ー阻害薬工业的制法.ppt

1,HIV 阻害薬工業的製法,Viracept (nelfinavir mesylate) (3S,4aS,8aS)-N-tert-Butyl-2-(2R,3R)-2-hydroxy-3-(3-hydroxy-2- methylbenzoylamino)-4-(phenylthio)butyldecahydroisoquinoline- 3-carboxamide methanesulfonate salt,東北大学 農学部 化学工学概論（2009 年 12 月）,2,学,HIV 例生化学初歩 危険試薬低温反応回避努力 多段階合成工業化鍵、中間体簡便単離（分離） 方法（）確立 実用的立体制御実現、 急回発想 官能基隠特性引出、 逆転発想,3,（AIDS）,（AIDS）正式名称、後天性免疫不全 症候群（acquired immunodeficiency syndrome） AIDS 大文字綴 HIV 、免疫不全 （human immunodeficiency virus）感染 引起重複 HIV 言 1978 年、最初患者米国出現 1981 年、米国 CDC（Center for Disease Control） 最初症例報告 2004 年末現在、世界 3,940 万人感染。 1 年間死亡者、310 万人（世界死因第 4 位）。 新感染者毎年 490 万人（男 240 万人、女性 170 万人、子供 80 万人）発生 全患者 7 割諸国集、最近 、中国南部急増,4,日本 HIV 感染拡大,5,HIV 感染臨床的特徴,性的接触、感染血液注入（注射針共用）感染母子垂直感染 感染後 1 週間以内発熱、関節痛起、異型球出現（急性感染 症状） 3 週間 3 月以内 HIV 対抗体陽性化 無症候感染状態（潜伏期間） 810 年継続（1日 1010 個生成） 球（白血球）、細胞膜表面 CD4 質（細胞膜抗原）持（T4 球） 減少 全身腺腫発熱起、体重減少（AIDS 関連症候群） T4 球減少結果、免疫不全引起 日和見感染症、肺炎、肉腫、腫瘍発症。 CD4 持中枢神経細胞（細胞）減少 痴呆発症 AIDS 発症後 5 年以内患者死亡,6,HIV ,HIV-1 HIV-2 2 種存在 HIV 起源、免疫不全 （ SIV: simian immunodeficiency virus）。 HIV-1 、感染 SIV 、 HIV-2 、感染 SIV 進化 古 HIV-1 、1959 年39歳男性 採取、（共和国） 病院保管血液発見。 AIDS 流行起源、1940 年代1950 年代 初遡 地球規模 AIDS 感染 HIV-1 。 HIV-2 感染西限定,Chimpanzee (Pan troglodytes),Sooty mangabey (Cercocebus atys),7,The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2008,for their discovery of human immunodeficiency virus,for his discovery of human papilloma viruses causing cervical cancer,Harald zur Hausen (1936),Franoise Barr-Sinoussi (1947),Luc Montagnier (1932),German Cancer Research Centre Heidelberg, Germany,Regulation of Retroviral Infections Unit, Virology Department, Institut Pasteur Paris, France,World Foundation for AIDS Research and Prevention Paris, France,8,HIV 分離,1983 年、研究所教授、AIDS 前駆症状 腺腫（lymphadenopathy）呈患者分離、 腺病変（LAV, lymphadenopathy-associated virus）命名 1984 年 4 月、国立研究所 R. C. Gallo 教授、AIDS 原因発見、HTLV (human T lymphotrophic virus)-3 命名 1984 年 8 月、大学校 J. Levy 教授第 3 AIDS 、ARV (AIDS-related virus) 分離 仏（教授）米（教授）特許優先権 対立。法廷闘争過程、教授 教授教授 LAV 提供、遺伝子 解析結果 HTLV-3 ARV LAV 由来判明 大統領首相会談政治的和解。特許米仏両 研究所共有、収入 80% AIDS 研究予防 基金（World Foundation for AIDS Research and Prevention ）設立,Robert C. Gallo (1937),9,Gag-Pol,Vpr,HIV 、（retrovirus） 1 種 、RNA 、宿主細胞侵入 情報 DNA （逆転写： reverse transcription） 由来 DNA 、宿主細胞染色体組込（provirus）化 化、宿主細胞 RNA 作用、 RNA 複製同時、合成用 mRNA 転写,(+) RNA,(-) DNA,dsDNA,reverse transcription,integration,splicing,genome replication,provirus,translation,Vif,Gag,transcription,mRNA,RT,RT,(RT = reverse transcriptase),Nef,Env,Vpu,Rev,Tat,10,HIV 中心部構造,(+) RNA （9.3 kb） 2 本（diploid）(+) RNA mRNA 対応 1 本 RNA 、宿主細胞奪 t-RNA （1 個）質会合 RNA 会合質、NC（nucleocapsid）次酵素 活性持質： reverse transcriptase (RT, RNA-dependent DNA polymerase) integrase (IN) protease (PR) ribonuclease (RH, RNase H),NC,t-RNA,(+) RNA,protein of enzyme activities,kissing loop complex,塩基配列相補的 部位対形成,RT, IN, PR, RH 機能,11,HIV 粒子構造,RNA 会合質、CA（capsid）質覆、 上 MA（matrix）質 MA 外側、宿主細胞奪脂質 2 重膜（membrane）被覆（enveloped ） 粒子外周、宿主細胞認識突起（spike） 14 本。 1 本、 TM (transmembrane glycoprotein/gp41) SU （surface glycoprotein/gp120） 3 量体（TM SU 非共有結合会合）,CA,MA,membrane (envelope),spike,SU (gp120),TM (gp41),12,HIV 構造,20 nm,4060 nm,80110 nm,capsid, 小文字対応遺伝子名称 NC t-RNA 描 spike 、TM SU （1:1）会合体 3 量化,13,HIV ,gag group specific antigen matrix, capsid, p2, nucleocapsid, p1, and p6 pol polymerase p6*, protease, reverse transcriptase, RNase H, integrase env envelope gp120 (SU), gp41 (TM) vif virion infective factor vpr viral protein R tat transactivator of transcription rev regulator of expression of virion proteins vpu viral protein U nef negative regulatory factor,5,3,R,U5,gag,pol,MA CA p2 NC p1 p6,p6* PR RT RH IN,vif,vpr,rev,vpu,env,gp120 gp41,nef,U3,R,R repeat sequence U unique sequence,HIV-1 HIV-2 異部分,tat,rev,rev,tat,調節遺伝子, ,14,HIV 粒子構成主要質（1）,5,pol,MA CA NC,env,SU (gp120),gag,3,Gag-Pol (5%),Gag (95%),MA CA NC,PR RT RH IN,Env,TM (gp41),PR (protease) RT (reverse transcriptase) RH (RNase H) IN (integrase),membrane (envelope),SU,TM,NC (nucleocapsid) CA (capsid) MA (matrix),gag (group-specific antigen) 内部構造質,env (envelope) 外皮質,pol (polymerase) 酵素,surface protein (gp120),trans- membrane (gp41),env,gag,pol,Pol,Gag,Env,15,HIV 粒子構成主要質（2）,MA (matrix) CA (capsid) NC (nucleocapsid),5,pol,MA CA NC,env,SU (gp120),gag,3,Gag-Pol (5%),Gag (95%),MA CA NC,PR RT RH IN,Env,TM (gp41),粗面小胞体 Env 合成 体化 切断起 SU TM 生成,細胞質 Gag-Pol Gag 合成 RNA 会合脂質 2 重膜囲 Gag-Pol 自己開裂 PR Gag 残Gag-Pol 切断 MA、CA、NC、PR、RT、RH、IN 生成 （粒子成熟化）,gag,SU (surface) TM (trans-membrane),env,envelope proteins,PR (protease) RT (reverse transcriptase) RH (RNase H) IN (integrase),pol,Internal structural proteins,enzymes,16,HIV 増殖,1. 宿主細胞吸着侵入 2. RNA DNA 逆転写 3. （dsDNA）宿主染色体 挿入 4. DNA 鋳型 RNA 複製 mRNA 転写 複数質一 鎖繋 合成 6. 、 RNA、t-RNA 集合 核酸（RNA）会合体細胞膜被覆出芽 加水分解粒子成熟 9. 粒子放出 ,17,HIV 吸着,HIV 、先端SU （surface glycoprotein/gp120）宿主細胞認識gp120 = 質量 120 kD glycoprotein（糖質） SU 受容体（receptor）、細胞表層存在質 CD4 （CD = cluster of differentiation）。 CD4 、免疫系細胞（T 細胞、単球）脳細胞（細胞）分布 SU 、（chemokine）受容体 CCR5 CXCR4 共受容体 （co-receptor）利用（C = cystein, X = any amino acid, R = receptor）。,R5 株 R5X4 株、 CCR5 発現、単球感染,18,HIV 核移動,SU （gp120）受容体（CD4）共受容体 （CCR，CXCR4）結合、TM （transmembrane glycoprotein/gp41） 立体構造変化、 脂質 2 重膜（envelope）細胞膜 （plasma membrane）融合 細胞質内放出粒子 内容物、reverse transcription complex 形成 reverse transcription complex 、 微小管（microtuble）伝核移動 （14 mm/sec） reverse transcription complex 中 RNA dsDNA 合成、 pre-integration complex 形成,(+)-RNA,dsDNA,microtuble,nucleus,reverse transcription complex,pre-integration complex,t-RNA,RT IN,MA Vpr,19,化,reverse transcription complex 、 核孔（nuclear pore）通核内侵入 reverse transcription complex 構成 MA（matrix） Vpr（viral protein R） IN（integrase） 核局在化 （nuclear localization signal）存在 IN 染色体DNA 由来 dsDNA 挿入,dsDNA,nucleus,pre-integration complex,nuclear pore,provirus,integrase (IN),cell chromosome,Vpr,3000 5000 pores per nucleus,20,HIV 遺伝子複製転写翻訳,、宿主細胞 RNA （cell pol II） RNA 複製 mRNA 転写触媒 増殖初期翻訳、 複製刺激 Nef 、 転写強化 Tat、 mRNA 核外運 Rev 増殖後期翻訳、複数質 1 本繋 （Gag，Gag-Pol，Env） Gag Gag-Pol 細胞質合成 Env 合成化粗面小胞体起、3 量化体中 宿主（furin） SU（gp120） TM（gp41）切断,provirus,genome RNA,mRNA,cell pol II,rough endoplasmic reticulum,Env,TM,SU,Golgi,Gag,Gag-Pol,host protease,plasma membrane,21,（Gag，Gag-pol）、 RNA、t-RNA 細胞 膜直下集合、SU (gp120)-TM (gp41) 埋込膜 奪出芽 Gag-Pol 2 量化、自己開裂酵素質（PR, RT, RH, IN）放出 PR（protease） Gag 加水分解、粒子成熟化,HIV 成熟化,SU,Golgi,t-RNA,RNA,Gag,Gag-pol,myristyl CH3(CH2)12CO,plasma membrane,TM,SU,TM,PR,Gag-pol,Gag-pol,Gag,MA CA NC,RT, RH, IN,CA (capsid),MA (matrix),RNA + NC (nucleocapsid),MA CA NC,22,抗 HIV 薬,HIV CD4 (+) 細胞感染（吸着侵入）阻止 HIV 固有生化学（逆転写 質成熟）阻害,23,HIV 侵入阻害薬,Enfuvirtide（fuzeon）、HIV CD4 受容体結合阻害 Enfuvirtide 、直鎖状 （32 個酸残基構成） 2003 年、米国承認、 適用従来抗 HIV 薬無効 AIDS 治療（年間薬剤費 US$ 25,000）,Acetyl-YTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLELDKWASLWNWF-amide,Ac-Tyr-Thr-Ser-Leu-Ile-His-Ser-Leu-Ile-Glu-Glu-Ser- Gln-Asn-Gln-Gln-Glu-Lys-Asn-Glu-Gln-Glu-Leu-Leu- Glu-Leu-Asp-Lys-Trp-Ala-Ser-Leu-Trp-Asn-Trp-Phe-NH2,24,HIV 固有生化学,(+)-RNA,dsDNA,reverse transcription complex,pre-integration complex,Gag,PR (protease),Gag-pol,Gag-pol,MA (matrix) CA (capsid) NC (nuclear capsid),RT, RH, IN,(-) DNA,RT (reverse transcriptase),provirus,cell chromosome,IN (integrase),gag-pol,gag,AIDS 治療薬 開発成功化合物 RT 阻害剤（RTI） PR 阻害剤（PI）,25,逆転写酵素阻害剤（RTI）,逆転写酵素（RT; reverse transcriptase）、細胞存在 RT 選択的阻害剤（RTI; reverse transcriptase inhibitor）、HIV 対高選択毒性可能 RTI 、 AIDS 患者中 HIV 感染細胞増加抑制。 、 HIV 染色体組込（化）、 感染細胞新 HIV 粒子生（増殖）抑制 2 種類 RTI 存在 系（NRTI; nucleoside reverse transcriptase inhibitor ） 非系（NNRTI; non-nucleoside reverse transcriptase inhibitor ）,(+) RNA,(-) DNA,dsDNA,RTI,NRTI (AZT),NNRTI (NVP),26,系逆転写酵素阻害剤（NRTI）, NRTI 、細胞取込、細胞由来 糖部 5 水酸基 3 酸化 3 酸化 NRTI 、 RT 基質認識、 (+)-RNA 鋳型伸長中 (-)-DNA 鎖組込 NRTI 糖部 3 水酸基、(-)-DNA 鎖合成中断,AZT,5,3,AZT triphosphate (AZT-5-P3),RT,27,臨床使用 NRTI, （AZT）,（ddl）,（ddC）,（d4T）,（3TC）,（ABC）,（PMPA）,糖部 L-配置 非天然型,AZT-5-P3 、細胞 DNA HIV RT 強結合 HIV RT 、dT-5-P3 AZT-5-P3 強結合 AZT（AZT-5-P3）細胞 DNA 合成無影響、副作用骨髄傷害,28,非系逆転写酵素阻害剤（NNRTI）,NNRTI 、HIV RT 活性部位異部位結合、 酵素立体構造変化逆転写活性低下 NNRTI 、 NRTI 比薬剤耐性 HIV 変異株出現 一 NNRTI 耐性変異、他 NNRTI 交叉耐性（cross- resistance）示 3 種類 NNRTI 臨床使用, （NVP）,（DLV）, （EFV）,29,阻害剤（PI）,HIV （PR）、 Gag 加水分解 MA（matrix）、CA（capsid）、NC（nuclear capsid）生成 阻害剤（PI; protease inhibitor）、 Gag MA、CA、NC 作妨、粒子成熟阻止 新 HIV 生（増殖）阻害,myristyl,Gag,Gag-pol,2 量化,自己開裂,PR (protease),RT (reverse transcriptase) RH (RNase H) IN (integrase),MA CA NC,PI,粒子 内部構造 形成不可欠,30,阻害剤（PI）,HIV （PR）、同一構造二会合 。一、99 個酸残基構成 PR 酸。活性部位特徴的配列、Asp25Thre26Gly27 HIV 翻訳（Gag） PhePro 結合選択的 切断,Asp 25,Asp 25,Ile 50,Ile 50,31,加水分解遷移状態 PI ,P1,P1,P2,P3,（SQB）,1995 年承認 世界最初 PI,32,臨床使用 PI,（IDV）,（NFV）,（RTV）,（APV）,（ATV）,33,AIDS（HIV 感染症）対薬物療法,RTI（逆転写酵素阻害剤） 系（NRTI） AZT, ddl, ddC, 3T, d4T, ABC, PMPA 非系（NNRTI） NVP, EFV, DLV PI（阻害剤） IDV, SQV, RTV, NFV, APV, ATV HAART（highly active antiretroviral therapy） RTI （2 剤、最近 NRTI NNRTI 各 1 剤） PI （1 剤）併用 HAART 、潜伏感染細胞、HIV 低増殖持続 現在使用薬剤抱課題 長期投与毒性 薬物相互作用 耐性変異株出現,34,Nelfinavir（NFV）製法開発,創薬研究初期合成 中間体（遷移状態 部分）合成 研究 究極（？）製造,P1,P1,P2,Phe,Pro,Asn,HIV virus PR,35,Nelfinavir 創薬（初期製法）,Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,Cbz,36,3-Hydroxy-2-methylbenzoic acid 合成,37,3-Hydroxy-2-methylbenzoic acid,Inaba, T.; et al. J. Org. Chem. 1998, 63, 7582.,1 M aq H2SO4 (1.9 equiv),65 C (bath temp) 1.5 h,0.3 M aq NaNO2 (1.0 equiv), 5 C, 1 h,57 C (inner temp) 1 h,HSO4,HSO4,38,化,Na,(H2SO4),H,H2SO4,+,NaHSO4,+,+,+,H2O,+,H,+,H,+,+,H2O,39,塩加水分解,HSO4,NaNO2,HNO2,HSO4,H2SO4,H2SO4,HSO4,N2,H2O,40,(3S,4aS,8aS)-N-tert-Butyl- dcahydroisoquinoline-2-carboxamide,41,L-Phe 対 Pictet-Spengler 反応,Hilpert, H.; et al. Chimia. 1996, 50, 532.,CH2O aq HCl (high concentration) NH4OH,L-phenylalanine (Phe),(3S)-tetrahydroisoquinoline- 3-carboxylic acid,H,(little racemization),crystallization of free amino acid,optically pure material (70%),42,基保護同時基活性化,Hilpert, H.; et al. Chimia. 1996, 50, 532.,1.,2.,(80%),N-carboxyanhydride,43,核高温高圧接触還元,Hilpert, H.; et al. Chimia. 1996, 50, 532.,H2 Ru/Alox AcOEt,N-tert-Butyl-(3S,4aS,8aS)- decahydroisoquinoline-3-carboxamide,100150 bar 100150 C,(8085%),up to 94% selectivity,H,H,Ru,44,(2S,3R)-3-N-Benzyloxycarbonyl- amino-4-phenylthio-1-buteneoxide,Cbz,1,2,3,4,45,Nelfinavir 中間体逆合成,Cbz =,N-Cbz L-Serine,Nu,Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,46,(R)-N-Cbz-b-(Phenylthio)alanine,N-Cbz L-Ser (100 g),Ph3P (1.0 equiv),(1.0 equiv),-55 C rt,Na,MeO2CN=,2,(DMAD),Cbz = CO2CH2Ph,(1.0 equiv),NaH (60% in oil) (1.0 equiv),THF rt,rt,CH2Cl2 -55 C,THF,15 min,20 min,30 min,overnight,15 min,CH2Cl2/THF,2.5 h,20 min,(54 g, 39%),CH2Cl2,Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,47,分子内 Mitsunobu（光延）反応,Ph3P,DMAD,48,b-対求核的開裂反応,Na,Na,CH2Cl2,H2O,1 M aq NaHSO4,AcOEt,pH 2.5,AcOEt,酸性画分,中性画分,(39%),H2O,49,経由 a-調製,Et2O -20 C, 4 h,Cbz = CO2CH2Ph,HCl (gas),(73% after flash chromatog),Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,(1.5 equiv),Et3N (1.0 equiv) AcOEt dry ice-CCl4 cooling,(3.9 equiv),Et2O,dry ice-CCl4 cooling, 30 min,rt, 40 min,50,（diazomethene）調製,Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,Et2O,Na,OH,5 M aq NaOH (5.1 equiv),Na,HO,H2O,1-methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidine,KOH 乾燥後 CH2N2 Et2O 溶液使用,51,発生試薬,1-methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidine,N-methyl-N-nitroso-p-toluenesulfonamide,N-methyl-N-nitrosourea,52,混合酸無水物反応,Cbz = CO2CH2Ph,Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,R,(73% after flash chromatog),dry ice-CCl4 cooling (30 min) rt (40 min),53,塩化水素反応,Et2O -20 C, 4 h,HCl (gas),Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,Cbz = CO2CH2Ph,H,Cl,Cl,(white solid),54,a-立体選択的還元,NaBH4 (1.1 equiv) THF, ice-cooling,Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,flash chromatog (1) 02% MeOH in CH2Cl2 (2) 02% AcOEt in CHCl3,slower moving, major fraction,(39% from diazoketone),55,1,2-不斉誘起,THF, ice-cooling,NaBH4 (1.1 equiv),Cbz = CO2CH2Ph,H,Felkin-Anh ,56,変換（立体保持）,KOH (1.1 equiv),Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,flash chromatog (02% MeOH in CH2Cl2),(white solid, 85%),EtOH,ice-cooling,2 h,rt,57,対求核置換反応,Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,reflux,(1.1 equiv),Cbz = CO2CH2Ph,flash chromatog (020% AcOEt in CH2Cl2),(white solid, 40%),EtOH,8 h,58,第 1 級脱保護,Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,flash chromatog CHCl3 (3 drops of conc NH4OH/L) with 010% MeOH,(white foam, 71%),30% HBr/AcOH (40 v/w) rt, 1 h,concentration azeotroping with PhMe ( 3),Et2NH (2 v/w) conc NH4OH (2 v/w) MeOH (30 v/w),concentration extractive work-up,= Cbz,59,Cbz 基除去,Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,R,H,Br,30% HBr/AcOH,H,X,(X = Br, OAc),HX,S 触媒毒 Cbz 除去接触還元使,60,Nelfinavir 完成,Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,(1.0 equiv), H2O,(1.0 equiv),-10 C rt (overnight) rt, 48 h in total,(1.0 equiv),(white foam, 59%),Radial chromatog (1 mm plate) 3% MeOH in CH2Cl2),-10 C,THF,61,活性経由形成,1,3-dicyclohexylcarodiimide (DCC),1-hydroxybenzotriazole (HOBt),活性,62,Nelfinavir mesylate (Viracept),Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,CH2Cl2 0 C,MeSO3H (1.0 equiv) (1.0 M in CH2Cl2),(99%),salt precipitated,63,中間体創薬課題,Cbz = CO2CH2Ph,N-Cbz L-Serine,Reich, S. H.; et al. J. Med. Chem. 1997, 40, 3979.,光延反応 高価試薬 （MeO2CN=NCO2Me, Ph3P） 低温反応（b-形成）,増単反応（a-合成） 危険（CH2N2）使用 低温反応,1,2-不斉誘起 （ a-立体選択的還元） 副生,64,煩雑（増炭反応）曖昧（不斉誘起）,Ikunaka, M.; et al. Org. Process Res. Dev. 2002, 6, 49.,Reduction,Regioselective epoxide opening,Terminal differentiation,PhS,-,Cl,-,H3N,Na,Oxidative cleavage,65,D-Erythronolactone 調製,Dunigan, J.; Weigel, L. O. J. Org. Chem. 1991, 56, 6225.,30% aq H2O2 Na2CO3,conc HCl,(89%),Sodium erythorbate,Na,-,+,Na,-,+,D-Erythronolactone,66,酸化的開裂,Na,-,+,HO,HO,HO,Na,+,Na,+,Na,-,+,67,g-形成,Dunigan, J.; Weigel, L. O. J. Org. Chem. 1991, 56, 6225.,Na,-,+,conc HCl,HCl,NaCl,H,H,H2O,酸性室温脱水閉環,68,Methyl (2S,3R)-4-hydroxy-2,3-epoxybutyrate,Dunigan, J.; Weigel, L. O. J. Org. Chem. 1991, 56, 6225.,150 C,NaOMe, MeOH,100 C,(93%),(94%),基 a 位水酸基方反応性高,Ts,Cl,69,g-開環閉環,Dunigan, J.; Weigel, L. O. J. Org. Chem. 1991, 56, 6225.,NaOMe MeOH,100 C,(94%),Ts,Na,Na,MeO,Na,Na,70,位置選択的開環基導入,Manchand, P. S.; et al. J. Org. Chem. 1988, 53, 5507.,conc aq NH3 4850 C, 10 h,MeOH,NaOH (1.1 equiv)/MeOH,ice-cooling,6 h,12 C,overnight,Na,沈殿,Na,H3N,基活性化炭素位置選択的開環,処理副生,71,基保護（Cbz 化）,Na,Na,減圧濃縮,未反応 NH3,aq NaHCO3 (0.7 equiv),Cbz-Cl (1.0 equiv),Ice-cooling,510 C 5 h,Na,Ikunaka, M.; et al. Org. Process Res. Dev. 2002, 6, 49.,72,再化生成物単離,(0.5 equiv),Na,洗浄 (1) i-Pr2O 2. (2) PhMe-AcOEt (1:1) 3.,pH 3,2 M aq HCl, H2O,rt,rt overnight,AcOEt （抽出）,mp126129 C,63% (4 steps),Cbz,Ikunaka, M.; et al. Org. Process Res. Dev. 2002, 6, 49.,73,還元水酸基区別,Ca(BH4)2,PPTS,（定量的）,NaBH4 (4.0 equiv),MeOH,CaCl2 (2.0 equiv),NaCl,rt,4 h,MeOH, 30 C,HCl (10% in MeOH),pH 2,Ikunaka, M.; et al. Org. Process Res. Dev. 2002, 6, 49.,mp 126129 C,(72%),74,1,2-選択的化,PPTS (pyridinium p-toluenesulfonate) 強酸弱塩基塩弱酸性,H2O,2 H2O,Cbz = CO2CH2Ph,75,化（acetonide 形成）,H,+,