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中药膨化技术用于生脉胶囊的可行性研究 作者：王懿萍，姜怡，王盛民,王兴龙，尹晔【摘要】 目的根据生脉膨化胶囊和生脉胶囊的质量标准比较，研究膨化技术用于中药制剂的可行性。方法采用薄层色谱法（TLC）鉴别制剂中红参、麦冬、五味子；采用高效液相色谱法（HPLC）测定人参皂苷Rg1和Re的含量。结果用TLC法能鉴别生脉制剂中的红参、麦冬、五味子；用HPLC法测定生脉制剂中人参皂苷含量，生脉膨化胶囊和生脉胶囊中人参皂苷含量无显著性差异，但生脉膨化胶囊人参皂苷溶出速率明显快于生脉胶囊。结论建立的方法简便，准确，重现性好，为在中药制剂中推广膨化技术奠定了基础。 【关键词】 生脉膨化胶囊； 生脉胶囊； 人参皂苷； 薄层色谱法； 高效液相色谱法 生脉膨化胶囊和生脉胶囊处方均由红参、麦冬、五味子3味中药组成，具有益气复脉、养阴生津之功效，主治胸闷、气短、心悸等症。本实验将红参膨化后用于生脉胶囊制剂，得到一种优于传统生脉胶囊的新胶囊制剂生脉膨化胶囊制剂，对生脉膨化胶囊和生脉胶囊质量标准进行了比较研究。中药膨化技术是借助食品的膨化原理，利用相变和气体的热压效应，使中药内部的液体迅速升温汽化，形成海棉状空心网状结构。膨化可使中药质地疏松，形成空心网状结构且细胞壁破碎，细胞内的有效成分直接暴露出来，有效成分不经过渗透压的浸提过程，而经过溶解、胶溶或洗脱的过程溶解出来。据文献报道，红参膨化炮制后薄壁细胞破碎，厚壁细胞散离，故质地疏松，有效成分更容易浸出；红参膨化前后的化学成分基本一致，其指纹图谱相似度大于0.991。1 仪器与试药1.1 仪器SPD-20A高效液相色谱仪（日本岛津）；KQ5200DE超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SL-302 电子天平（上海民桥公司）；层析缸(20 cm10 cm)；层析柱(内径10 mm)；ZF-2型三用紫外分析仪（天津市富兰斯电子科贸有限公司）。1.2 材料人参、麦冬、五味子购于成都市荷花池中药市场，由本院王盛民鉴定，符合2005版中国药典之标准；人参皂苷Re、Rg1对照品（中国生物药品检验所提供， Re：110754 - 200421，Rg1：110703 - 200424）；五味子醇甲对照品（中国生物药品检验所提供，批号 857 - 20010）；红参、麦冬、五味子对照药材（中国生物药品检验所提供）；生脉胶囊、生脉膨化胶囊及相对应的阴性样品（自制）；乙腈（色谱纯）；正丁醇、甲醇、氯仿等为分析纯；水为超纯水。2 方法与结果2.1 胶囊制备工艺本实验研究的生脉胶囊和生脉膨化胶囊皆为自制胶囊。处方：红参330 g，麦冬660 g，五味子330 g，制成1 000粒胶囊，3粒/次，3次/d2。生脉胶囊的制备工艺为：红参粉碎成细粉，过80目；麦冬用70%乙醇提取；五味子水煎煮，麦冬、五味子提取液喷雾干燥成细粉过80目，与红参细粉混合均匀，装入0号胶囊。生脉膨化胶囊制备工艺为：红参膨化后粉碎成细粉，过80目；其余同上。2.2 薄层色谱鉴别2.2.1 红参薄层鉴别取生脉胶囊内容物、生脉膨化胶囊内容物、红参对照药材粉末（过80目）及红参膨化品粉末（过80目）各3.0 g，分别加入70%乙醇30 ml，水浴回流提取，温度为80，回收乙醇，残渣用30 ml蒸馏水溶解，再用乙醚脱脂两次（30 ml，15 ml），合并到分液漏斗中，用水饱和过的正丁醇萃取两次（30 ml，15 ml）,加入15 ml的蒸馏水加热浓缩至干，残渣用2 ml的甲醇溶解，作为供试品溶液3；另取无红参的阴性样品3.0 g，按同样方法制得阴性对照溶液；再取人参皂苷Re和人参皂苷Rg1对照品，加甲醇溶解至每毫升含1 mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述各溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿正丁醇甲醇水（1310108）下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色，再放入碘缸中至斑点清晰46。见图1。2.2.2 五味子薄层鉴别分别取生脉胶囊内容物、生脉膨化胶囊内容物、五味子对照药材粉末各3.0 g，各加三氯甲烷50 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣各加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取缺五味子的阴性样品3.0g，同法制成阴性样品溶液；再取五味子醇甲对照品，加甲醇溶解至每毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述各溶液，分别点于同一硅胶G254薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯-甲酸（1551）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视2。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。见图2。2.2.3 麦冬薄层鉴别分别取生脉胶囊内容物、生脉膨化胶囊内容物及麦冬对照药材各3.0 g，分别加入三氯甲烷-甲醇（73）混合溶液30 ml，浸泡3 h，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣各加三氯甲烷0.5 ml使溶解，作为供试品溶液。另取缺麦冬的阴性样品3.0 g，同法制成阴性对照溶液。分别吸取上述各溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-甲醇-冰醋酸（8050.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视2。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的斑点。见图3。2.3 含量测定2.3.1 色谱条件色谱柱为Symmetry C18（4.6 mm250 mm，5 m，美国Waters）；流动相为乙腈-0.05%磷酸（体积比19.780.3）；检测波长203 nm；柱温30；流速1.0 ml/min78。2.3.2 对照品溶液精密称取人参皂苷Rg14.1 mg，人参皂苷Re2.0 mg，置10 ml容量瓶中，加甲醇使溶解，并定容到10 ml，摇匀，待用。2.3.3 标准曲线取“2.2.1”项下制备的混合对照品溶液2，4，6，8，10 l，分别注入色谱仪，测得各峰面积。以人参皂苷Rg1进样量为横坐标、以人参皂苷Rg1峰面积为纵坐标，得回归方程为：Y=23 974.620 0X-46.020 0,r=0.999 9（n=5），结果表明人参皂苷Rg1进样量在0.824.1 g范围内与峰面积呈良好的线性关系；以人参皂苷Re进样量为横坐标、以人参皂苷Re峰面积为纵坐标，得回归方程为：Y=11 737.8 275X-234.095 0,r=0.999 9（n=5），结果表明人参皂苷Re进样量在0.402.0 g范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.3.4 精密度精密吸取“2.2.1”项下的对照品溶液，连续进样5次，10 l/次，测定人参皂苷峰面积，得出人参皂苷Rg1其RSD=1.02%；人参皂苷Re其RSD=1.19%，结果表明该方法精密度良好。2.3.5 生脉胶囊人参皂苷含量测定 生脉胶囊供试品：分别取6份生脉胶囊内容物，每份2.5 g，精密称定，分别加入70%乙醇各50 ml，密塞，称定重量，将6份样品分别按10，20，30，40，50，60 min，超声处理，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，0.45m微孔滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液。 阴性溶液：取不含红参的阴性样品2.5 g，加70%乙醇，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀， 0.45 m微孔滤膜滤过，取滤液作为阴性样品溶液。表1 生脉胶囊人参皂苷含量（略）稳定性实验：精密吸取“生脉胶囊供试品”项下超声提取40 min样品20 l，分别在0，2，4，6，8，10 h进样测定，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的RSD分别为1.96%和1.75%。 重复性实验：称取生脉胶囊内容物5份，每份2.5 g，按“生脉胶囊供试品”项下超声提取40 min，测定，结果人参皂苷Rg1，人参皂苷Re的RSD分别为1.16%和1.05%。 加样回收率实验：取已知人参皂苷含量的生脉胶囊内容物6份，每份约1.0 g，精密称定，精密加入人参皂苷Rg1，人参皂苷Re适量，按“生脉胶囊供试品”项下超声提取40 min，测定含量，计算回收率。结果平均回收率为98.54%，RSD=0.89%。2.3.6 生脉膨化胶囊人参皂苷含量测定 生脉膨化胶囊供试品：分别称取6份生脉膨化胶囊内容物，每份2.5 g，其制备方法与“生脉胶囊供试品”项下制备方法相同。 阴性样品溶液：制备方法与“2.3.5”项中阴性溶液制备方法相同。 稳定性实验：精密吸取“生脉膨化胶囊供试品”项下超声提取10 min样品20 l，分别在0，2，4，6，8，10 h进样测定，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的RSD分别为1.01%和1.09%。 重复性实验：称取生脉膨化胶囊内容物5份，每份2.5g，按“生脉膨化胶囊供试品”项下超声提取10 min，测定，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的RSD分别为1.03%和1.07% 。表2 生脉膨化胶囊人参皂苷含量（略）加样回收率实验：取已知人参皂苷含量的生脉膨化胶囊内容物6份，每份约1.0 g，精密称定，精密加入人参皂苷Rg1、人参皂苷Re适量，按“生脉膨化胶囊供试品”项下超声提取10 min，测定含量，计算回收率。结果平均回收率为99.01%，RSD=0.65%。 按上述方法测定，得到生脉胶囊样品、生脉膨化胶囊样品、对照品溶液及阴性样品的HPLC图，见图47。人参皂苷含量测定结果见表12。2.4 生脉膨化胶囊和生脉胶囊人参皂苷含量比较从上述表1和表2生脉胶囊和生脉膨化胶囊中人参皂苷含量，可以得到如下图8，生脉膨化胶囊和生脉胶囊在同一时间的人参皂苷含量。3 讨论与结论 TLC色谱鉴定确定了生脉制剂中红参、麦冬、五味子的薄层色谱鉴别方法，从图13可以看出，红参、麦冬、五味子在相同的位置都有相同的斑点，说明膨化并没有使生脉胶囊有效成分缺失。 从表12及图8可以看出，生脉膨化胶囊和生脉胶囊中人参总皂苷含量并无显著性差异，但生脉膨化胶囊人参皂苷溶出速率明显快于生脉胶囊，这是因为生脉膨化胶囊中红参经膨化后，内部的液体迅速升温汽化，形成海棉状空心网状结构，使其质地疏松，有效成分更容易浸出，故其人参皂苷溶出速率更快。生脉胶囊用于治疗冠心病、心绞痛、心脑血栓等症，病人发病时需服用速效药物以减轻病人痛苦，而本实验制备的生脉膨化胶囊比传统生脉胶囊释药快，且不影响传统生脉胶囊的药效。 本文通过对生脉膨化胶囊和生脉胶囊的质量标准研究，确定了中药膨化技术用于中药制剂的可行性，为在中药制剂中推广膨化技术奠定了基础。【参考文献】 1张翠英.人参膨化炮制及膨化饮片的质量研究D.西南交通大学2006级研究生学位论文.2国家药典委员会.中国药典，部S.北京:化学工业出版社，2005:424.3高彩霞,王成章.人参皂苷的提取和精制工艺研究J.林产化工通讯,2005,39(5):5.4周漩,冯毅凡,郭晓玲.主成分分析法用于人参皂苷薄层色谱分离的研究J.广东药学院学报,2003