物组织、植物组织将新鲜或超低温保存的样本（100mg）液氮研磨至粉末状，尽量全部转移至EP管中。向EP管中加入1mL裂解液，涡旋振荡至无明显颗粒物，室温静置5min；2. 分离RNA层向裂解完毕EP管加入200L氯仿，盖紧EP管盖，用力震摇混合溶液至乳浊液，室温静置5min。4、12,000g离心10min，从离心机中小心取出EP管，内部匀浆液分为三层，小心吸取最上层无色溶液并转移至新的EP管中。3. 核酸结合向EP管中加入400L异丙醇和20L提前摇晃均匀的磁珠悬浮液，高速涡旋振荡5min。4. 磁性分离将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，如EP管内盖有磁珠残液，可保持EP管在磁力架上，整体上下颠倒23次使磁珠被吸附完全。吸弃上清液，避免接触磁珠。5. 清洗1） 向EP管中加入600L清洗液1，用移液枪吹散磁珠，涡旋振荡2min，参照步骤4进行磁性分离。2） 使用600L清洗液2，参照步骤5(1)操作2次。6. 除醇将弃尽上清液后的EP管保持于磁力架上，打开EP管盖室温晾干约8min至无明显乙醇味。7. 洗脱向EP管中加入30100L洗脱液，涡旋振荡至磁珠全部分散于液相中，58温浴5min，每隔2min涡旋振荡10s。8. 核酸转移洗脱完毕，将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP管中，提取过程完毕，此时可弃去磁珠。【仪器自动版操作步骤】本操作以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32份样本的提取工作。1. 96孔板准备参照下表用量向96孔板各孔位中分别加入相应试剂：96孔板孔位1、72、83、94、105、116、12试剂磁珠悬浮液20L异丙醇400L清洗液1600L清洗液2600L清洗液2600L洗脱液50L注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀；2）为提高效率建议使用排枪进行加液操作。2. 样本前处理及裂解按照【手动版操作步骤】中步骤1进行操作。3. 分离RNA层向裂解完毕EP管加入200L氯仿，盖紧EP管盖，用力震摇混合溶液至乳浊液，室温静置5min。4、12,000g离心10min，从离心机中小心取出EP管，内部匀浆液分为三层，小心吸取最上层无色溶液（勿超过550L）并转移至96孔板第2/8列对应孔位中。4. 上机提取将96孔板置于ETP-300型核酸提取仪中，插入磁棒套，打开仪器操作软件，运行“RNA提取程序”。步骤编号孔位运行类型振荡时间(秒)分离时间(秒)挥发时间(秒)振荡幅度振荡 强度一组温度二组温度三组温度四组温度11磁珠转移1505强000022RNA结合75004强000032RNA结合3001504中000043清洗160505强000054清洗260505强000065清洗24553005强000076洗脱3302002强6060606083弃磁珠5005强0000“RNA提取程序”参数设置如下，如