过敏原特异性抗体IgEELISA检测试剂盒说明书.doc

过敏原特异性抗体IgE ELISA 检测试剂盒说明书【用途】定性和定量检测过敏原特异性人IgE。过敏反应是一种特殊的病理性免疫反应，是人体对一种或多种原本无害的物质产生不正常的反应。其主要原因是患者吸入或食入含有过敏性物体刺激机体，触发细胞大量分泌药理活性物质，引起一系列过敏症状，例如过敏性哮喘，过敏性鼻炎，湿疹、发痒、流泪、皮炎以及肠胃道过敏症等。同时产生相当量的E型免疫球蛋白（Immunoglobulin E 即Ig E），引起人类过敏反应的过敏原种类繁多，如能从中查到引起机体过敏的物质，就能很好地预防和治疗过敏反应。本检测盒是一种用酶联免疫法（ELISA）快速、精确测定体内引起过敏反应的特异E型免疫球蛋白的体外诊断工具。它可定性和定量地测定人体抗特种过敏原的E型免疫球蛋白在血清中的水平，从而帮助医生正确地诊断引起病人过敏反应的过敏原。本过敏原检测盒适合于广泛的过敏原检测，特别适用于少儿患者，同时也非常适用于湿疹以及其他皮肤病患者和对皮试过敏的患者。【检测原理】本试剂盒采用酶免ELISA法。当具有过敏抗原固化于表面的载体与病人血清培养在一起后，血清中特异性IgE（一抗）就会特异地结合到抗原上，此特异结合的抗体可被酶联的二抗所识别，加入显色剂后，二抗所联的酶使显色剂呈蓝色，加终止液后呈黄色。显色的深度与血清中特异性IgE成正比；能定性/半定量地检测血清中特异性IgE的浓度。【检测盒组成】过敏原包被微孔酶标板(Coated Wells) 96wellsHRP酶联二抗12 ml浓缩洗涤液(15X)(Washing Conc.)40ml1TMB单组分显色液12 ml硫酸终止液(Stop Solution)12ml样本稀释液(Sample Diluent)12 ml【检测动态范围】0.35 100 IU/ml (0.84ng 240 ng/ml)。【重现性】CV 10%15% 【重现性】0.30IU/ml (0.72ng/ml)【注意事项】1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25。使用后立即冷藏保存试剂。2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入HRP或底物前确保尽量吸干孔内液体。操作过程中也不要让微孔完全干燥。3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。6. 在储存和温育时避免强光直接照射。7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。9. 不能使用过期产品。10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。11. 每一份样本，在塑料框架上安置一条过敏原包被微孔酶标板条，并用病人姓名或标识号码作为相应的标记。每条酶标板的第一个孔为空白孔。 12. 如果病人血清的所有孔的OD值0.2，应将该病人血清标本用样品稀释液适当稀释后重新测定。【保存】 贮藏于2-8C。【准备工作】洗涤缓冲液：检测开始前，根据需求量，将浓洗涤缓冲液（15X）稀释15倍，即取一份（一体积的浓洗涤缓冲液（15X）加入14份蒸馏水中，混匀后，装入一挤压式洗瓶备用。【检测步骤】1、 将所有试剂平衡至室温（20-25）。2、 在总IgE孔和特异性过敏原孔中分别加入100ul血清，轻轻混匀10秒，37C温育45分钟。3、 洗板：倒尽板内液体，每孔加入250l稀清洗液洗涤酶标板，然后倒尽液体，再加入250l洗涤 液，倒尽液体，如此反复洗涤5次，最后将酶标板翻扣在厚叠吸水纸上拍干。4、 在所有孔中加入100ul HRP酶联二抗（绿色），37C温育45分钟。5、洗板：重复步骤3操作。6、 在所有反应孔中加入100 l TMB底物显色液。，置室避光反应25-30分钟。7、在所有反应孔中加入100 l终止液。8、使用标准酶标仪在450nm波长下，测每孔的OD值。【Cut-off 值】Cut-off值 0.15+空白孔OD值（均值）【结果判断】 阴性和阳性判断 （1） cut-off 值 10% 的范围区间为分区（2） 以cut-off值90%为阴性（3） 以cut-off值110%为阳性 致敏程度定量分级 根据FEIA和RAST的测定结果，国际上特异性IgE和定级标准关系为：特异性IgE含量IU/ml （OD值） 定 级 标 准 0.35 （0.15）0 （阴性） 0.35-0.70 （0.15-0.35）1 （弱阳性） 0.70-3.50 （0.35-1.