糖和苷ppt课件

天然药物化学 (Natural Medicinal Chemistry or Phytochemistry),08制药工程 2010-2011学年下学期,一、单糖的立体化学 二、糖苷分类 三、糖和苷的理化性质 四、苷键的裂解 五、糖的鉴定（NMR） 六、糖链结构的测定 七、糖的提取分离,糖和苷,1、糖类(Saccharide，碳水化合物carbohydrates) 2、光合作用产物，占植物干重的80%-90% 3、糖类与核酸、蛋白质、脂质一起合称为生命活动所必需的四大类化合物。 4、糖及苷类有广泛生理活性作用。 5、苷类（glycosides)： 也叫苷或配糖体， 是由糖或糖的衍生物与另一非糖物质（称苷元/配基）通过糖的半缩醛/酮羟基与苷元脱水形成的一类物质。 6、苷键：糖与糖及苷元形成的化学键。,概 述,单糖结构表示方法：,Fischer式,Haworth式,优势构象式,（一）单糖结构式的表示方法,单糖是多羟基醛或酮，是组成糖及其衍生物的基本单元。,第一节 单糖的立体化学,Fischer投影式,书写注意事项： 碳链尽量放在垂直方向上，氧化态高的碳原子置于上端，氧化态低的置于下端； 其他基团放在水平方向上； 垂直方向碳链应伸向纸面后方，水平方向碳链应伸向纸面前方（横前竖后）； 将分子结构投影到纸面上，横线与竖线的交叉点表示碳原子； 投影式只能在纸面上旋转(180n)，不能脱离纸面翻转； 投影式中的基团两两交换的次数不能是奇数。,使用Fischer 投影式的注意事项：,（1）可以沿纸面旋转，但不能离开纸面翻转。,（2）可以旋转180。，但不能旋转90。或270。,结论：当最小基团处于横键位置时，其余三个基团从大到小的顺序若为逆时针，其构型为R；反之，构型为S。,结论：当最小基团处于竖键位置时，其余三个基团从大到小的顺序若为顺时针，其构型为R；反之，构型为S。,D-葡萄糖 (D-glucose),1,2,3,4,5,6,Fischer投影式,R,R,R,S,Haworth投影式 1、糖在水溶液中主要是以环状半缩醛或 半缩酮的形式存在。 2、Haworth投影式特点： 右下左上（与Fischer投影式对应） 成环碳原子(C4或C5)旋转120 环上-H可不标出 3、五元氧环的糖 呋喃糖 六元氧环的糖 吡喃糖,D-构型的CH2OH向上,如何将透视式变成环状结构式：,五元氧环糖称为呋喃型糖（furanose) 六元氧环糖称为吡喃型糖（pyranose）,常以六元或五元氧环形式存在。,b-D-葡萄吡喃糖,a-D-葡萄吡喃糖,a-D-葡萄呋喃糖,b-D-葡萄呋喃糖,椅式构象,单糖结构式的表示方法,Fischer式 Haworth式 Haworth简式 优势构象式,（二）糖的绝对构型：D，L,（1）以甘油醛为标准，将单糖分子中编号最大的不对称碳原子的构型与甘油醛作比较来命名糖分子的绝对构型。,R,D-(+)-甘油醛,*,*,S,L-(-)-甘油醛,旋光度 正,旋光度 负,（2）Fischer投影式中，距离羰基最远的C* （即编号最大的C*）上-OH处于右侧者为 D-型糖； 处于左侧者为L-型糖。 （3）Haworth式中六碳吡喃糖（如葡萄糖）C5-R处于环平面上方者为D型糖；C5-R处于环平面下方者则为L型糖。 五碳吡喃糖（如木糖）C4-OH与六碳吡喃糖相反。,D-甘油醛,5,5,R,S,S,R,-OH在右侧为D型,-OH在左侧为L型,C5上取代基向上为D型,C5上取代基向下为L型,端基碳(anomeric carbon)：单糖成环后形成了一个新的手性碳原子。 该碳原子形成的一对异构体为端基差向异构体，有、两种构型。 根据端基碳与距离羰基最远（即编号最大）的手性碳原子的手性关系，两个手性碳构型相同为、不同为。,（三） 糖的相对构型：、,端基碳上H被称为端基H，OH被称为端羟基。,b-D-葡萄糖,a-D-葡萄糖,新生成的手性碳原子,同侧,异侧,-D-葡萄呋喃糖苷,-D-葡萄呋喃糖苷,1,4,4,1,（异侧）,（同侧）,b-D-木糖吡喃糖,a-D-木糖吡喃糖,1,4,b-D-葡萄吡喃糖,a-D-葡萄吡喃糖,（四）单糖的构象,构象更接近真实情况， 五元环基本是一平面,构象,一、单糖类（monosaccharide） 天然单糖以五碳糖、六碳糖最多，多数在生物体内呈结合状态，只有葡萄糖、果糖等少数单糖游离存在。,糖类物质根据其能否水解和分子量的大小分为单糖、低聚糖和多糖,第二节 糖和苷的分类,单,糖,1. 五碳醛糖,5. 糖醛酸,2. 六碳醛糖,3. 六碳酮糖,4. 去氧糖,6. 支碳链糖,7. 氨基糖,8. 单糖的衍 生物,1. 五碳醛糖(aldopentoses) 有L-阿拉伯糖（L-arabinose, Ara），D-木糖(D-xylose, Xyl)，D-来苏糖(D-lyxose, Lyx)，D-核糖(D-ribose)等。,L-阿拉伯糖：,a-L-阿拉伯糖,b-D-木糖,2. 六碳醛糖(aldohexoses) 常见的有D-葡萄糖（D-glucose,Glu），D-甘露糖(D-mannose,Man)，D-阿洛糖(D-allose,All)，D-半乳糖(D-galactose,Gal)等。其中最常见的是D-葡萄糖：,3. 六碳酮糖(ketohexose, hexulose) 如D-果糖(D-fructose,Fru)，L-山梨糖(L-sorbose)等。下图为-D-果糖：,4. 去氧糖(deoxysugars) 单糖分子的一个或二个羟基被氢原子取代的糖，常见的有6-去氧糖(甲基五碳糖)、2,6-二去氧糖及其3-O-甲醚等。这类糖有L-鼠李糖(L-rhamaose,Rha)，L-夫糖(L-fucose)和D-鸡纳糖(D-guinovose)，D-毛地黄毒糖(D-digitoxose)，L-夹竹桃糖(L-oleandrose)，D-地芰糖。,L-鼠李糖 D-毛地黄毒糖 L-夹竹桃糖 (L-rhamaose,Rha) (D-digitoxose) (L-oleandrose),结构如下：,5. 糖醛酸 (uronic acid) 单糖分子中的伯醇羟基氧化成羧基，常结合成苷类或多糖存在，常见的如葡萄糖醛酸(glucuronic acid)和半乳糖醛酸(galactocuronic)。,6. 支碳链糖 糖链中含有支链，如D-芹糖(D-apiose)和D-金缕梅糖(D-hamamelose), 结构如下：,7. 氨基糖(amino sugar) 单糖的一个或几个醇羟基置换成氨基。 如庆大霉素的结构：,绛红糖胺 2-脱氧链酶胺 加洛糖胺,8. 单糖的衍生物 （1）糖醇单糖的醛基或酮基被还原成羟基,L-卫矛醇 D-山梨醇 ( L-ebonymitol) ( D-sorbitol),（2）环醇环状的多羟基化合物,肌醇 D-槲皮醇 (inositols) (quercitol ),二、低聚糖（oligosaccharides）,1.按含有单糖的个数分为二糖、三糖、四糖等。,2.按是否含有游离的醛基和酮基分为还原糖和非还原糖。 具有游离醛基或酮基的糖为还原糖。 由半缩醛或半缩酮上的羟基通过脱水缩合而成的聚糖没有还原性，为非还原糖。,由29个单糖通过苷键结合而成的直链或支链聚糖。,槐糖（还原糖),蔗糖（非还原糖),-D-Glcp-(12)-D-Glcp,-D-Fruf-(11)-D-Glcp,二、低聚糖（oligosaccharides）,化学命名：把除末端糖之外的叫糖基，并标明连接位置和苷键构型。,二、 低聚糖（oligosaccharides）,植物中的三糖大多是以蔗糖为基本结构再接上其它单糖而成的非还原性糖，四糖和五糖是三糖结构再延长，也是非还原性糖。,二糖：蔗糖,三糖：棉子糖,四糖：水苏糖,五糖：毛蕊糖,由十个以上单糖通过苷键连接而成的糖称为多聚糖。,三、多聚糖类（polysaccharides，多糖）,3、按来源：植物多糖；动物多糖,分类：,1、按功能：不溶于水的作为动植物的支持组织的多糖； 溶于水的作为动植物的贮存养料的多糖。,2、按单糖组成：均多糖(homosaccharide) （由同种单糖组成）和杂多糖(heterosaccharide)（由多种单糖组成）,三、 多聚糖(polysaccharides, 多糖),定义,聚合度,性质,举例,苷是由糖及其衍生物的半缩醛或半缩酮羟基与非糖物质（苷元）脱水形成的一类化合物。新生成的化学键即为苷键。,四、 苷类(glycoside) (又称配糖体),苷类化合物的组成：,苷元(配基)：非糖的物质，常见的有黄酮，蒽醌， 三萜等。,苷键：将二者连接起来的化学键，可通过O,N,S等原子 或直接通过N-N键相连。,糖(或其衍生物，如氨基糖，糖醛酸等),苷类化合物的命名： 以 -in 或 oside 作后缀。,苷类,1、根据苷元的化学结构类型：分为黄酮苷、苯丙素苷等。,2、根据苷的某些特殊性质或生理活性：分为皂苷、强心苷等。,3、根据在生物体内是原生还是次生：分为原生苷（在植物体内原存在的苷）和次生苷（从原生苷中脱掉一个以上单糖的苷）。,4、根据苷键原子的不同：分为氧苷（O苷）、氮苷（N苷）、硫苷（S苷）、碳苷（C苷）等。在天然界中最常见的为O苷。,分类：,5、根据连接单糖基的个数： 单糖苷；双糖苷；叁糖苷,6、根据苷元连接糖基的位置数： 1个位置成苷单糖链苷 2个位置成苷双糖链苷,7、按端基碳构型：分苷，多为L型糖；苷，多为D型糖。,根据苷元成苷官能团的不同将氧苷分为以下几类： 醇苷、酚苷、氰苷、酯苷、吲哚苷。,（一）氧苷,1.醇苷：苷元上的醇羟基与糖或糖的衍生物的半缩醛或半缩酮羟基脱一分子水缩合而成的化合物。,红景天苷,甘草酸,2.酚苷：苷元上的酚羟基与糖或糖的衍生物的半缩醛或半缩酮羟基脱一分子水缩合而成的化合物。天然药物中为数很多,如：,天麻苷,（一）氧苷,3.氰苷：是一类羟基腈与糖分子的端基羟基间缩合的衍生物，根据羟基与腈基的位置不同有： 主要有-羟腈的苷,如：,苦杏仁苷,亚麻氰苷,-羟基腈很不稳定易在酸和酶的催化作用下水解得到-羟腈苷元，它的性质不稳定很快就分解为醛或酮和氢氰酸，氢氰酸是止咳的有效成分，也容易引起人和动物中毒。,（一）氧苷,4.酯苷（酰苷）：苷元上的羧基与糖或糖的衍生物的半缩醛或半缩酮羟基脱一分子水缩合而成的化合物。,山慈菇苷A,（一）氧苷,5.吲哚苷：是吲哚醇羟基与糖脱水生成的苷。,靛苷,苷元上的巯基与糖或糖的衍生物的半缩醛或半缩酮羟基脱一分子水缩合而成的化合物。,萝卜苷,（二）硫苷,苷元上的氨基与糖或糖的衍生物的半缩醛或半缩酮羟基脱一分子水缩合而成的化合物。,腺苷,巴豆苷,（三）氮苷,苷元碳上的氢与糖或糖的衍生物的半缩醛或半缩酮羟基脱一分子水缩合而成的化合物。,异牡荆素,芦荟苷,（四）碳苷,碳苷类化合物具有溶解度小、难以水解的特点。,第三节 糖和苷的理化性质,(一) 物理性质,1、 性状：,形：苷类化合物多数是固体，其中糖基少的可以成结晶，糖基 多的如皂苷，则多呈具有吸湿性的无定形粉末。,味：单糖低聚糖甜味。 多糖无甜味（随着糖的聚合度增高，则甜味减小） 苷类一般是无味的，但也有很苦的和有甜味的，如甜菊 苷(stevioside), 比蔗糖甜300倍，临床上用于糖尿病 患者作甜味剂用，无不良反应。,色：苷类化合物的颜色是由苷元的性质决定的。糖部分没有颜 色 。,糖小分子极性大，水溶性好；聚合度增高，水溶性下降。 多糖难溶于冷水，或溶于热水成胶体溶液，不溶于乙醇。 单糖极性 双糖极性 （与羟基和碳的分担比有关，即按-OH/C的分担情况而定）,(一) 物理性质,2、溶解性,苷亲水性（与连接糖的数目、位置有关）。一般随着糖基的 增多而增大。大分子苷元（如甾醇等）的单糖苷常可溶解 于低极性的有机溶剂，如果糖基增多，亲水性增加，在水 中的溶解度也就增加。,因此，用不同极性的溶剂顺次提取药材时，在各提取部分都有发现苷类化合物的可能。 碳苷与氧苷不同，无论在水中还是在其他溶剂中溶解度一般都较小。,(一) 物理性质,3、旋光性： 多数苷类化合物呈左旋，但水解后，由于生成的糖常是右旋的，因而使混合物呈右旋。因此，比较水解前后旋光性的变化，也可以用以检识苷类化合物的存在。,苷元亲脂性，可溶于氯仿、乙醚、乙酸乙酯、醇等溶剂。,2、溶解性,糖的基本化学性质（有机化学）：,与Br2水反应，使Br2水褪色,斐林试剂反应（Fehling反应）：还原性糖，生成Cu2O 砖红色沉淀。,Tollen试剂反应（银镜反应）,糖的化学反应 1、氧化反应 2、糠醛形成反应 3、羟基反应,（二） 糖的化学性质,1、氧化反应： 单糖分子中有醛(酮)、醇羟基和邻二醇等结构，均可以与一定的氧化剂发生氧化反应，一般都无选择性。 例如银镜反应（以Ag+作为氧化剂)，和斐林反应(以Cu2+作为氧化剂)。 但过碘酸和四醋酸铅的选择性较高，一般只作用于邻二羟基上。,1、氧化反应：,过碘酸氧化反应：,主要作用于邻二醇羟基、-氨基醇、-羟基醛（酮）、 -羟基酸、邻二酮和某些活性次甲基结构。,过碘酸反应特点： 反应定量进行（试剂与反应物基本是1:1）。 在水溶液中进行（无水环境不反应）。 反应速度（弱酸条件）：顺式反式。 在异侧不能扭转的邻二醇不起反应（1,6-b-D-葡萄呋喃糖酐）。,过碘酸反应的用途,推测糖中邻二醇的数量 判断糖环大小：吡喃糖、呋喃糖 推测低聚糖和多聚糖的聚合度 推测糖之间的连接 （1,3；1,4；1,6）,2、糠醛形成反应,糠醛及衍生物与-萘酚缩合物,Molish 反应：,试剂：浓H2SO4，萘酚,Molish反应用途：用来鉴别糖和苷，区别苷和苷元。,2、糠醛形成反应,糠醛衍生物芳胺或酚类,缩合,显色,（苯酚、萘酚、苯胺、蒽酮等）,样品浓H2SO4 萘酚,棕色环,（单糖、低聚糖、多糖、苷）,3、羟基反应,糖的-OH反应醚化、酯化和缩醛(酮)化,仲醇次之,其次是伯醇基（C6-OH）,最高的半缩醛羟基（C1-OH）,反应活性：,反应： 醚化（甲醚化、三甲基硅醚化等） 酯化（乙酰化、甲苯磺酰化） 缩酮 缩醛 硼酸络合,1、甲醚化（Methyl Ethers）,全甲基化糖苷酸水解时仅水解糖苷键。判断成苷位置、连接顺序。,2、乙酰化反应,对甲苯磺酰化反应主要发生在伯醇上。,用途：分离、鉴定,3、缩醛（Acetal）与缩酮（Ketal ）,用途：对碱稳定，对酸不稳定。羟基保护剂，推测顺邻二醇羟基或1，3二醇羟基，推测氧环的大小,4、硼酸（boric acid）络合反应,结构要求：邻二醇必须为顺式； 络合后：酸性增加，可离子化。,硼酸络合反应的应用,络合后中性变为酸性 可以进行酸碱中和滴定 可以进行离子交换法分离 可以进行电泳鉴定 糖自动分析仪,1.用适当的化学方法鉴别下列各组化合物(标明反应所需化学试剂以及所产生的现象)。,练习,2.思考：羟基醚化反应、乙酰化反应、缩酮（醛）化反应及硼酸络合反应各自在糖及苷研究上的应用与价值。,作为药品的糖类化合物,应用例：单糖与双糖,b-D-葡萄糖,葡萄醛酸钙,D-果糖,蔗糖,乳糖,应用例：糖醇与抗坏血酸,木糖醇,山梨醇,甘露醇,L-抗坏血酸 (Vc),b-D-葡萄糖,L-古洛糖酸,结构式，分子量 性状 物理，旋光度,鉴别 酒石酸铜试剂 IR谱,检查 酸度、澄清度、硫酸盐、亚硫酸盐、干燥失重、蛋白质、铁盐、重金属、砷盐,贮藏 制剂,含量测定 络合滴定,第四节 苷键的裂解,苷键的裂解反应是一类研究多糖和苷类化合物的重要反应。 目的和应用：通过该反应，可以使苷键切断，从而更方便地了解苷元的结构、所连糖的种类和组成、苷元与糖的连接方式、糖与糖的连接方式。,按照所用催化剂的不同可分为酸催化水解、碱催化水解、酶水解和过碘酸裂解等。,苷键的裂解方法有以几种分类方法：,按裂解的程度可分为：全裂解和部分裂解；,按所用的方法可分为均相水解和双相水解；,一、酸催化水解,苷键属于缩醛结构，易为稀酸催化水解。 反应一般在水或稀醇溶液中进行。 常用的酸有HCl, H2SO4, 乙酸和甲酸等。,质子化,阳碳离子,氧正离子 （半椅式）,溶剂化,N-苷 O-苷 S-苷 C-苷,1、苷键原子的不同，酸水解难易程度不同，其水解易难顺序为：,酸水解难易程度规律：,2、糖部分：,1）呋喃糖苷吡喃糖苷,2）酮糖苷醛糖苷,3）吡喃糖苷中： 吡喃环C5上取代基越大越难水解， 水解速度为：五碳糖 甲基五碳糖 六碳糖 七碳糖 C5上有-COOH取代时，最难水解,4) 氨基取代的糖较-OH糖难水解，-OH糖又较去氧糖难水解。,葡萄糖醛酸 最难水解,3、苷元部分：,1）芳香属苷脂肪属苷,如：酚苷 萜苷、甾苷,2）当苷元为小基团时,横键苷键易水解； 当苷元为大基团时,竖键苷键易水解。,酸水解难易程度规律：,酸水解的局限性,2）不能反应糖和糖的连接位置,两相水解法,对酸不稳定的苷元，为了防止水解引起苷元结构的改变，可用两相水解反应。,1）有时会导致苷元结构改变,1常用试剂：醋酐 + 酸 所用酸如：H2SO4、HClO4、CF3COOH或Lewis酸（ZnCl2、BF3）等。,3反应机理： 与酸催化水解相似，以CH3CO+(乙酰基，Ac）为进攻基团。,2反应条件：一般是在室温放置数天。,二、乙酰解反应,产物为：单糖、低聚糖及苷元的酰化物。 酰化可以保护苷元上的OH，使苷元增加亲脂性，利于提纯和鉴定。并能得到苷链的部分降解物。,通常苷键对碱稳定，不易被碱水解。 而酯苷、酚苷、与羰基共轭的烯醇苷、苷键位有吸电子基团的苷易被碱水解。,三、碱催化水解,C2-OH与苷键成反式易于碱水解，得到1,6-糖酐；成顺式则得到正常的糖。, -消除反应,常用的苷键水解酶： 转化糖酶水解-果糖苷键 麦芽糖酶水解-D-葡萄糖苷键 纤维素酶水解-D-葡萄糖苷键 杏仁苷酶水解-六碳醛糖苷键 芥子苷酶水解芥子苷键（S苷键）,四、酶催化水解反应,1、反应条件温和。,特点：,2、用酶水解苷键可以获知苷键的构型，,3、可保持苷元结构不变的真正苷元。,4、酶专属性高，选择性地催化水解某一构型的苷。,特点：1、反应条件温和、易得到原苷元； 2、可通过产物推测糖的种类、糖与糖的连接方式以及 氧环大小。,五、过碘酸裂解反应（Smith降解法）,所用试剂为：NaIO4、NaBH4、稀酸,适用范围：苷元不稳定的苷和碳苷（得到连有一个醛基的苷元）,不适合： 苷元上有邻二醇羟基或易被氧化的基团的苷。,五、过碘酸裂解反应（Smith降解法）,应用于碳苷的情况:,Summary,糖的NMR可解决的问题,糖的种类 糖与苷的连接位置 苷键构型 糖与糖的连接顺序,第五节 NMR Spectra of Carbohydrates,糖的1H-NMR 性质,化学位移规律： 端基质子： 4.36.0ppm 特点：比较容易辨认,用途：1 确定糖基的个数,2 确定糖基的种类,3 2D-NMR谱上糖信号的归属,4 糖的位置的判断,糖上其余质子信号： 3.24.2ppm 甲基五碳糖的甲基信号在1.0左右,可通过C1-H与C2-H的偶合常数，来判断苷键的构型（、）,1,2,1,2,1,1,2,2,3,3, 甘露糖与鼠李糖，虽然具有吡喃环结构，但其C2-H都处于横键上，故无法判断其苷键构型。,槲皮素鼠李糖苷,13CNMR,根据化学位移区别糖的种类 Table 2-1 根据C-1位的化学位移区别苷键构型 D、L型 C1100 D、 L型 C1100 根据1JC1-H1值区别苷键构型: 吡喃糖, 端质子横键 1JC1-H1170175Hz 端质子竖键键 1JC1-H1160165Hz 呋喃糖，无此规律 Table 2-2,糖在13CNMR中 -CH3 18 -CH2OH 62 -CHOH 6885 端基碳C1 95105 因此可根据 95105区域碳信号的个数和化学位移值来推测低聚糖、苷中所含糖的个数和苷键的构型。,C1: -型 97101 ppm -型 103 106 ppm CH-OH(C2、C3、C4) 7078ppm CH2-OH (C6) 62ppm左右,Table 2-1,糖苷化后，端基碳和苷元-C化学位移值均向低场移动，而邻碳稍向高场移动（偶而也有向低场移动的），对其余碳的影响不大，这种苷化前后的化学变化，称苷化位移。,苷化位移（glycosidation shift）,如：伯醇苷,环醇苷1）两-C均为仲碳 前手性差别,规律：同小异大,（仲醇苷）,（-C）,环醇苷2）两-C为仲碳和叔碳（季碳）碳构型的影响,规律：同5异10 其余七,（仲醇苷）,(-C),叔醇苷,表2-3 苷化位移规律,应用：判断苷化位置，苷化碳构型等, 苷元-碳和糖端基碳绝对构型相同：,端基碳,-碳,-碳, 苷元-碳和糖端基碳绝对构型不同时：,R-S,端基碳,端基碳,-C,-C,-C,-C,酯苷,规律：碳向高场位移,-C,-C,-C,-C,酚苷,第六节 糖链的结构测定,单糖的组成：单糖的种类和比例 糖的氧环：五元环，六员环 糖与糖的连接位置 糖的连接顺序 苷键的构型,研究糖或苷类化合物结构的顺序,EI-MS(糖衍生物)；FAB-MS;FD-MS;ESI-MS,PC; HPLC; GC,小分子： 谱学方法 HMBC FAB-MS,纯度测定：一定分子量范围内的均一组分 方法：超离心法；高压电泳法；凝胶柱色谱法；旋光测定法；其他：官能团摩尔比恒定法；视差折射法；HPLC 分子量测定: 软电离，MALDI-MS 或 MALDI-TOF-MS 原来物理法：沉降法，光散射法，粘度法，渗透压法，超滤法，超离心法 单糖鉴定：TLC、PC 单糖绝对构型测定:GC法;HPLC法;手性柱色铺法;手性检测器法;旋光比较法。 糖链连接位置测定：全甲基化;1H-NMR;苷化位移 糖链连接顺序的确定：早期:部分水解;质谱分析;驰豫时间;1D-NMR和2D-NMR法 苷键构型及氧环的确定：构型：核磁共振法酶解法红外法分子旋光差法。糖的氧环：13C-NMR红外法甲醇解法Smith降解法。,单糖的鉴定,薄层色谱（TLC ) 展开系统：常用水饱和的有机溶剂展开。 如：正丁醇：醋酸：水（4：1：5上层）BAW 水饱和苯酚等溶剂系统。,显色剂：邻苯二甲酸苯胺 硝酸银试剂(使还原糖显棕黑色) 三苯四氮唑盐试剂（单糖和还原性低聚糖呈红色） 3,5-二羟基甲苯盐酸试剂（酮糖呈红色） 等。,GC法,HPLC法,单糖绝对构型测定,糖链连接位置测定,全甲基化后水解，GC分析甲基化单糖,OH,糖链连接顺序的确定,质谱分析-1,MW 854,糖链连接顺序的确定,质谱分析-2,MW 916,苷键构型的确定,1酶催化水解法：麦芽糖酶能水解的为-苷键，而苦杏仁能酶解的为-苷键。 2克分子旋光差法（Klyne法）：先测定未知苷键构型的苷及其水解所得苷元的旋光度，计算其比旋值之差，再与一对甲苷的分子比旋相比较，数值近似者其苷键构型一致。 3利用NMR进行测定：根据C1-H和C2-H的偶合常数（J值）来判断苷键构型，如葡萄糖等；根据端基碳和端基质子间的偶合常数1JC1-H1值来判断，端基为横键质子（-苷键），1JC1-H1为170Hz；端基为竖键质子（-苷键），1JC1-H1为160Hz，如鼠李糖、甘露糖等；利用端基碳的化学位移值判断苷键构型，通常-构型的C1比-构型的C1信号在较高场，如葡萄糖； 4. 其它方法单葡萄糖苷可根据IR振动峰（-构型的C1在770、780cm-1处有较强的吸收峰）区别； 葡萄糖苷乙酰化物的质谱中，m/z331这一碎片峰-苷